中性粒细胞激活在神经肌肉阻滞剂过敏反应中的作用 (NASA)

病例对照研究，对病例进行 6.10 周的随访

案例选择：

纳入标准：任何 18 岁及以上的患者：

出现与神经肌肉阻断药物围手术期过敏反应相符的临床体征，无论过敏反应的等级如何按照法国患者管理 2011 指南进行治疗（参见 附件5）非入选标准：患者在过敏性休克期间死亡

对照的选择：每个病例将包括一个对照。 控制将仅在医院 BICHAT 招募。 控件应对应于以下内容：

纳入标准：任何 18 岁及以上住院接受需要神经肌肉阻断药物注射的外科手术，但未发生过敏反应 已被告知研究详情并同意参加本研究

非纳入标准：孕妇 注意：如果作为对照招募的患者在注射神经肌肉阻断药物后出现过敏反应，则该患者将被视为病例，其他对照配对，一个与这个新病例配对，一个与原始病例配对案例患者。

配对：控件将根据以下标准与案例配对：

- 年龄：+/- 5 岁

• 性别
• 感染状态：感染/未感染
• 手术类型：不同的子类分类如下：骨科、神经外科/内脏科、泌尿科、妇科/血管科、心脏科、胸科/颌面部、眼科、耳鼻喉科/其他。
• 手术用神经肌肉阻滞药的药理分类

研究持续时间：总持续时间：26 个月纳入期：24 个月

患者的参与时间：

病例：6 至 10 周 对照：手术当天

样本采集 病例：休克时（血液和血浆样本，以及患者需要时的支气管抽吸液）和变态反应麻醉期间 过敏反应后 6 至 10 周咨询 对照：注射后的血液和血浆样本神经肌肉阻断药物注射。

本研究所需的所有血液采样（以及最终的支气管液抽吸）均在病例和对照患者的正常临床管理过程中进行，没有任何额外或非常规的干预、诊断或患者监测程序（非干预研究） . 除了在正常临床实践中收集的那些外，还收集了多余的血液管（10 毫升干管用于血清/血浆，10 毫升用于 EDTA 管）同时（病例和对照）并保留支气管抽吸液用于分析而不是被丢弃。

麻醉期间对神经肌肉阻断药物的过敏性休克会在注射/灌注后几分钟内出现。 因此，病例患者的样本将在注射/灌注神经肌肉阻断药物后 30 至 60 分钟内收集，因为目前已经在手术期间进行，并且当患者的病情稳定时。 研究人员预计，大多数（如果不是全部）病例患者不会进行手术切口，因为过敏反应发生在可能进行切口之前，即在注射/灌注神经肌肉阻断药物之后。 因此，将在暴露于神经肌肉阻断药物后和进行手术切口前不久收集来自对照患者的样本，以避免这种手术行为引起的扰动，尤其是关于中性粒细胞激活的扰动

专门为这项研究收集的血量：

• 案例患者：过敏反应后 10 毫升，并在变态反应学-麻醉期间咨询休克 le choc 后 6 至 10 周。
• 对照患者：神经肌肉阻断药物注射后 20 毫升 为基于细胞的研究收集在肝素锂中的样本将在过敏反应当天和过敏学-麻醉咨询当天由授权的送货服务发送给 Unity Allergologic 分子等Cellularise 在巴斯德研究所。

在干试管上收集的样本（血清样本）将存放在 Hospital BICHAT 的 sero-tec 中，并根据要求将一系列等分试样发送到 Institute Pasteur。 相同的等分试样将用于给予抗季铵特异性 IgG 和特异性 IgE，如目前在 BICHAT 医院的 Unity d'Immunologic Autoimmunity et Hypersensibility 进行的那样。

执行时，将保留支气管抽吸液，部分用于 BICHAT 医院 Unity d'Immunologic Autoimmunity et Hypersensibility 的 NET 研究，部分用于巴斯德研究所的细胞含量和 PAF 水平分析，并相应地提供相同的在各自实验室的一天。

皮肤点刺试验将在过敏反应后 6 至 10 周的变态反应学-麻醉咨询期间进行。

在每次纳入之后，按照当前的医疗实践，每家医院都会发送有关患者的信息：年龄、性别、计划的手术类型、使用的麻醉剂的性质、特应性事件史，包括哮喘、对食物或药物过敏、合并症因素。 对照患者将仅包括在 Hospital BICHAT。

主要判断标准：

1. 神经肌肉阻断药物诱发休克后立即发生的患者组（病例）与麻醉期间暴露于神经肌肉阻断药物但未发生休克的患者组（对照组）相比，循环中活化的中性粒细胞百分比。 该测量将基于使用流式细胞术的血液嗜中性粒细胞表达活化标记物 CD62L（L-选择素）的强度。 我们的初步数据表明，当考虑“未激活的”嗜中性粒细胞时，CD62L 的平均荧光强度 (MFI) > 450，而当考虑“激活的”嗜中性粒细胞时，CD62L(MFI)<300。
2. “病例”血浆中的 PAF 水平高于“对照”血浆中的 PAF 水平。

二级判断标准：

1. “病例”血浆中的抗季铵特异性 IgG 水平高于“对照”血浆中的水平。
2. 神经肌肉阻断药物-IgG 免疫复合物存在时血液中性粒细胞的离体激活能力

3. “病例”的支气管抽吸液中存在中性粒细胞胞外陷阱

   患者群体的描述：将对整个研究群体和组进行完整描述。 变量将根据其适当的分布进行描述（正态分布变量的均值和标准差；异常分布变量的中值和四分位距；类别标准的频率和百分比）。

   分析 - 代表病例和对照之间活化中性粒细胞百分比的变量分布，以及每个次要判断标准将使用条件逻辑回归进行比较，根据匹配标准进行调整 - 评估活化中性粒细胞百分比与休克的严重程度，或特定 IgG 的水平和休克的严重程度之间，将在一般线性模型中进行线性趋势测试。

   • 还将对根据所遭受的休克严重程度定义的患者亚组进行分析，结果也将进行
   • 统计测试将是双侧的，一级风险将固定为 5%。

   • 血液中性粒细胞在基础阶段或用神经肌肉阻断药物-IgG 复合物刺激后的功能参数的描述（FcR 和激活标记的表达、介质的释放、NET 的诱导），以及“经典”免疫学参数的描述对神经肌肉阻断药物的过敏性休克（点刺试验结果，嗜碱性粒细胞的离体活化电位）。

     将对 NASA 研究中包含的患者样本进行 5 项补充研究：

   • IPAAQ（抗季铵盐抗体的鉴定和病理作用），由于需要额外的 10ml 血清样本，因此将获得参与 IPAAQ 研究的每位患者的具体签署同意书。 该血清样本将在过敏性休克后 6 至 10 周的过敏学就诊期间采集。

   本研究的目的是量化、鉴定和纯化在麻醉期间发生过敏性休克的患者血清中抗季铵盐抗体的不同 IgG 亚类。 将评估由抗季铵抗体和神经肌肉阻断剂组成的免疫复合物在体外结合人 IgG 受体和/或激活人中性粒细胞和嗜碱性粒细胞的能力。 该分析将能够确定抗季铵 IgG-神经肌肉阻断剂复合物是否可能致病，并验证抗季铵 IgG 诊断试验，以及在正常临床实践中进行的抗季铵 IgE 试验。

   • NASAmAbs：针对季铵盐的不同记忆 B 淋巴细胞群（特别是 IgG 或 IgE +）将从同意参与 NASAmAbs 研究的两个“病例”的 PBMC 中分离出来，通过使用季铵盐 (QA) 的流式细胞术耦合到荧光蛋白（例如KLH）。 每个细胞 B 表达的编码重链和轻链免疫球蛋白（IgH 和 IgL）可变区的基因将首先通过 RT-PCR 扩增，然后克隆到编码免疫球蛋白恒定区的载体中。 这些载体将被转染到细胞系中，并将产生重组单克隆抗体（嵌合人-小鼠），并根据针对 QA 神经肌肉阻滞剂的特异性反应（用于 ELISA）、配体亲和力（通过磁共振表面法）进行表征), 和聚反应和自身反应 (通过 ELISA 和间接免疫荧光)。 将评估重组抗体在存在抗原（QA 或 NMBA）的情况下在体外激活细胞的能力，以及在表达抗体人类受体的转基因小鼠模型中在体内诱导过敏性休克的能力。

   该项目的目的是生成人类重组抗季铵抗体，以评估其病理学潜力（过敏原）。

   作为 NASAmAbs 研究的一部分，将在为此目的访问过敏症专家的咨询期间收集 1 个额外的 250 毫升血液 EDTA 袋。

   - NASA LYMPHAQ：青霉素过敏中记录了药物过敏原特异性 T 细胞的存在，但尚未描述它们在肌肉松弛剂直接过敏中的存在和特征。 我们的辅助研究的目的是通过特定的激活测试来突出这些 T 细胞，以表征表型、量化并将它们的频率与健康供体的频率进行比较。

   这项辅助研究的目的是确定对 NMBA 敏感的患者中季铵盐的 T 细胞特异性群体。

   作为 NASA 研究的一部分，这项研究将在休克后访问期间已经分离的单核细胞上进行。

   • NASA Quin：在最近的一项研究中，ROUZAIRE 博士的团队揭示了 17 名对喹诺酮类药物过敏的患者对神经肌肉阻断药物敏感的高患病率：53% 对对照组的 3.4%。 与福尔可定一样，喹诺酮类因此可能成为神经肌肉阻滞剂致敏的一种方式。

   这个辅助项目的目的是在更大的队列中确认这两种药物类别、神经肌肉阻断剂和喹诺酮类之间的致敏关联。

   作为 NASAQuin 研究的一部分，将不会收集额外的血液样本。 该研究将在 NASA 研究中保存的血清和/或血浆等分试样上进行。 300 µl 的等分试样将用于测定。

   • NASA-CAT：过敏反应可单独或在服用肾上腺素期间引起心脏病。 心肌受累的幅度、频率和病理生理学未知。

   辅助研究“NASA-CAT”的目的是使用已建立的血浆心肌生物标志物来定义与麻醉剂相关的过敏反应期间心肌损伤的发生率以及肾上腺素在该损伤中的作用。 肾上腺素是一种儿茶酚胺，建议在严重过敏反应时静脉内给药。 由于其血管收缩特性，肾上腺素可以立即恢复血压。 已经在急性心力衰竭中描述了肾上腺素对冠状动脉和心肌的有害作用。 在过敏反应中是否存在类似的影响尚不清楚。

   “NASA-CAT”研究的目的是评估心肌参与过敏反应并确定肾上腺素在这种损伤中的作用。

   作为辅助研究“NASA-CAT”的一部分，将不会收集额外的血样。 心肌生物标志物（肌钙蛋白过敏、钠尿肽、肾上腺髓质素、和肽素）的剂量将在 500 μl 样本中进行，样本来自 NASA 研究中储存的血清和/或血浆。