Verenkierrossa olevien kasvainsolujen (CTC) viljely ja karakterisointi melanoomassa ja muissa syövissä (CTC)

CTC:n ja rinta-, paksusuolen- ja eturauhassyöpien etenemisen välillä on havaittu vahva korrelaatio. CTC:n määrä näyttää toimivan prognostisena merkkinä uusiutumisen ja eloonjäämisen suhteen useissa epiteelisyövissä. Valitettavasti nykyiset CTC-määritykset eivät ole tehokkaita havaitsemaan luotettavasti kiertäviä melanoomasoluja, ja määritysmenetelmät vahingoittavat soluja estäen jatkotutkimuksen.

Tämä tutkimus on suunniteltu arvioimaan TrueCells-määrityksen herkkyyttä ja spesifisyyttä, joka on uusi lähestymistapa solujen eristämiseen ja säilyttämiseen jatkotutkimusta varten.

Ensisijaiset tavoitteet:

• Arvioi CTC:n eristämisen toteutettavuus ja toistettavuus TrueCells-teknologian avulla.
• Optimoi kvantitatiivinen CTC-palautus
• Toimita alustavat tiedot näiden mittausten korrelaatiosta muiden CTC:n talteenottomenetelmien kanssa, kuten immunofluoresenssi, lipidipohjainen värjäys.

Toissijaiset tavoitteet:

• Tutki immunofluoresoivan CTC-määrityksen ja TrueCells CTC -viljelmien korrelaatiota hoitovasteeseen objektiivisten ja immuunivastekriteerien, etenemisvapaan eloonjäämisen, 1 ja 2 vuoden eloonjäämisen maamerkkien sekä syöpäpotilaiden kokonaiseloonjäämisen kanssa.
• Pyri eristämään pitkäaikaisia ​​kasvainsolulinjoja somaattisten geenimutaatioiden sekä yksittäisiin kasvaimiin liittyvien geenien ja proteiinien ilmentymismallien arvioimiseksi (ei tarkoitettu tunnistamaan familiaalisia tai perinnöllisiä mutaatioita) sekä testaamaan lääke- ja biologista herkkyyttä.
• Eristä plasman RNA ja DNA kasvainspesifisten markkerien (esim. tyrosinaasi, B-FRAF, V600E jne.) ja etäpesäkkeisiin liittyvien geenien (esim. MSH-1, tymidylaattisyntaasi jne.) ekspression arvioimiseksi.
• Suorita jatkuva kehitystestaus jatkaaksesi uusien teknisten lähestymistapojen kehittämistä ja optimointia ehjän CTC:n eristämisen helpottamiseksi.

Menetelmät:

Verinäytteitä otetaan potilailta, joilla on melanooma (200), eturauhassyöpä (200), muut kiinteät kasvainsyövät (enintään 400), hyvänlaatuiset hematologiset sairaudet (100) ja terveiltä vapaaehtoisilta (enintään 100). Valituilta potilailta otetaan peräkkäiset näytteet taudin etenemisen tai hoitovasteen aikana, jotta voidaan tutkia CTC:n mahdollista korrelaatiota hoitovasteen, etenemisvapaan eloonjäämisen ja kokonaiseloonjäämisen kanssa. Näytteiden tunniste poistetaan välittömästi ja niille annetaan numeerinen koodi, päiväys ja lähetys TrueCells, LLC:lle. Lahjoituksen jälkeen näytteen omistusoikeus siirtyy TrueCells, LLC:lle.

Tutkimustutkimuksia ovat mm.

• CTC laskettiin itsenäisesti käyttämällä immunofluoresoivaa värjäystä paksusta siveleestä, joka on valmistettu kahden veriputken (putket 1 ja 2) koko buffy coatista, värjätty sopivalla primaarisella yleiskasvaimen monoklonaalisella vasta-aineella tai lipidimarkkerilla, joissa on vahvistavia sekundaarisia vasta-aineita, jotta voidaan sulkea pois leukosyyttien ja endoteelin tahaton inkluusio. osaryhmiä ja varmistaa potilaan syövän tunnistaminen.
• Leukosyytit (sisältävät CTC:tä), jotka on eristetty tiheysgradienttisentrifugoinnilla. Buffy coat maljataan TrueCellsin patentoituun soluviljelyalustaan ​​ja kasvainsoluja kasvatetaan ja lisätään (putket 3 ja 4). Solupesäkkeet lueteltu ja verrattu immunofluoresoivalla värjäyksellä tunnistettujen pesäkkeiden lukumäärään.
• Joissakin tapauksissa CTC:tä voidaan kasvattaa pitkäaikaisina solulinjoina. Näille soluille voidaan tehdä lisäanalyysi, kuten somaattisten geenimutaatioiden sekä geenien ja proteiinien ilmentymismallien arviointi yksittäisten kasvainten ominaisuuksien sekä lääke- ja biologisen aineen herkkyyden tunnistamiseksi. Näille de-identifioiduille varhaisen siirrostuksen solulinjoille, joita ei ole vielä tunnistettu tai joita ei ole odotettu tässä hakemuksessa, voi olla uusia in vitro -kokeellisia sovelluksia.
• Plasma (leukosyyttien eristysprosessin sivutuote putkista 3 ja 4) kerätään ja jäädytetään väliaikaisesti DNA- ja RNA-eristystä varten melanooman molekyylimarkkerien ja metastaattisten geenien ilmentymisen molekyylimäärityksiä varten. Nämä näytteet kulutetaan määritysmenettelyssä.

Kliiniset tiedot poistetaan lääketieteellisistä tiedoista ja ne poistetaan ja tallennetaan salasanalla suojattuun laskentataulukkoon. Kerättäviin tietoihin kuuluvat ikä, sukupuoli, T-, N-, M-status, muut terveystilat, seerumin LDH, mitkä tahansa spesifiset kasvainmarkkerit (esim. PSA), kiertävät kasvainsolut (jos analysoidaan kaupallisella määrityksellä), syövässä esiintyvät somaattiset geneettiset mutaatiot (esim. B-RAF V600E melanoomapotilailla) kasvaimen mitoottinen määrä, kasvaindiagnoosin päivämäärä, hoitohistoria, alueellisen ja metastaattisen etenemisen päivämäärä ja kuolinpäivämäärä (tarvittaessa).