Culture et caractérisation des cellules tumorales circulantes (CTC) dans le mélanome et d'autres cancers (CTC)

Une forte corrélation a été établie entre le CTC et la progression des cancers du sein, du côlon et de la prostate. Le nombre de CTC semble agir comme un marqueur pronostique de rechute et de survie dans un certain nombre de cancers épithéliaux. Malheureusement, les tests CTC actuels ne sont pas efficaces pour détecter de manière fiable les cellules de mélanome en circulation et les procédures de test endommagent les cellules interdisant une étude plus approfondie.

Cette étude est conçue pour évaluer la sensibilité et la spécificité du test TrueCells, une nouvelle approche pour isoler et préserver les cellules pour des recherches ultérieures.

Objectifs principaux:

• Évaluer la faisabilité et la reproductibilité de l'isolement du CTC à l'aide de la technologie TrueCells.
• Optimiser la récupération quantitative de CTC
• Fournir des données préliminaires concernant la corrélation de ces mesures avec d'autres méthodes de récupération de CTC telles que l'immunofluorescence, la coloration à base de lipides.

Objectifs secondaires :

• Explorez la corrélation entre le test immunofluorescent CTC et les cultures TrueCells CTC avec la réponse au traitement selon des critères objectifs et de réponse immunitaire, la survie sans progression, les repères de survie à 1 et 2 ans et la survie globale chez les patients atteints de cancer.
• Tenter d'isoler des lignées cellulaires tumorales à long terme pour évaluer les mutations de gènes somatiques et les modèles d'expression de gènes et de protéines liés à des tumeurs individuelles (non destinés à identifier des mutations familiales ou héréditaires) et pour tester la sensibilité aux médicaments et aux produits biologiques.
• Isoler l'ARN plasmatique et l'ADN pour évaluer l'expression des marqueurs spécifiques à la tumeur (par exemple, tyrosinase, B-FRAF, V600E, etc.) et les gènes associés aux métastases (par exemple, MSH-1, thymidylate synthase, etc.).
• Effectuer des tests de développement continus pour continuer à développer et optimiser de nouvelles approches techniques pour faciliter l'isolement du CTC intact.

Méthodes :

Des échantillons de sang seront prélevés sur des patients atteints de mélanome (200), de cancer de la prostate (200), d'autres cancers à tumeur solide (jusqu'à 400), d'affections hématologiques bénignes (100) et de volontaires sains (jusqu'à 100). Des échantillons séquentiels seront obtenus à partir de patients sélectionnés au cours de la progression de la maladie ou de la réponse au traitement afin de permettre l'exploration de la corrélation potentielle du CTC avec la réponse au traitement, la survie sans progression et la survie globale. Les échantillons seront immédiatement anonymisés et se verront attribuer un code numérique, daté et envoyé à TrueCells, LLC. Une fois donné, la propriété de l'échantillon passe à TrueCells, LLC.

Les études de recherche comprennent:

• Le CTC a été compté indépendamment à l'aide d'une coloration immunofluorescente d'un frottis épais préparé à partir d'une couche leucocytaire entière de deux tubes de sang (tubes 1 et 2), coloré avec un anticorps monoclonal pan-tumoral primaire approprié ou des marqueurs lipidiques avec des anticorps secondaires de confirmation pour exclure l'inclusion par inadvertance de leucocytes et d'endothéliums sous-ensembles et vérifier la reconnaissance du cancer du patient.
• Leucocytes (contenant du CTC) isolés par centrifugation en gradient de densité. La couche leucocytaire est plaquée dans le milieu de culture cellulaire propriétaire de TrueCells et les cellules tumorales sont cultivées et propagées (tubes 3 et 4). Colonies cellulaires dénombrées et comparées au nombre de colonies identifiées par coloration immunofluorescente.
• Dans certains cas, le CTC peut être cultivé sous forme de lignées cellulaires à long terme. Ces cellules peuvent être soumises à une analyse plus approfondie telle que l'évaluation des mutations géniques somatiques ainsi que des modèles d'expression génique et protéique pour identifier les caractéristiques des tumeurs individuelles ainsi que la sensibilité aux médicaments et aux agents biologiques. Il peut y avoir d'autres applications expérimentales in vitro futures pour ces lignées cellulaires à passage précoce désidentifiées qui n'ont pas encore été identifiées ou anticipées dans cette application.
• Le plasma (sous-produit du processus d'isolement des leucocytes des tubes 3 et 4) sera collecté et temporairement congelé pour l'isolement de l'ADN et de l'ARN pour les dosages moléculaires des marqueurs moléculaires du mélanome et l'expression des gènes métastatiques. Ces échantillons sont consommés dans la procédure de dosage.

Les informations cliniques seront extraites des dossiers médicaux, anonymisées et stockées dans une feuille de calcul protégée par un mot de passe. Les informations à collecter incluent l'âge, le sexe, le statut T, N, M, d'autres problèmes de santé, la LDH sérique, tout marqueur tumoral spécifique (par ex. PSA), cellules tumorales circulantes (si elles sont analysées par un test commercial), mutations génétiques somatiques présentes dans le cancer (par ex. B-RAF V600E chez les patients atteints de mélanome) taux mitotique de la tumeur, date du diagnostic de la tumeur, historique du traitement, date de la progression régionale et métastatique et date du décès (le cas échéant).