Dyrkning og karakterisering af cirkulerende tumorceller (CTC) i melanom og andre kræftformer (CTC)

Der er etableret en stærk sammenhæng mellem CTC og udviklingen af ​​bryst-, tyktarms- og prostatacancer. Antallet af CTC ser ud til at fungere som en prognostisk markør for tilbagefald og overlevelse i en række epitelkræftformer. Desværre er nuværende CTC-assays ikke effektive til pålidelig påvisning af cirkulerende melanomceller, og assayprocedurerne beskadiger celler, hvilket forbyder yderligere undersøgelse.

Denne undersøgelse er designet til at evaluere sensitiviteten og specificiteten af ​​TrueCells-analysen, en ny tilgang til at isolere og bevare celler til yderligere forskning.

Primære mål:

• Evaluer gennemførlighed og reproducerbarhed af isolering af CTC ved hjælp af TrueCells teknologi.
• Optimer kvantitativ CTC-gendannelse
• Angiv foreløbige data vedrørende korrelation af disse målinger med andre metoder til CTC-gendannelse, såsom immunfluorescens, lipidbaseret farvning.

Sekundære mål:

• Udforsk korrelation af immunofluorescerende CTC-assay og TrueCells CTC-kulturer med respons på behandling efter objektive og immunresponskriterier, progressionsfri overlevelse, 1 og 2-års overlevelsesvartegn og overordnet overlevelse hos cancerpatienter.
• Forsøg på at isolere langsigtede tumorcellelinjer til evaluering af somatiske genmutationer og gen- og proteinekspressionsmønstre relateret til individuelle tumorer (ikke beregnet til at identificere familiære eller arvelige mutationer) og at teste lægemiddel- og biologisk følsomhed.
• Isoler plasma RNA og DNA for at vurdere ekspression tumor-specifikke markører (f.eks. tyrosinase, B-FRAF, V600E, etc.) og metastase-associerede gener (fx MSH-1, thymidylatsyntase, etc.).
• Udfør løbende udviklingstest for at fortsætte med at udvikle og optimere nye tekniske tilgange for at lette isolering af intakt CTC.

Metoder:

Blodprøver vil blive indsamlet fra patienter med melanom (200), prostatacancer (200), andre solide tumorkræftformer (op til 400), godartede hæmatologiske tilstande (100) og raske frivillige (op til 100). Sekventielle prøver vil blive opnået fra udvalgte patienter under sygdomsprogression eller behandlingsrespons for at muliggøre udforskning af potentiel korrelation mellem CTC med respons på behandling, progressionsfri overlevelse og samlet overlevelse. Prøver vil straks blive afidentificeret og tildelt en numerisk kode, dateret og sendt til TrueCells, LLC. Når den først er doneret, overføres prøveejerskabet til TrueCells, LLC.

Forskningsundersøgelser omfatter:

• CTC tælles uafhængigt ved hjælp af immunofluorescerende farvning af tykt udstrygning fremstillet af hele buffy coat af to rør med blod (rør 1 og 2), farvet med passende primært pan-tumor monoklonalt antistof eller lipidmarkører med bekræftende sekundære antistoffer for at udelukke utilsigtet inklusion af leukocyt og endotel undergrupper og verificere anerkendelse af patientens kræftsygdom.
• Leukocytter (indeholdende CTC) isoleret ved tæthedsgradientcentrifugering. Buffy coaten udplades i TrueCells proprietære cellekulturmedium og tumorceller dyrkes og formeres (rør 3 og 4). Cellekolonier optalt og sammenlignet med antallet af kolonier identificeret ved immunfluorescerende farvning.
• I nogle tilfælde kan CTC være i stand til at blive dyrket som langtidscellelinjer. Disse celler kan blive genstand for yderligere analyse, såsom evaluering af somatiske genmutationer samt gen- og proteinekspressionsmønstre for at identificere karakteristika ved individuelle tumorer såvel som lægemiddel- og biologiske agensfølsomhed. Der kan være yderligere fremtidige in vitro eksperimentelle applikationer for disse de-identificerede tidlig-passage cellelinjer, som endnu ikke er blevet identificeret eller forventet i denne ansøgning.
• Plasma (biprodukt af leukocytisoleringsproces fra rør 3 og 4) vil blive opsamlet og midlertidigt frosset til DNA- og RNA-isolering til molekylære assays af melanom molekylære markører og metastatisk genekspression. Disse prøver indtages i analyseproceduren.

Kliniske oplysninger vil blive abstraheret fra lægejournaler og afidentificeret og gemt i et password-beskyttet regneark. Oplysninger, der skal indsamles, omfatter alder, køn, T-, N-, M-status, andre helbredstilstande, serum-LDH, eventuelle specifikke tumormarkører (f. PSA), cirkulerende tumorceller (hvis de analyseres ved kommerciel analyse), somatiske genetiske mutationer til stede i cancer (f.eks. B-RAF V600E hos melanompatienter) mitotisk tumorfrekvens, dato for tumordiagnose, behandlingshistorie, dato for regional og metastatisk progression og dødsdato (hvis relevant).