Cultura e caratterizzazione delle cellule tumorali circolanti (CTC) nel melanoma e in altri tumori (CTC)

È stata stabilita una forte correlazione tra CTC e la progressione dei tumori al seno, al colon e alla prostata. Il numero di CTC sembra agire come marcatore prognostico di recidiva e sopravvivenza in un certo numero di tumori epiteliali. Sfortunatamente, gli attuali test CTC non sono efficaci nel rilevare in modo affidabile le cellule di melanoma circolanti e le procedure di analisi danneggiano le cellule impedendo ulteriori studi.

Questo studio è progettato per valutare la sensibilità e la specificità del saggio TrueCells, un nuovo approccio per isolare e preservare le cellule per ulteriori ricerche.

Obiettivi primari:

• Valutare la fattibilità e la riproducibilità dell'isolamento di CTC utilizzando la tecnologia TrueCells.
• Ottimizza il recupero CTC quantitativo
• Fornire dati preliminari riguardanti la correlazione di queste misurazioni con altri metodi di recupero CTC come l'immunofluorescenza, la colorazione basata sui lipidi.

Obiettivi secondari:

• Esplora la correlazione del test CTC immunofluorescente e delle colture TrueCells CTC con la risposta al trattamento in base a criteri oggettivi e di risposta immunitaria, sopravvivenza libera da progressione, punti di riferimento di sopravvivenza a 1 e 2 anni e sopravvivenza globale nei pazienti oncologici.
• Tentativo di isolare linee di cellule tumorali a lungo termine per la valutazione di mutazioni geniche somatiche e modelli di espressione genica e proteica relativi a singoli tumori (non destinati a identificare mutazioni familiari o ereditarie) e per testare farmaci e sensibilità biologica.
• Isolare l'RNA e il DNA del plasma per valutare marcatori specifici del tumore di espressione (ad esempio, tirosinasi, B-FRAF, V600E, ecc.) e geni associati alla metastasi (ad esempio, MSH-1, timidilato sintasi, ecc.).
• Eseguire test di sviluppo in corso per continuare a sviluppare e ottimizzare nuovi approcci tecnici per facilitare l'isolamento di CTC intatte.

Metodi:

Saranno raccolti campioni di sangue da pazienti con melanoma (200), cancro alla prostata (200), altri tumori solidi (fino a 400), condizioni ematologiche benigne (100) e volontari sani (fino a 100). Saranno ottenuti campioni sequenziali da pazienti selezionati durante la progressione della malattia o la risposta al trattamento per consentire l'esplorazione della potenziale correlazione di CTC con la risposta al trattamento, la sopravvivenza libera da progressione e la sopravvivenza globale. I campioni verranno immediatamente resi anonimi e assegnati a un codice numerico, datati e inviati a TrueCells, LLC. Una volta donato, la proprietà del campione passa a TrueCells, LLC.

Gli studi di ricerca includono:

• CTC conteggiato in modo indipendente utilizzando la colorazione immunofluorescente di uno striscio spesso preparato dall'intero buffy coat di due provette di sangue (provette 1 e 2), colorato con un appropriato anticorpo monoclonale pan-tumorale primario o marcatori lipidici con anticorpi secondari di conferma per escludere l'inclusione involontaria di leucociti ed endoteliali sottoinsiemi e verificare il riconoscimento del cancro del paziente.
• Leucociti (contenenti CTC) isolati mediante centrifugazione in gradiente di densità. Il buffy coat viene placcato nel terreno di coltura cellulare proprietario TrueCells e le cellule tumorali vengono coltivate e propagate (tubi 3 e 4). Colonie cellulari enumerate e confrontate con il numero di colonie identificate mediante colorazione immunofluorescente.
• In alcuni casi, le CTC possono essere coltivate come linee cellulari a lungo termine. Queste cellule possono essere soggette a ulteriori analisi come la valutazione delle mutazioni geniche somatiche e dei modelli di espressione genica e proteica per identificare le caratteristiche dei singoli tumori e la sensibilità ai farmaci e agli agenti biologici. Potrebbero esserci ulteriori future applicazioni sperimentali in vitro per queste linee cellulari a passaggio precoce deidentificate che non sono state ancora identificate o anticipate in questa domanda.
• Il plasma (sottoprodotto del processo di isolamento dei leucociti dalle provette 3 e 4) sarà raccolto e temporaneamente congelato per l'isolamento del DNA e dell'RNA per i saggi molecolari dei marcatori molecolari del melanoma e dell'espressione genica metastatica. Questi campioni vengono consumati nella procedura di analisi.

Le informazioni cliniche saranno estratte dalle cartelle cliniche e anonimizzate e archiviate in un foglio di calcolo protetto da password. Le informazioni da raccogliere includono età, sesso, stato T, N, M, altre condizioni di salute, LDH sierico, eventuali marcatori tumorali specifici (ad es. PSA), cellule tumorali circolanti (se analizzate mediante test commerciale), mutazioni genetiche somatiche presenti nel cancro (ad es. B-RAF V600E nei pazienti con melanoma) tasso mitotico del tumore, data della diagnosi del tumore, storia del trattamento, data della progressione regionale e metastatica e data del decesso (se applicabile).