Kultivace a charakterizace cirkulujících nádorových buněk (CTC) u melanomu a jiných rakovin (CTC)

Byla prokázána silná korelace mezi CTC a progresí rakoviny prsu, tlustého střeva a prostaty. Zdá se, že počet CTC působí jako prognostický marker relapsu a přežití u řady epiteliálních karcinomů. Bohužel současné CTC testy nejsou účinné při spolehlivé detekci cirkulujících melanomových buněk a testovací postupy poškozují buňky a znemožňují další studium.

Tato studie je navržena tak, aby vyhodnotila citlivost a specifičnost testu TrueCells, nového přístupu k izolaci a uchování buněk pro další výzkum.

Primární cíle:

• Vyhodnoťte proveditelnost a reprodukovatelnost izolace CTC pomocí technologie TrueCells.
• Optimalizujte kvantitativní obnovu CTC
• Poskytněte předběžná data týkající se korelace těchto měření s jinými metodami obnovy CTC, jako je imunofluorescence, barvení na bázi lipidů.

Sekundární cíle:

• Prozkoumejte korelaci imunofluorescenčního testu CTC a kultur TrueCells CTC s odpovědí na léčbu podle objektivních kritérií a kritérií imunitní odpovědi, přežitím bez progrese, mezníky přežití 1 a 2 roky a celkovým přežitím u pacientů s rakovinou.
• Pokuste se izolovat dlouhodobé nádorové buněčné linie za účelem vyhodnocení somatických genových mutací a vzorců exprese genů a proteinů souvisejících s jednotlivými nádory (nejsou určeny k identifikaci familiárních nebo dědičných mutací) a k testování citlivosti na léky a biologické látky.
• Izolujte plazmatickou RNA a DNA pro hodnocení exprese nádorově specifických markerů (např. tyrosináza, B-FRAF, V600E, atd.) a genů spojených s metastázami (např. MSH-1, thymidylátsyntáza atd.).
• Provádějte průběžné vývojové testování, abyste mohli pokračovat ve vývoji a optimalizaci nových technických přístupů k usnadnění izolace intaktního CTC.

Metody:

Vzorky krve budou odebrány pacientům s melanomem (200), rakovinou prostaty (200), jinými solidními nádory (až 400), benigními hematologickými stavy (100) a zdravými dobrovolníky (až 100). Sekvenční vzorky budou získány od vybraných pacientů během progrese onemocnění nebo léčebné odpovědi, aby bylo možné prozkoumat potenciální korelaci CTC s odpovědí na léčbu, přežitím bez progrese a celkovým přežitím. Vzorky budou okamžitě deidentifikovány a bude jim přidělen číselný kód, datován a zaslán společnosti TrueCells, LLC. Po darování přechází vlastnictví vzorku na společnost TrueCells, LLC.

Výzkumné studie zahrnují:

• CTC nezávisle počítané pomocí imunofluorescenčního barvení tlustého nátěru připraveného z celého buffy coat dvou zkumavek krve (zkumavky 1 a 2), obarvených vhodnou primární monoklonální protilátkou proti pantumoru nebo lipidovými markery s potvrzujícími sekundárními protilátkami, aby se vyloučilo neúmyslné zařazení leukocytů a endotelu podmnožiny a ověřit rozpoznání rakoviny pacienta.
• Leukocyty (obsahující CTC) izolované centrifugací v hustotním gradientu. Buffy coat se nanese do proprietárního buněčného kultivačního média TrueCells a nádorové buňky se pěstují a množí (zkumavky 3 a 4). Buněčné kolonie byly spočítány a porovnány s počtem kolonií identifikovaných imunofluorescenčním barvením.
• V některých případech může být CTC možné pěstovat jako dlouhodobé buněčné linie. Tyto buňky mohou být podrobeny další analýze, jako je hodnocení somatických genových mutací, stejně jako vzorce exprese genů a proteinů, aby se identifikovaly charakteristiky jednotlivých nádorů, stejně jako citlivost na léky a biologické látky. Mohou existovat další budoucí in vitro experimentální aplikace pro tyto deidentifikované buněčné linie s časnou pasáží, které dosud nebyly identifikovány nebo předpokládané v této aplikaci.
• Plazma (vedlejší produkt procesu izolace leukocytů ze zkumavek 3 a 4) bude odebrána a dočasně zmražena pro izolaci DNA a RNA pro molekulární testy molekulárních markerů melanomu a exprese metastatických genů. Tyto vzorky jsou spotřebovány v testovací proceduře.

Klinické informace budou odebrány ze zdravotních záznamů a deidentifikovány a uloženy v heslem chráněné tabulce. Shromažďované informace zahrnují věk, pohlaví, T, N, M stav, další zdravotní stavy, sérové ​​LDH, jakékoli specifické nádorové markery (např. PSA), cirkulující nádorové buňky (pokud jsou analyzovány komerčním testem), somatické genetické mutace přítomné u rakoviny (např. B-RAF V600E u pacientů s melanomem) mitotická četnost nádoru, datum diagnózy nádoru, historie léčby, datum regionální a metastatické progrese a datum úmrtí (pokud existuje).