Kultur und Charakterisierung zirkulierender Tumorzellen (CTC) bei Melanomen und anderen Krebsarten (CTC)

Es wurde eine starke Korrelation zwischen CTC und dem Fortschreiten von Brust-, Dickdarm- und Prostatakrebs festgestellt. Die Zahl der CTC scheint bei einer Reihe von Epithelkarzinomen als prognostischer Marker für Rückfall und Überleben zu fungieren. Unglücklicherweise sind derzeitige CTC-Assays nicht wirksam beim zuverlässigen Nachweis zirkulierender Melanomzellen, und die Assayverfahren schädigen Zellen, was weitere Untersuchungen verhindert.

Diese Studie soll die Sensitivität und Spezifität des TrueCells-Assays bewerten, eines neuartigen Ansatzes zur Isolierung und Konservierung von Zellen für die weitere Forschung.

Hauptziele:

• Bewerten Sie die Machbarkeit und Reproduzierbarkeit der Isolierung von CTC mit der TrueCells-Technologie.
• Optimieren Sie die quantitative CTC-Rückgewinnung
• Geben Sie vorläufige Daten zur Korrelation dieser Messungen mit anderen Methoden der CTC-Wiederherstellung, wie z. B. Immunfluoreszenz, lipidbasierte Färbung, an.

Sekundäre Ziele:

• Untersuchen Sie die Korrelation des Immunfluoreszenz-CTC-Assays und der CTC-Kulturen von TrueCells mit dem Ansprechen auf die Behandlung nach objektiven Kriterien und Kriterien der Immunantwort, dem progressionsfreien Überleben, den 1- und 2-Jahres-Überlebensmerkmalen und dem Gesamtüberleben bei Krebspatienten.
• Versuchen Sie, Langzeit-Tumorzelllinien zur Bewertung von somatischen Genmutationen und Gen- und Proteinexpressionsmustern im Zusammenhang mit einzelnen Tumoren zu isolieren (nicht dazu bestimmt, familiäre oder vererbte Mutationen zu identifizieren) und um die Arzneimittel- und biologische Empfindlichkeit zu testen.
• Isolieren Sie Plasma-RNA und -DNA, um tumorspezifische Expressionsmarker (z. B. Tyrosinase, B-FRAF, V600E usw.) und Metastasen-assoziierte Gene (z. B. MSH-1, Thymidylatsynthase usw.) zu bewerten.
• Führen Sie fortlaufende Entwicklungstests durch, um weiterhin neuartige technische Ansätze zu entwickeln und zu optimieren, um die Isolierung intakter CTC zu erleichtern.

Methoden:

Blutproben werden von Patienten mit Melanomen (200), Prostatakrebs (200), anderen soliden Tumoren (bis zu 400), gutartigen hämatologischen Zuständen (100) und gesunden Freiwilligen (bis zu 100) entnommen. Sequentielle Proben werden von ausgewählten Patienten während des Fortschreitens der Krankheit oder des Ansprechens auf die Behandlung entnommen, um die Untersuchung einer möglichen Korrelation von CTC mit dem Ansprechen auf die Behandlung, dem progressionsfreien Überleben und dem Gesamtüberleben zu ermöglichen. Die Proben werden sofort anonymisiert und mit einem numerischen Code versehen, datiert und an TrueCells, LLC gesendet. Nach der Spende geht das Probeneigentum auf TrueCells, LLC über.

Zu den Forschungsstudien gehören:

• CTC unabhängig gezählt durch Immunfluoreszenzfärbung eines dicken Abstrichs, der aus dem gesamten Buffy Coat von zwei Blutröhrchen (Röhrchen 1 und 2) hergestellt und mit geeigneten primären monoklonalen Pan-Tumor-Antikörpern oder Lipidmarkern mit bestätigenden sekundären Antikörpern gefärbt wurde, um einen versehentlichen Einschluss von Leukozyten und Endothelzellen auszuschließen Teilmengen und überprüfen Sie die Erkennung des Krebses des Patienten.
• Durch Dichtegradientenzentrifugation isolierte Leukozyten (mit CTC). Der Buffy Coat wird in TrueCells proprietäres Zellkulturmedium plattiert und Tumorzellen gezüchtet und vermehrt (Röhrchen 3 & 4). Die Zellkolonien wurden gezählt und mit der Anzahl der durch Immunfluoreszenzfärbung identifizierten Kolonien verglichen.
• In einigen Fällen können CTC möglicherweise als langfristige Zelllinien gezüchtet werden. Diese Zellen können einer weiteren Analyse unterzogen werden, wie z. B. der Bewertung von somatischen Genmutationen sowie von Gen- und Proteinexpressionsmustern, um Charakteristika einzelner Tumore sowie die Empfindlichkeit gegenüber Arzneimitteln und biologischen Mitteln zu identifizieren. Es kann weitere zukünftige experimentelle In-vitro-Anwendungen für diese nicht identifizierten Zelllinien der frühen Passage geben, die in dieser Anwendung noch nicht identifiziert oder erwartet wurden.
• Plasma (Nebenprodukt des Leukozyten-Isolierungsprozesses aus den Röhrchen 3 und 4) wird gesammelt und vorübergehend für die DNA- und RNA-Isolierung für molekulare Assays von Melanom-Molekularmarkern und metastatischer Genexpression eingefroren. Diese Proben werden im Testverfahren verbraucht.

Klinische Informationen werden aus Krankenakten extrahiert und anonymisiert und in einer passwortgeschützten Tabelle gespeichert. Zu sammelnde Informationen umfassen Alter, Geschlecht, T-, N-, M-Status, andere Gesundheitszustände, Serum-LDH, alle spezifischen Tumormarker (z. PSA), zirkulierende Tumorzellen (falls durch kommerzielle Assays analysiert), somatische genetische Mutationen, die bei Krebs vorhanden sind (z. B-RAF V600E bei Melanompatienten) Mitoserate des Tumors, Datum der Tumordiagnose, Behandlungshistorie, Datum der regionalen und metastasierten Progression und Todesdatum (falls zutreffend).