흑색종 및 기타 암에서 순환 종양 세포(CTC)의 배양 및 특성화 (CTC)

CTC와 유방암, 결장암 및 전립선암의 진행 사이에 강한 상관관계가 확립되었습니다. CTC의 수는 다수의 상피암에서 재발 및 생존에 대한 예후 마커로 작용하는 것으로 보입니다. 불행하게도, 현재의 CTC 분석법은 순환하는 흑색종 세포를 확실하게 검출하는 데 효과적이지 않으며 분석 절차는 추가 연구를 금지하는 세포를 손상시킵니다.

이 연구는 추가 연구를 위해 세포를 분리하고 보존하는 새로운 접근 방식인 TrueCells 분석의 민감도와 특이성을 평가하기 위해 고안되었습니다.

주요 목표:

• TrueCells 기술을 사용하여 CTC 분리의 타당성과 재현성을 평가합니다.
• 정량적 CTC 회수 최적화
• 면역형광, 지질 기반 염색과 같은 다른 CTC 복구 방법과 이러한 측정의 상관관계에 관한 예비 데이터를 제공합니다.

보조 목표:

• 면역형광 CTC 분석과 TrueCells CTC 배양의 상관관계를 객관적 및 면역 반응 기준에 의한 치료에 대한 반응, 무진행 생존, 1년 및 2년 생존 랜드마크, 암 환자의 전체 생존과 연관시킵니다.
• 체세포 유전자 돌연변이, 개별 종양과 관련된 유전자 및 단백질 발현 패턴(가족 또는 유전 돌연변이를 식별하기 위한 것이 아님)을 평가하고 약물 및 생물학적 민감도를 테스트하기 위해 장기 종양 세포주를 분리하려고 시도합니다.
• 발현 종양 특이적 마커(예: 티로시나제, B-FRAF, V600E 등) 및 전이 관련 유전자(예: MSH-1, 티미딜레이트 신타제 등)를 평가하기 위해 혈장 RNA 및 DNA를 분리합니다.
• 온전한 CTC의 격리를 촉진하기 위한 새로운 기술 접근 ​​방식을 계속 개발하고 최적화하기 위해 지속적인 개발 테스트를 수행합니다.

행동 양식:

흑색종(200), 전립선암(200), 기타 고형암(최대 400), 양성 혈액학적 상태(100) 및 건강한 지원자(최대 100) 환자로부터 혈액 샘플을 수집합니다. 치료에 대한 반응, 무진행 생존 및 전체 생존과 CTC의 잠재적 상관관계를 탐색할 수 있도록 질병 진행 또는 치료 반응 동안 선택된 환자로부터 순차적인 샘플을 얻을 것입니다. 샘플은 즉시 익명화되고 숫자 코드가 할당되며 날짜가 지정되어 TrueCells, LLC로 전송됩니다. 기증되면 샘플 소유권은 TrueCells, LLC로 이전됩니다.

연구 조사에는 다음이 포함됩니다.

• 백혈구 및 내피 세포의 부주의한 포함을 배제하기 위해 적절한 1차 범종양 단클론 항체 또는 지질 마커로 염색된 두 개의 혈액 튜브(튜브 1 및 2)의 전체 버피 코트에서 준비된 두꺼운 도말의 면역형광 염색을 사용하여 CTC를 독립적으로 계산했습니다. 환자의 암에 대한 인식을 확인하고 하위 집합을 확인합니다.
• 밀도 구배 원심분리에 의해 분리된 백혈구(CTC 함유). 버피 코트는 TrueCells 독점 세포 배양 배지에 플레이팅되고 종양 세포가 성장 및 전파됩니다(튜브 3 및 4). 세포 콜로니를 열거하고 면역형광 염색으로 확인된 콜로니 수와 비교했습니다.
• 경우에 따라 CTC는 장기 세포주로 성장할 수 있습니다. 이러한 세포는 개별 종양의 특성과 약물 및 생물학적 제제 민감도를 식별하기 위해 유전자 및 단백질 발현 패턴뿐만 아니라 체세포 유전자 돌연변이 평가와 같은 추가 분석의 대상이 될 수 있습니다. 이 응용 프로그램에서 아직 식별되지 않았거나 예상되지 않은 이러한 비식별화된 초기 계대 세포주에 대한 추가적인 향후 시험관 내 실험 응용 프로그램이 있을 수 있습니다.
• 혈장(튜브 3 및 4에서 백혈구 분리 과정의 부산물)을 수집하여 흑색종 분자 마커 및 전이성 유전자 발현의 분자 분석을 위한 DNA 및 RNA 분리를 위해 일시적으로 동결합니다. 이러한 샘플은 분석 절차에서 소비됩니다.

임상 정보는 의료 기록에서 추출되고 비식별화되어 암호로 보호된 스프레드시트에 저장됩니다. 수집할 정보에는 연령, 성별, T, N, M 상태, 기타 건강 상태, 혈청 LDH, 특정 종양 표지자(예: PSA), 순환 종양 세포(상업 분석으로 분석한 경우), 암에 존재하는 체세포 유전적 돌연변이(예: 흑색종 환자의 B-RAF V600E) 종양의 유사분열률, 종양 진단 날짜, 치료 이력, 국소 및 전이 진행 날짜 및 사망 날짜(해당되는 경우).