神経筋遮断薬に対するアナフィラキシーにおける好中球活性化の役割 (NASA)

ケースコントロールスタディ、ケースの6、10週間のフォローアップ

ケースの選択 :

包含基準: 18 歳以上のすべての患者:

フランスの患者管理 2011 ガイドラインに従って治療されたアナフィラキシー反応のグレードに関係なく、神経筋遮断薬に対する周術期アナフィラキシー反応と一致する臨床徴候を呈する (cf. 附属書 5) 非選択基準: アナフィラキシーショック中に死亡した患者

コントロールの選択: ケースごとに 1 つのコントロールが含まれます。 コントロールは BICHAT 病院のみで採用されます。 コントロールは以下に対応する必要があります。

包含基準： 18歳以上の任意の患者 アナフィラキシー反応を発症することなく、神経筋遮断薬注射を必要とする外科的介入のために入院 研究の詳細を知らされ、この研究への参加に同意した

非包含基準: 妊娠中の女性注: コントロールとして採用された患者が神経筋遮断薬注射後のアナフィラキシー反応に苦しんでいる場合、この患者は症例と見なされ、他のコントロールは、この新規症例と 1 対の他の対照と見なされます。ケース患者。

ペアリング: コントロールは、次の基準に基づいてケースにペアリングされます。

- 年齢: +/- 5 歳

• 性別
• 感染状況：感染・非感染
• 手術の種類: さまざまなサブクラスが次のように分類されます: 整形外科、神経外科/内臓、泌尿器科、婦人科/血管、心臓、胸部/顎顔面、眼科、耳鼻咽喉科/その他。
• 手術に使用される神経筋遮断薬の薬理学的分類

研究期間: 合計期間: 26 か月 包含期間: 24 か月

患者の参加期間:

ケース: 6 ～ 10 週間 コントロール: 手術当日

検体採取 症例：ショック時（血液および血漿検体、患者に必要な場合は気管支吸引液）およびアレルギー科 麻酔中 アナフィラキシー反応後 6 ～ 10 週間に相談 対照：注射後の血液および血漿検体神経筋遮断薬の注射。

この研究に必要なすべての採血 (および最終的には気管支液の吸引) は、介入、診断、患者モニタリング (非介入研究) の追加または非従来の手順なしで、症例および対照患者の通常の臨床管理中に行われます。 . 通常の臨床診療中に収集されたもの（血清/血漿用の乾燥チューブで10ml、EDTAチューブで10ml）に加えて、過剰な血液チューブを同時に収集し（症例および対照）、気管支吸引液を分析のために保持します。捨てられるのではなく。

麻酔中の神経筋遮断薬に対するアナフィラキシーショックは、注入/灌流後数分で発生します。 したがって、神経筋遮断薬の注入/灌流後 30 分から 60 分以内に患者のサンプルが採取されます。これは、現在手術中に行われているため、患者の状態が安定している場合です。 アナフィラキシー反応は、切開が可能になる前、つまり神経筋遮断薬の注射/灌流の直後に発生するため、研究者は、すべてではないにしても、ほとんどの患者で外科的切開が行われないことを期待しています。 したがって、対照患者からのサンプルは、特に好中球の活性化に関して、この外科的行為によって誘発される摂動を避けるために、神経筋遮断薬への曝露の直後、および外科的切開が行われる前に収集されます。

この研究のために特別に採取された血液量:

• 症例患者: アナフィラキシー反応後 10 ml、ショック後 6 週間から 10 週間後にアレルギー麻酔科に相談してください。
• 対照患者: 神経筋遮断薬注射後の 20 ml 細胞ベースの研究のためにヘパリン酸リチウムで収集されたサンプルは、アナフィラキシー反応の日とアレルギー - 麻酔相談の日に、Unity Allergologic Moleculeter への認可された配送サービスによって送られます。パスツール研究所で細胞化。

ドライ チューブ (血清サンプル) に収集されたサンプルは、BICHAT 病院のセロテックに収容され、要求に応じて一連のアリコートがパスツール研究所に送られます。 同じアリコートを使用して、抗第四級アンモニウム特異的 IgG および特異的 IgE を、BICHAT 病院の Unity d'Immunologic Autoimmunity et Hypersensibility で現在実施されているように投与します。

実行された場合、気管支吸引液は、BICHAT 病院の Unity d'Immunologic Autoimmunity et Hypersensibility での NET の研究のために、またパスツール研究所での細胞内容物および PAF レベルの分析のために一部保管され、それに応じて同じものを配送します。それぞれの研究室での一日。

アナフィラキシー反応後 6 ～ 10 週間のアレルギー科 - 麻酔科の診察中に、皮膚プリック テストを実施します。

それぞれの包含に続いて、各病院は、現在の医療慣行として、患者に関する情報を送信します：年齢、性別、計画された手術の種類、使用された麻酔薬の性質、喘息、食物または薬物に対するアレルギーを含むアトピー事象の履歴、併存因子。 対照患者は BICHAT 病院のみに含まれます。

主な判断基準：

1. 麻酔中に神経筋遮断薬にさらされた患者群（コントロール）と比較した、神経筋遮断薬によるショック直後の患者群（ケース）における循環活性化好中球の割合。 この測定は、フローサイトメトリーを使用した血中好中球による活性化マーカー CD62L (L-セレクチン) の発現強度に基づいています。 私たちの予備データは、CD62L の平均蛍光強度 (MFI) が「活性化されていない」好中球を考慮すると >450 であり、「活性化された」好中球を考慮すると CD62L(MFI) <300 であることを示しています。
2. 「対照」の血漿中よりも「症例」の血漿中のPAFのレベル。

二次判定基準：

1. 「対照」の血漿中よりも「症例」の血漿中の抗第四級アンモニウム特異的IgGのレベル。
2. 神経筋遮断薬-IgG免疫複合体の存在下での血中好中球のex vivo活性化能力

3. 「症例」の気管支吸引液における好中球細胞外トラップの存在

   患者集団の説明: 調査対象の集団全体およびグループの完全な説明が行われます。 変数は、必要に応じてその分布に従って説明されます (正規分布を持つ変数の平均と標準偏差、異常分布を持つ変数の中央値と四分位範囲、カテゴリ基準の頻度とパーセンテージ)。

   分析 - 症例と対照の間の活性化された好中球の割合を表す変数の分布、および各二次判断基準は、条件付き論理回帰を使用して比較され、一致基準で調整されます - 活性化された好中球の割合とショックの重症度、または特定の IgG のレベルとショックの重症度の間で、一般的な線形モデルの線形傾向検定が実行されます。

   • 受けたショックの重症度に基づいて定義された患者のサブグループで得られた分析結果も実行されます
   • 統計テストは両側で行われ、第 1 度のリスクは 5% に固定されます。

   • 基底段階または神経筋遮断薬-IgG 複合体による刺激後の血中好中球の機能パラメーターの説明 (FcR および活性化マーカーの発現、メディエーターの放出、NET の誘導)、および「古典的な」免疫学的パラメーターの説明神経筋遮断薬に対するアナフィラキシーショック（プリックテストの結果、好塩基球の生体外活性化能）。

     NASAの研究に含まれる患者からのサンプルに対して、5つの補完的な研究が実施されます。

   • IPAAQ (抗第 4 級アンモニウム抗体の同定と病理学的効果)、追加の 10 ml の血清サンプルが必要になるため、IPAAQ 研究に含まれるすべての患者から特定の署名入りの同意が得られます。 この血清サンプルは、アナフィラキシーショックの6〜10週間後に予定されているアレルギー科の訪問中に採取されます。

   この研究の目的は、麻酔中にアナフィラキシーショックを受けた患者の血清中の抗第 4 級アンモニウム抗体のさまざまな IgG サブクラスを定量化、同定、および精製することです。 抗第四級アンモニウム抗体と神経筋遮断剤から構成される免疫複合体が、ヒト IgG 受容体に結合する能力、および/またはインビトロでヒト好中球と好塩基球を活性化する能力を評価します。 この分析により、抗第 4 級アンモニウム IgG と神経筋遮断薬の複合体が病原性を示す可能性があるかどうかを判断し、通常の臨床診療で行われる抗第 4 級アンモニウム IgE 検査に加えて、抗第 4 級アンモニウム IgG 診断検査を検証することができます。

   • NASAmAb: 第四級アンモニウムに対する異なる集団の記憶 B リンパ球 (特に IgG または IgE +) は、第四級アンモニウム (QA) を使用したフローサイトメトリーにより、研究 NASAmAb への参加に同意した 2 つの「ケース」の PBMC から分離されます。蛍光タンパク質 (例: KLH) に結合します。 各セル B によって発現される重鎖および軽鎖の免疫グロブリン (IgH および IgL) の可変ドメインをコードする遺伝子は、最初に RT-PCR によって増幅され、次に免疫グロブリンの定常ドメインをコードするベクターにクローニングされます。 これらのベクターは細胞株にトランスフェクトされ、得られる組換えモノクローナル抗体（キメラヒトマウス）が産生され、QA神経筋遮断剤に対する特異的反応性（ELISAの場合）、リガンドに対する親和性（磁気共鳴表面法による）に関して特徴付けられます）、およびポリおよび自己反応性（ELISAおよび間接免疫蛍光法による）。 組換え抗体は、抗体のヒト受容体を発現するトランスジェニックマウスモデルにおいて、抗原（QAまたはNMBA）の存在下でin vitroで細胞を活性化する能力、およびin vivoでアナフィラキシーショックを誘発する能力について評価されます。

   このプロジェクトの目的は、ヒト組換え抗第 4 級アンモニウム抗体を生成して、それらの病理学的潜在能力 (アナフィラキシー誘発性) を評価することです。

   研究NASAmAbsの一環として、アレルギー専門医との相談中またはこの目的のための訪問中に、血液EDTAの追加の250mlポケットが1つ収集されます。

   - NASA LYMPHAQ: 薬物アレルゲンに特異的な T 細胞の存在は、ペニシリンに対するアレルギーで報告されていますが、筋弛緩薬に対する即時アレルギーにおけるその存在と特徴は記載されていません。 私たちの補助研究の目的は、特定の活性化テストによってこれらの T 細胞を強調し、表現型を特徴付け、定量化し、それらの頻度を健康なドナーの頻度と比較することです。

   この補助研究の目的は、NMBA に敏感な患者の第 4 級アンモニウムの T 細胞特異的集団を特定することです。

   この研究は、NASA の研究の一環として、ショック後の訪問中にすでに分離された単核細胞で実施されます。

   • NASA Quin: 最近の研究で、ROUZAIRE 博士のチームは、キノロンにアレルギーのある 17 人の患者における神経筋遮断薬に対する感作の有病率が高いことを明らかにしました: 対照集団の 53% 対 3.4%。 したがって、ホルコジンと同様に、キノロンは神経筋遮断剤の感作の方法である可能性があります.

   この補助的なプロジェクトの目的は、より大きなコホートで、これら 2 つの薬物クラス、神経筋遮断薬とキノロン薬の間の感作の関連性を確認することです。

   NASAQuin の研究の一環として、追加の血液サンプルは収集されません。 この研究は、NASA の研究の一環として保存された血清および/または血漿のアリコートに対して実施されます。 300 μl のアリコートをアッセイに使用します。

   • NASA-CAT: アナフィラキシーは、単独で、またはアドレナリンの投与中に心臓病を引き起こす可能性があります。 心筋病変の振幅、頻度、および病態生理学は不明です。

   補助研究「NASA​​-CAT」の目的は、確立された血漿心筋バイオマーカーを使用して、麻酔薬に関連するアナフィラキシー中の心筋損傷の有病率と、この損傷におけるアドレナリンの役割を定義することです。 アドレナリンは、重度のアナフィラキシーの静脈内投与が推奨されるカテコールアミンです。 アドレナリンは、その血管収縮特性により、血圧を即座に回復させることができます。 アドレナリンが冠動脈と心筋に及ぼす有害な影響は、急性心不全で報告されています。 アナフィラキシーにおける同様の影響の存在は知られていません。

   研究「NASA​​-CAT」の目的は、アナフィラキシーへの心筋の関与を評価し、この損傷におけるアドレナリンの役割を決定することです。

   補助研究「NASA​​-CAT」の一環として、追加の血液サンプルは収集されません。 心筋バイオマーカー（トロポニン過敏、ナトリウム利尿ペプチド、アドレノメデュリン、コペプチン）の投与は、NASA研究の一環として保存された血清および/または血漿からの500μlのサンプルで行われます。