Cultura e Caracterização de Células Tumorais Circulantes (CTC) em Melanoma e Outros Cânceres (CTC)

Uma forte correlação foi estabelecida entre CTC e a progressão dos cânceres de mama, cólon e próstata. O número de CTC parece atuar como um marcador prognóstico para recidiva e sobrevida em vários cânceres epiteliais. Infelizmente, os ensaios CTC atuais não são eficazes na detecção confiável de células de melanoma circulantes e os procedimentos de ensaio danificam as células, proibindo estudos adicionais.

Este estudo foi concebido para avaliar a sensibilidade e especificidade do ensaio TrueCells, uma nova abordagem para isolar e preservar células para pesquisas futuras.

Objetivos primários:

• Avalie a viabilidade e reprodutibilidade do isolamento de CTC usando a tecnologia TrueCells.
• Otimize a recuperação quantitativa de CTC
• Forneça dados preliminares relativos à correlação dessas medições com outros métodos de recuperação de CTC, como imunofluorescência e coloração baseada em lipídeos.

Objetivos Secundários:

• Explore a correlação do ensaio de imunofluorescência CTC e das culturas TrueCells CTC com a resposta ao tratamento por critérios objetivos e de resposta imune, sobrevida livre de progressão, marcos de sobrevida de 1 e 2 anos e sobrevida geral em pacientes com câncer.
• Tentativa de isolar linhagens de células tumorais de longo prazo para avaliação de mutações de genes somáticos e padrões de expressão de genes e proteínas relacionados a tumores individuais (sem intenção de identificar mutações familiares ou hereditárias) e para testar a sensibilidade biológica e a drogas.
• Isole o RNA e o DNA do plasma para avaliar a expressão de marcadores específicos do tumor (por exemplo, tirosinase, B-FRAF, V600E, etc.) e genes associados à metástase (por exemplo, MSH-1, timidilato sintase, etc.).
• Realize testes de desenvolvimento contínuos para continuar a desenvolver e otimizar novas abordagens técnicas para facilitar o isolamento de CTC intacta.

Métodos:

Amostras de sangue serão coletadas de pacientes com melanoma (200), câncer de próstata (200), outros tumores sólidos (até 400), condições hematológicas benignas (100) e voluntários saudáveis ​​(até 100). Amostras sequenciais serão obtidas de pacientes selecionados durante a progressão da doença ou resposta ao tratamento para permitir a exploração da correlação potencial de CTC com a resposta ao tratamento, sobrevida livre de progressão e sobrevida global. As amostras serão imediatamente desidentificadas e receberão um código numérico, datado e enviado para TrueCells, LLC. Uma vez doado, a propriedade da amostra passa para TrueCells, LLC.

Estudos de pesquisa incluem:

• CTC contadas independentemente usando coloração imunofluorescente de esfregaço espesso preparado a partir de toda a camada leucocitária de dois tubos de sangue (tubos 1 e 2), corados com anticorpo monoclonal pan-tumoral primário apropriado ou marcadores lipídicos com anticorpos secundários confirmatórios para excluir a inclusão inadvertida de leucócitos e endotelial subconjuntos e verificar o reconhecimento do câncer do paciente.
• Leucócitos (contendo CTC) isolados por centrifugação em gradiente de densidade. O revestimento leucocitário é semeado em meio de cultura de células proprietário da TrueCells e células tumorais crescidas e propagadas (tubos 3 e 4). Colônias de células enumeradas e comparadas com o número de colônias identificadas por coloração imunofluorescente.
• Em alguns casos, a CTC pode ser cultivada como linhas celulares de longo prazo. Essas células podem ser submetidas a análises adicionais, como avaliação de mutações de genes somáticos, bem como padrões de expressão de genes e proteínas para identificar características de tumores individuais, bem como sensibilidade a drogas e agentes biológicos. Pode haver futuras aplicações experimentais in vitro adicionais para essas linhas celulares de passagem precoce não identificadas que ainda não foram identificadas ou antecipadas nesta aplicação.
• O plasma (subproduto do processo de isolamento de leucócitos dos tubos 3 e 4) será coletado e congelado temporariamente para isolamento de DNA e RNA para ensaios moleculares de marcadores moleculares de melanoma e expressão gênica metastática. Estas amostras são consumidas no procedimento de ensaio.

As informações clínicas serão extraídas dos registros médicos, desidentificadas e armazenadas em uma planilha protegida por senha. As informações a serem coletadas incluem idade, sexo, status T, N, M, outras condições de saúde, LDH sérico, quaisquer marcadores tumorais específicos (por exemplo, PSA), células tumorais circulantes (se analisadas por ensaio comercial), mutações genéticas somáticas presentes no câncer (por exemplo, B-RAF V600E em pacientes com melanoma) taxa mitótica do tumor, data do diagnóstico do tumor, história do tratamento, data da progressão regional e metastática e data da morte (se aplicável).