Культура и характеристика циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) при меланоме и других видах рака (CTC)

Была установлена ​​сильная корреляция между ЦОК и прогрессированием рака молочной железы, толстой кишки и простаты. Количество ЦОК, по-видимому, действует как прогностический маркер рецидива и выживаемости при ряде эпителиальных раков. К сожалению, современные анализы ЦОК неэффективны для надежного обнаружения циркулирующих клеток меланомы, а процедуры анализа повреждают клетки, что препятствует дальнейшему изучению.

Это исследование предназначено для оценки чувствительности и специфичности анализа TrueCells, нового подхода к выделению и сохранению клеток для дальнейших исследований.

Основные цели:

• Оцените осуществимость и воспроизводимость выделения ЦОК с использованием технологии TrueCells.
• Оптимизация количественного извлечения CTC
• Предоставьте предварительные данные о корреляции этих измерений с другими методами выделения ЦОК, такими как иммунофлуоресценция, окрашивание на основе липидов.

Второстепенные цели:

• Изучите корреляцию иммунофлуоресцентного анализа ЦОК и культур ЦОК TrueCells с ответом на лечение по объективным критериям и критериям иммунного ответа, выживаемостью без прогрессирования, ориентирами выживаемости в течение 1 и 2 лет и общей выживаемостью у онкологических больных.
• Попытка выделения долгоживущих линий опухолевых клеток для оценки мутаций соматических генов и паттернов экспрессии генов и белков, связанных с отдельными опухолями (не предназначена для выявления семейных или наследственных мутаций), а также для проверки лекарственной и биологической чувствительности.
• Изолируйте РНК и ДНК плазмы для оценки экспрессии опухолеспецифических маркеров (например, тирозиназы, B-FRAF, V600E и т. д.) и генов, связанных с метастазами (например, MSH-1, тимидилатсинтаза и т. д.).
• Выполняйте постоянное экспериментальное тестирование, чтобы продолжать разрабатывать и оптимизировать новые технические подходы для облегчения выделения интактных ЦОК.

Методы:

Образцы крови будут взяты у пациентов с меланомой (200), раком предстательной железы (200), другими солидными опухолями (до 400), доброкачественными гематологическими состояниями (100) и у здоровых добровольцев (до 100). Последовательные образцы будут получены от выбранных пациентов во время прогрессирования заболевания или ответа на лечение, чтобы позволить изучить потенциальную корреляцию ЦОК с ответом на лечение, выживаемостью без прогрессирования и общей выживаемостью. Образцы будут немедленно деидентифицированы, им будет присвоен числовой код, дата и отправлены в TrueCells, LLC. После пожертвования право собственности на образец переходит к TrueCells, LLC.

Научные исследования включают:

• ЦОК независимо подсчитывали с использованием иммунофлуоресцентного окрашивания толстого мазка, приготовленного из цельного лейкоцитарного слоя двух пробирок с кровью (пробирки 1 и 2), окрашенных соответствующими первичными панопухолевыми моноклональными антителами или липидными маркерами с подтверждающими вторичными антителами, чтобы исключить непреднамеренное включение лейкоцитов и эндотелия. подмножества и проверить распознавание рака пациента.
• Лейкоциты (содержащие ЦОК) выделяют центрифугированием в градиенте плотности. Лейкоцитарную пленку помещают в запатентованную среду для культивирования клеток TrueCells, после чего опухолевые клетки выращивают и размножают (пробирки 3 и 4). Колонии клеток подсчитывали и сравнивали с количеством колоний, идентифицированных с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания.
• В некоторых случаях ЦОК можно выращивать в виде долгосрочных клеточных линий. Эти клетки могут быть подвергнуты дальнейшему анализу, такому как оценка мутаций соматических генов, а также паттернов экспрессии генов и белков для определения характеристик отдельных опухолей, а также чувствительности к лекарствам и биологическим агентам. В будущем могут быть дополнительные экспериментальные применения in vitro для этих деидентифицированных клеточных линий раннего пассажа, которые еще не были идентифицированы или не ожидаются в этой заявке.
• Плазма (побочный продукт процесса выделения лейкоцитов из пробирок 3 и 4) будет собрана и временно заморожена для выделения ДНК и РНК для молекулярного анализа молекулярных маркеров меланомы и экспрессии метастатического гена. Эти образцы потребляются в процедуре анализа.

Клиническая информация будет извлечена из медицинских записей, деидентифицирована и сохранена в электронной таблице, защищенной паролем. Информация, которую необходимо собрать, включает возраст, пол, статус T, N, M, другие состояния здоровья, уровень ЛДГ в сыворотке, любые специфические опухолевые маркеры (например, ПСА), циркулирующие опухолевые клетки (при анализе с помощью коммерческого анализа), соматические генетические мутации, присутствующие при раке (например, B-RAF V600E у пациентов с меланомой) скорость митоза опухоли, дата диагностики опухоли, история лечения, дата регионарного и метастатического прогрессирования и дата смерти (если применимо).