Cultivo y caracterización de células tumorales circulantes (CTC) en melanoma y otros tipos de cáncer (CTC)

Se ha establecido una fuerte correlación entre la CTC y la progresión de los cánceres de mama, colon y próstata. El número de CTC parece actuar como un marcador pronóstico de recaída y supervivencia en varios cánceres epiteliales. Desafortunadamente, los ensayos de CTC actuales no son efectivos para detectar de forma fiable las células de melanoma circulantes y los procedimientos de ensayo dañan las células, lo que impide realizar más estudios.

Este estudio está diseñado para evaluar la sensibilidad y la especificidad del ensayo TrueCells, un enfoque novedoso para aislar y conservar células para futuras investigaciones.

Objetivos principales:

• Evaluar la viabilidad y la reproducibilidad del aislamiento de CTC mediante la tecnología TrueCells.
• Optimice la recuperación cuantitativa de CTC
• Proporcione datos preliminares sobre la correlación de estas mediciones con otros métodos de recuperación de CTC, como inmunofluorescencia, tinción basada en lípidos.

Objetivos secundarios:

• Explore la correlación del ensayo de CTC inmunofluorescente y los cultivos de CTC TrueCells con la respuesta al tratamiento según criterios objetivos y de respuesta inmunitaria, supervivencia libre de progresión, puntos de referencia de supervivencia de 1 y 2 años y supervivencia general en pacientes con cáncer.
• Intentar aislar líneas de células tumorales a largo plazo para la evaluación de mutaciones genéticas somáticas y patrones de expresión de genes y proteínas relacionados con tumores individuales (no pretende identificar mutaciones familiares o heredadas), y para probar la sensibilidad biológica y de fármacos.
• Aísle el ARN y el ADN del plasma para evaluar la expresión de marcadores específicos del tumor (p. ej., tirosinasa, B-FRAF, V600E, etc.) y genes asociados a la metástasis (p. ej., MSH-1, timidilato sintasa, etc.).
• Realice pruebas de desarrollo continuas para continuar desarrollando y optimizar enfoques técnicos novedosos para facilitar el aislamiento de CTC intacto.

Métodos:

Se recolectarán muestras de sangre de pacientes con melanoma (200), cáncer de próstata (200), otros cánceres de tumores sólidos (hasta 400), afecciones hematológicas benignas (100) y voluntarios sanos (hasta 100). Se obtendrán muestras secuenciales de pacientes seleccionados durante la progresión de la enfermedad o la respuesta al tratamiento para permitir la exploración de la posible correlación de CTC con la respuesta al tratamiento, la supervivencia libre de progresión y la supervivencia general. Las muestras se desidentificarán inmediatamente y se les asignará un código numérico, se fecharán y se enviarán a TrueCells, LLC. Una vez donada, la propiedad de la muestra pasa a TrueCells, LLC.

Los estudios de investigación incluyen:

• Los CTC se contaron de forma independiente mediante tinción inmunofluorescente de un frotis grueso preparado a partir de la capa leucocítica completa de dos tubos de sangre (tubos 1 y 2), teñidos con un anticuerpo monoclonal pantumoral primario adecuado o marcadores lipídicos con anticuerpos secundarios confirmatorios para excluir la inclusión inadvertida de leucocitos y células endoteliales. subconjuntos y verificar el reconocimiento del cáncer del paciente.
• Leucocitos (que contienen CTC) aislados por centrifugación en gradiente de densidad. La capa leucocitaria se coloca en placa en el medio de cultivo celular patentado de TrueCells y las células tumorales se cultivan y propagan (tubos 3 y 4). Colonias de células enumeradas y comparadas con el número de colonias identificadas mediante tinción inmunofluorescente.
• En algunos casos, CTC puede crecer como líneas celulares a largo plazo. Estas células pueden estar sujetas a análisis adicionales, como la evaluación de mutaciones genéticas somáticas, así como patrones de expresión de genes y proteínas para identificar características de tumores individuales, así como sensibilidad a fármacos y agentes biológicos. Puede haber futuras aplicaciones experimentales in vitro adicionales para estas líneas celulares de paso temprano no identificadas que aún no han sido identificadas o anticipadas en esta solicitud.
• El plasma (subproducto del proceso de aislamiento de leucocitos de los tubos 3 y 4) se recolectará y congelará temporalmente para el aislamiento de ADN y ARN para ensayos moleculares de marcadores moleculares de melanoma y expresión génica metastásica. Estas muestras se consumen en el procedimiento de ensayo.

La información clínica se extraerá de los registros médicos y se anonimizará y almacenará en una hoja de cálculo protegida con contraseña. La información que se recopila incluye edad, sexo, estado T, N, M, otras condiciones de salud, LDH sérica, cualquier marcador tumoral específico (p. PSA), células tumorales circulantes (si se analizan mediante un ensayo comercial), mutaciones genéticas somáticas presentes en el cáncer (p. B-RAF V600E en pacientes con melanoma) tasa mitótica del tumor, fecha de diagnóstico del tumor, historial de tratamiento, fecha de progresión regional y metastásica y fecha de muerte (si corresponde).