A keringő daganatsejtek (CTC) tenyésztése és jellemzése melanómában és más rákban (CTC)

Erős korrelációt állapítottak meg a CTC és az emlő-, vastagbél- és prosztatarák progressziója között. Úgy tűnik, hogy a CTC száma számos hámrák esetében prognosztikai markerként működik a visszaesés és a túlélés tekintetében. Sajnos a jelenlegi CTC-vizsgálatok nem hatékonyak a keringő melanomasejtek megbízható kimutatásában, és a vizsgálati eljárások károsítják a sejteket, ami megakadályozza a további vizsgálatokat.

Ez a tanulmány a TrueCells assay érzékenységét és specificitását hivatott értékelni, amely egy újszerű megközelítés a sejtek izolálására és megőrzésére további kutatás céljából.

Elsődleges célok:

• Értékelje a CTC izolálásának megvalósíthatóságát és reprodukálhatóságát a TrueCells technológia segítségével.
• Optimalizálja a mennyiségi CTC helyreállítást
• Adjon előzetes adatokat ezen mérések más CTC-visszanyerési módszerekkel, például immunfluoreszcenciával, lipid alapú festéssel való korrelációjáról.

Másodlagos célok:

• Fedezze fel az immunfluoreszcens CTC vizsgálat és a TrueCells CTC tenyészetek összefüggését a kezelésre adott válaszokkal objektív és immunválasz kritériumok, a progressziómentes túlélés, az 1 és 2 éves túlélés mérföldkövei, valamint a rákos betegek általános túlélése alapján.
• Kísérlet hosszú távú tumorsejtvonalak izolálására a szomatikus génmutációk, valamint az egyes daganatokhoz kapcsolódó gén- és fehérjeexpressziós minták értékelésére (nem a családi vagy öröklött mutációk azonosítására szolgál), valamint a gyógyszer- és biológiai érzékenység tesztelésére.
• Izoláljon plazma RNS-t és DNS-t a tumorspecifikus markerek (pl. tirozináz, B-FRAF, V600E stb.) és a metasztázishoz kapcsolódó gének (például MSH-1, timidilát-szintáz stb.) expressziójának értékeléséhez.
• Folyamatos fejlesztési tesztelések végrehajtása az új technikai megközelítések fejlesztésének és optimalizálásának folytatásához az érintetlen CTC izolálásának megkönnyítése érdekében.

Mód:

Vérmintákat vesznek melanómás (200), prosztatarákos (200), egyéb szolid daganatos (legfeljebb 400), jóindulatú hematológiai állapotú (100) és egészséges önkéntesektől (legfeljebb 100). A kiválasztott betegektől szekvenciális mintákat vesznek a betegség progressziója vagy a kezelésre adott válasz során, hogy lehetővé tegyék a CTC és a kezelésre adott válasz, a progressziómentes túlélés és a teljes túlélés lehetséges korrelációjának feltárását. A minták azonosítása azonnal megtörténik, és numerikus kódot rendelnek hozzá, dátumozzák, és elküldik a TrueCells, LLC-nek. Az adományozást követően a minta tulajdonjoga átszáll a TrueCells, LLC-re.

A kutatási tanulmányok a következőket tartalmazzák:

• A CTC-t egymástól függetlenül számolták, két cső (1. és 2. cső) teljes buffy bevonatából készült vastag kenet immunfluoreszcens festésével, megfelelő primer pan-tumor monoklonális antitesttel vagy lipid markerekkel festve megerősítő másodlagos antitestekkel, hogy kizárják a leukocita és endoteliális véletlen beépülését. részhalmazokat, és ellenőrizze a beteg rákfelismerését.
• Sűrűséggradiens centrifugálással izolált (CTC-t tartalmazó) leukociták. A buffy coat-ot TrueCells szabadalmaztatott sejttenyésztő tápközegbe szélesztjük, és a tumorsejteket növesztjük és szaporítjuk (3. és 4. cső). A sejttelepek számbavétele és összehasonlítása az immunfluoreszcens festéssel azonosított telepek számával.
• Egyes esetekben a CTC hosszú távú sejtvonalként termeszthető. Ezeket a sejteket további elemzésnek vethetik alá, például a szomatikus génmutációk értékelését, valamint a gén- és fehérjeexpressziós mintákat, hogy azonosítsák az egyes daganatok jellemzőit, valamint a gyógyszer- és biológiai szerérzékenységet. Lehetnek további jövőbeni in vitro kísérleti alkalmazások ezeknek az azonosítatlan korai passzázs sejtvonalaknak, amelyeket még nem azonosítottak vagy nem vártak ebben az alkalmazásban.
• A plazmát (a leukocita izolálási folyamat melléktermékét a 3. és 4. csőből) összegyűjtik és ideiglenesen lefagyasztják DNS- és RNS-izolálás céljából a melanoma molekuláris markerek és a metasztatikus génexpresszió molekuláris vizsgálatához. Ezeket a mintákat a vizsgálati eljárás során felhasználják.

A klinikai információkat kivonják az orvosi feljegyzésekből, azonosítják őket, és jelszóval védett táblázatban tárolják. Az összegyűjtendő információk közé tartozik az életkor, a nem, a T, N, M állapot, egyéb egészségi állapotok, a szérum LDH, bármely specifikus tumormarker (pl. PSA), keringő daganatsejtek (ha kereskedelmi vizsgálattal elemezték), rákban jelenlévő szomatikus genetikai mutációk (pl. B-RAF V600E melanómás betegekben) a daganat mitotikus aránya, a daganat diagnózisának dátuma, a kezelési előzmények, a regionális és metasztatikus progresszió dátuma és a halálozás dátuma (ha van).