黑色素瘤和其他癌症中循环肿瘤细胞 (CTC) 的培养和表征 (CTC)

CTC 与乳腺癌、结肠癌和前列腺癌的进展之间已经建立了很强的相关性。 CTC 的数量似乎是许多上皮癌复发和存活的预后标志。 不幸的是，目前的 CTC 检测不能有效地可靠地检测循环黑色素瘤细胞，并且检测程序会破坏细胞，从而阻碍进一步研究。

本研究旨在评估 TrueCells 检测的灵敏度和特异性，TrueCells 检测是一种分离和保存细胞以供进一步研究的新方法。

主要目标：

• 评估使用 TrueCells 技术分离 CTC 的可行性和可重复性。
• 优化定量 CTC 回收
• 提供有关这些测量与其他 CTC 恢复方法（如免疫荧光、脂质染色）相关性的初步数据。

次要目标：

• 通过客观和免疫反应标准探索免疫荧光 CTC 检测和 TrueCells CTC 培养与治疗反应、无进展生存期、1 年和 2 年生存期标志以及癌症患者总生存期的相关性。
• 尝试分离长期肿瘤细胞系以评估体细胞基因突变，以及与个体肿瘤相关的基因和蛋白质表达模式（并非旨在识别家族性或遗传性突变），并测试药物和生物敏感性。
• 分离血浆 RNA 和 DNA 以评估肿瘤特异性标记物（例如酪氨酸酶、B-FRAF、V600E 等）和转移相关基因（例如 MSH-1、胸苷酸合酶等）的表达。
• 进行持续的开发测试，以继续开发和优化新技术方法，以促进完整 CTC 的分离。

方法：

血液样本将从黑色素瘤 (200)、前列腺癌 (200)、其他实体瘤癌症 (最多 400)、良性血液病 (100) 和健康志愿者 (最多 100) 患者中采集。 将在疾病进展或治疗反应期间从选定患者中获取连续样本，以探索 CTC 与治疗反应、无进展生存期和总生存期的潜在相关性。 样品将立即去识别化并分配一个数字代码，注明日期并发送给 TrueCells, LLC。 捐赠后，样本所有权将转移给 TrueCells, LLC。

研究包括：

• CTC 使用厚涂片的免疫荧光染色独立计数，厚涂片由两管血液（管 1 和 2）的整个血沉棕黄层制备，用适当的原发性泛肿瘤单克隆抗体或脂质标记物染色，并带有确认性二抗，以排除无意中包含的白细胞和内皮细胞子集并验证对患者癌症的识别。
• 通过密度梯度离心分离的白细胞（含有 CTC）。 将血沉棕黄层接种到 TrueCells 专有细胞培养基中，肿瘤细胞生长和繁殖（管 3 和 4）。 计数细胞集落并与通过免疫荧光染色鉴定的集落数进行比较。
• 在某些情况下，CTC 可能能够作为长期细胞系生长。 可以对这些细胞进行进一步分析，例如评估体细胞基因突变以及基因和蛋白质表达模式，以确定个体肿瘤的特征以及药物和生物制剂敏感性。 这些去识别化的早期传代细胞系在本申请中尚未确定或预期，未来可能会有更多的体外实验应用。
• 将收集血浆（从试管 3 和 4 分离白细胞过程的副产品）并暂时冷冻，用于 DNA 和 RNA 分离，用于黑色素瘤分子标记和转移基因表达的分子检测。 这些样品在测定过程中被消耗掉。

临床信息将从医疗记录中提取出来并去除身份信息，并存储在受密码保护的电子表格中。 要收集的信息包括年龄、性别、T、N、M 状态、其他健康状况、血清 LDH、任何特定肿瘤标志物（例如 PSA）、循环肿瘤细胞（如果通过商业化验分析）、癌症中存在的体细胞基因突变（例如 黑色素瘤患者中的 B-RAF V600E）肿瘤有丝分裂率、肿瘤诊断日期、治疗史、区域和转移进展日期以及死亡日期（如果适用）。