妊娠中のビタミンB12補給

調査地域: 毎月かなりの数の妊婦 (月あたり約 300 ～ 400 人) が登録しているミルプールの産科クリニックが、地元の妊婦の募集のために選択されます。 ミルプールのコミュニティは、移住率が低いです。 妊娠 11 ～ 14 週でクリニックに通い、安全な分娩を確保するためにクリニックでの出産を計画している妊婦が選択されます。 安全な出産と出産前ケアのためのクリニックの構造化されたサービスと標準的な出産前ケアが各研究参加者に提供されます。

調査母集団: 妊娠中の女性 (n=120) は、妊娠 11 ～ 14 週の間にスクリーニングされます。 生後 3 か月の幼児 (n=120)。

包含基準:

• 7.0-11 g/dLの範囲のHbレベル
• 年齢：22～35歳
• 妊娠第 2 期の初めの母親 (つまり、妊娠 11 ～ 14 週)
• 妊娠中にダッカに滞在する意思があり、分娩のためにクリニックに入院する意思がある
• 自己申告の最終月経（LMP）および尿妊娠検査を使用して、妊娠期間を決定します。

除外基準:

• 重度の貧血の女性;ヘモグロビン濃度 <7.0 g/dL
• 全身性疾患の病歴または存在
• 以前の複雑な妊娠または早産、中絶の H/O
• インフルエンザワクチンの受領 定義: WHO によると、貧血は成人女性のヘモグロビン濃度が 12 g/dL 未満と定義されています。 貧血はさらに軽度 (10-11.9) に分類されます。 g/dL)、中程度 (7.0 ～ 9.9 g/dL)、重度 (<7.0 g/dL) です。

研究デザイン：二重盲検対照試験。インフォームド コンセントが得られた後、妊娠中の女性は、毎日 60 mg の Fe と 400 µg の葉酸を摂取するプラセボ群 (N=60) または 250 µg のビタミン B12 を摂取する補給群 (N=60) のいずれかに無作為に割り当てられます。 60 mg の Fe と 400 µg の葉酸を追加。 第三者機関（グラクソスミスクライン、バングラデシュ）がビタミン B12 またはプラセボ カプセルをボトルで準備し、供給します。 2 つのカプセルは、外観と味が似ています。 ボトルには A と B のラベルが付けられます。会社の担当者は、研究が終了するまで機密を保持します。 1人目の参加者が受け取るカプセルAまたはBは抽選で決定され、その後、代替参加者ごとにそのカプセルが受け取られます。 参加者のIDは順次付与されます。 葉酸鉄とビタミン B12 の毎日の補給は、産後 3 か月まで継続します。 妊娠 26 ～ 28 週で、すべての母親は 1 回の不活化 3 価インフルエンザ ウイルス ワクチンを筋肉内投与 (IM) されます。 WHO が北半球に推奨する標準的な不活化 3 価インフルエンザは、このプロジェクトの商用ソース (GlaxoSmithKline; Dresden, Germany) から入手します。 フィールド ワーカー (FW) は、2 週間分のプラセボまたはサプリメントのいずれかを直接母親に届け、カードと残りの錠剤でコンプライアンスを確認します。 妊娠中の女性は、その後のフォローアップ訪問の時間について明確に指示され、それぞれの家庭でフォローアップされたときに日付が思い出されます.

ルーチンサービス：クリニックが提供するルーチンケアには、Hb測定、身体検査（体重、血圧、脈拍数、腹部検査、胎児心拍数、必要に応じて超音波検査）、食事に関するカウンセリング、妊娠中の通常の手順の説明が含まれます、関連する潜在的な合併症、そのようなイベント中にクリニックに行く方法と時期など。 このサービスは、看護師の支援を受けてクリニックの医師によって提供されます。

標本: 妊娠 11 ～ 14 週の母親から空腹時末梢血、分娩時の臍帯血、24 時間以内の初乳、産後 3 か月後の母親からの母乳と末梢血を採取します。 乳児の末梢血は、生後 3 か月で採取されます。 血液は、抗凝固剤 (EDTA) でコーティングされたチューブに収集され、密度勾配遠心分離のために Ficoll-paque に重ねられます。血漿は上部から分離され、後の分析のために-70ºCで保存されます。 末梢血単核細胞 (PBMC) は、細胞性免疫応答を研究するために分離されます。 尿は、妊娠 11 ～ 14 週および 3 か月の時点で母親から採取されます。 遺伝子ベースの研究では、DNA サンプルは切り離され、標準的な手順に従って身元が匿名化されます。

方法: 全血中の総ヘモグロビン (Hb) は、Drabakins Reagent (Sigma Diagnostics) を使用した分光測光法によって測定されます。 標準化された血液塗抹標本染色は、巨赤芽球性貧血（大卵球細胞および過分節好中球の存在）を評価するために使用されます。 フェリチン、血清トランスフェリン受容体（sTfR）、およびα-糖タンパク質（AGP）は、酵素免疫アッセイによって血漿で測定されます。 血漿中のビタミン B12 と葉酸、および母乳中のビタミン B12 は、Roche 自動分析装置 Cobas e411 で分析されます。 尿中メチルマロン酸（MMA）は、蛍光検出器支援HPLC法（Sigma Diagnostics、ミズーリ州セントルイス）によって測定されます。 簡単に言えば、MMAは酢酸エチルで尿サンプルから抽出されます。 抽出物を乾燥させ、モノダンシルカダベリンおよびジシクロヘキシルカルボジイミドで誘導体化してから、HPLCに注入します。 エチルマロン酸は、内部標準として使用されます。 血漿および初乳/母乳中のインフルエンザワクチン特異的抗体応答 (IgA、IgG) [分泌型 IgA (s-IgA)] を ELISA で測定します。 PBMCは、芽球形成反応のためにインフルエンザワクチンで刺激されます。 ゲノム DNA のメチル化は、細菌の CpG メチルトランスフェラーゼ SssI を使用して、S-[3H-メチル] アデノシルメチオニンから放射性標識されたメチル基を「受容」する単離された DNA の能力に基づくメチル受容アッセイによって測定されます。 総ホモシステイン (tHcy) は、カラム流出液中のチオールが単一の金-水銀電極によって検出される蛍光検出を備えた HPLC を使用して、尿サンプルで測定されます。 NaBH4 は還元剤として使用され、サンプルの誘導体化は必要ありません。 ALPL、MTHFR C677T、および FUT2 遺伝子の変異は、PCR-RFLP アッセイおよび DNA 配列決定によって決定されます。 これらのアッセイはすべて、貧血の生化学マーカー、ワクチン特異的抗体反応、DNAメチル化および多型アッセイを決定するための施設を備えた栄養生化学研究所で実施されます。

人体計測および罹患率の評価: 母体の人体計測測定は、トレーニングを受けた FW によって、補給の開始時および補給後の期間中毎月行われます。 出生時体重と横臥位の長さは生後 72 時間以内に測定され、月齢 3 か月までの FW によって毎月の測定が行われます。 訪問のたびに (隔週)、フィールド リサーチ アシスタント (FRA) は、母親とその乳児の罹患率に関するデータを母親から収集します (例: 構造化されたアンケートを使用して、過去 7 日間の下痢、呼吸器感染症、皮膚疾患、疾患エピソードの重症度の評価）。 FRA は、初回およびその後のフォローアップ訪問の時間について女性に通知し、女性が明確に理解したかどうかを確認します。 さらに、調査参加者には、可能な場合は携帯電話で連絡を取り、訪問日を思い出させます。 それぞれの家でフォローアップすると、次回の訪問日が思い出されます。

うつ病スコア：参加者は、疫学研究センター-うつ病（CES-D）アンケートを使用して、精神状態についてインタビューを受けます。 アンケートには、うつ病の 6 つの主要な側面である 20 項目が含まれています。抑うつ気分、絶望感、無価値感、疲労、食欲、睡眠障害です。 それはベンガル語に翻訳され、以前の研究で試験的に使用され、過去 7 日間に女性がどのように感じたかが含まれています。 それは以前に農村部および都市部のバングラデシュの女性で使用されており（Hamadani、未発表のデータ）、子供の成長と発達と賢明に相関することがわかっています. FRA は、女性にインタビューするために広範囲に訓練され、調査前および調査中に観察者間の信頼性が得られます。 インタビューは、FRA の訪問中に女性の自宅で 2 回実施されます。最初はベースライン時と産後 3 か月です。 データは、この種の情報を扱う知識と経験を持つ共同研究者 (JDH) の 1 人によって分析および解釈されます。

食料安全保障と食事の多様性: 食料不安が食料摂取、健康、栄養状態に与える影響は、多くの開発途上国で観察されており、食料不安のある世帯では、食料が確保されている世帯よりも 1 人あたりの 1 日あたりの総食料支出が大幅に低いことが示されています。 食料不安は、母親の不安や抑うつと関連しており、授乳期間や子供の栄養状態などの乳児ケアの実践に大きな悪影響を与える可能性があります. バングラデシュの人口の約半分は食料不安です。 バングラデシュの飢餓と子供の栄養失調は、世界で最も高いレベルにあります。 バングラデシュの農村人口の約 31% が「慢性的な貧困」に苦しんでおり、農村世帯の約 19% が 1 日 3 回の食事を十分にとることができません。 このように、バングラデシュでは、健康と栄養状態への多大な影響に関連する家庭の食糧不安が、バングラデシュでますます懸念されています。 家庭の食料安全保障の状態と研究参加者の食事の多様性（母親の食事エネルギー、タンパク質、ビタミンB-12、葉酸摂取量を含む）は、最初に、妊娠中の女性が研究に登録されるベースラインで評価され、その後は隔週で評価されます。勉強。 USDA 食品組成データベースは、ビタミン B-12 摂取量の評価に使用されます。 結果の測定に重大な影響を与える可能性のある食料安全保障状況の季節変動が評価されます。 食料安全保障モジュールに関する構造化されたアンケートは、家庭の食料安全保障状況を測定するために使用されます。 FRA は、女性にインタビューするように訓練されます。産前産後の家庭訪問時に面談を行います。 データは、この種の情報を扱う知識と経験を持つ共同研究者 (KKS) の 1 人によって分析および解釈されます。