Cultuur en karakterisering van circulerende tumorcellen (CTC) bij melanoom en andere kankers (CTC)

Er is een sterke correlatie vastgesteld tussen CTC en de progressie van borst-, colon- en prostaatkanker. Het aantal CTC lijkt te fungeren als een prognostische marker voor terugval en overleving bij een aantal epitheliale kankers. Helaas zijn de huidige CTC-assays niet effectief in het betrouwbaar detecteren van circulerende melanoomcellen en de assayprocedures beschadigen cellen die verder onderzoek verhinderen.

Deze studie is bedoeld om de gevoeligheid en specificiteit van de TrueCells-assay te evalueren, een nieuwe benadering om cellen te isoleren en te behouden voor verder onderzoek.

Primaire doelen:

• Evalueer de haalbaarheid en reproduceerbaarheid van isolatie van CTC met behulp van TrueCells-technologie.
• Optimaliseer kwantitatief CTC-herstel
• Geef voorlopige gegevens over de correlatie van deze metingen met andere methoden voor CTC-herstel, zoals immunofluorescentie en kleuring op basis van lipiden.

Secundaire doelstellingen:

• Onderzoek de correlatie van immunofluorescente CTC-assay en TrueCells CTC-culturen met respons op behandeling op basis van objectieve en immuunresponscriteria, progressievrije overleving, 1- en 2-jaarsoverlevingsoriëntatiepunten en algehele overleving bij kankerpatiënten.
• Poging om langdurige tumorcellijnen te isoleren voor evaluatie van somatische genmutaties en gen- en eiwitexpressiepatronen gerelateerd aan individuele tumoren (niet bedoeld om familiale of overgeërfde mutaties te identificeren), en om geneesmiddel- en biologische gevoeligheid te testen.
• Isoleer plasma-RNA en DNA om expressie tumorspecifieke markers (bijv. Tyrosinase, B-FRAF, V600E, etc.) en metastase-geassocieerde genen (bijv. MSH-1, thymidylaatsynthase, etc.) te beoordelen.
• Voer doorlopende ontwikkelingstesten uit om door te gaan met het ontwikkelen en optimaliseren van nieuwe technische benaderingen om de isolatie van intacte CTC te vergemakkelijken.

methoden:

Er zullen bloedmonsters worden genomen van patiënten met melanoom (200), prostaatkanker (200), andere solide tumorkankers (tot 400), goedaardige hematologische aandoeningen (100) en gezonde vrijwilligers (tot 100). Sequentiële monsters zullen worden verkregen van geselecteerde patiënten tijdens ziekteprogressie of behandelingsrespons om onderzoek mogelijk te maken naar mogelijke correlatie van CTC met respons op behandeling, progressievrije overleving en algehele overleving. Monsters worden onmiddellijk geanonimiseerd en voorzien van een numerieke code, gedateerd en verzonden naar TrueCells, LLC. Eenmaal gedoneerd, gaat het eigendom van het monster over op TrueCells, LLC.

Onderzoeksstudies omvatten:

• CTC onafhankelijk geteld met behulp van immunofluorescente kleuring van dik uitstrijkje bereid uit de gehele buffy coat van twee buisjes bloed (buisjes 1 & 2), gekleurd met geschikt primair pan-tumor monoklonaal antilichaam of lipidenmarkers met bevestigende secundaire antilichamen om onbedoelde opname van leukocyten en endotheelcellen uit te sluiten subsets en verifieer de herkenning van de kanker van de patiënt.
• Leukocyten (die CTC bevatten) geïsoleerd door dichtheidsgradiëntcentrifugatie. De buffy coat wordt uitgeplaat in TrueCells eigen celkweekmedium en tumorcellen worden gekweekt en vermeerderd (buisjes 3 en 4). Celkolonies opgesomd en vergeleken met het aantal kolonies geïdentificeerd door immunofluorescente kleuring.
• In sommige gevallen kan CTC worden gekweekt als langdurige cellijnen. Deze cellen kunnen worden onderworpen aan verdere analyse, zoals evaluatie van somatische genmutaties evenals gen- en eiwitexpressiepatronen om kenmerken van individuele tumoren te identificeren, evenals gevoeligheid voor geneesmiddelen en biologische agentia. Er zijn mogelijk aanvullende toekomstige in vitro experimentele toepassingen voor deze geanonimiseerde cellijnen met vroege passage die nog niet zijn geïdentificeerd of geanticipeerd in deze aanvraag.
• Plasma (bijproduct van het leukocytenisolatieproces uit buizen 3 en 4) zal worden verzameld en tijdelijk worden ingevroren voor DNA- en RNA-isolatie voor moleculaire assays van moleculaire markers van melanoom en metastatische genexpressie. Deze monsters worden verbruikt in de testprocedure.

Klinische informatie wordt uit medische dossiers gehaald en geanonimiseerd en opgeslagen in een met een wachtwoord beveiligd spreadsheet. De te verzamelen informatie omvat leeftijd, geslacht, T-, N-, M-status, andere gezondheidsproblemen, serum-LDH, eventuele specifieke tumormarkers (bijv. PSA), circulerende tumorcellen (indien geanalyseerd met commerciële assay), somatische genetische mutaties aanwezig in kanker (bijv. B-RAF V600E bij melanoompatiënten) mitotische snelheid van tumor, datum van tumordiagnose, behandelingsgeschiedenis, datum van regionale en metastatische progressie en datum van overlijden (indien van toepassing).