Прием витамина B12 во время беременности

Область исследования: Родильная клиника в Мирпуре, куда ежемесячно поступает значительное количество беременных женщин (около 300-400 в месяц), будет выбрана для набора местных беременных женщин. Сообщество в Мирпуре имеет низкий уровень оттока. Будут отобраны беременные женщины, посещающие клинику на 11-14 неделе беременности и планирующие рожать в клинике, чтобы обеспечить безопасные роды. Каждой участнице исследования будет предоставлена ​​структурированная услуга и стандартная дородовая помощь клиники для безопасных родов и дородовой помощи.

Исследуемая популяция: Беременные женщины (n=120) будут проходить скрининг в течение 11-14 недель беременности. Младенцы (n=120) в возрасте 3 мес.

Критерии включения:

• Уровень Hb в диапазоне 7,0-11 г/дл
• Возраст: 22-35 лет
• Матери в начале второго триместра (т.е. на 11-14 неделе беременности)
• Желание остаться в Дакке во время беременности и желание попасть в клинику для родов
• Самооценка последнего менструального цикла (LMP) и анализ мочи на беременность будут использоваться для определения гестационного возраста.

Критерий исключения:

• Женщины с тяжелой анемией; концентрация гемоглобина <7,0 г/дл
• История или наличие системного заболевания
• Перенесенные ранее осложненные беременности или преждевременные роды, аборты
• Получение противогриппозной вакцины Определение: По данным ВОЗ, анемия определяется как концентрация гемоглобина <12 г/дл у взрослых женщин. Анемия далее классифицируется как легкая (10-11,9 г/дл), умеренной (7,0-9,9 г/дл) и тяжелой (<7,0 г/дл).

Дизайн исследования: двойное слепое контролируемое исследование; После получения информированного согласия беременные женщины будут случайным образом распределены либо в группу плацебо (N=60), которая будет получать 60 мг Fe и 400 мкг фолиевой кислоты в день, либо в группу добавок (N=60), которая будет получать 250 мкг витамина B12 в день. дополнительно к 60 мг Fe и 400 мкг фолиевой кислоты. Третья сторона (GlaxoSmithKline, Бангладеш) подготовит и поставит капсулы с витамином B12 или плацебо во флаконах. Две капсулы будут похожи по внешнему виду и вкусу. Они будут маркировать бутылки как A и B. Ответственный персонал компании будет хранить это в тайне до конца исследования. Капсула A или B, которую получит 1-й участник, будет определена лотереей, после чего эту капсулу получит каждый второй участник. Идентификаторы участников будут даны последовательно. Ежедневный прием железо-фолиевой кислоты, а также витамина В12 будет продолжаться до 3-х месяцев после родов. На 26-28 неделе беременности всем матерям внутримышечно (в/м) вводят одну инактивированную трехвалентную вакцину против вируса гриппа. Стандартный инактивированный трехвалентный вирус гриппа, рекомендованный ВОЗ для Северного полушария, будет получен из коммерческих источников для этого проекта (GlaxoSmithKline; Дрезден, Германия). Полевые работники (FW) лично доставят матерям двухнедельную дозу плацебо или пищевых добавок и проверят соответствие по карточкам и оставшимся таблеткам. Беременные женщины будут четко проинструктированы о времени их последующих контрольных посещений, а при последующем наблюдении в соответствующих домах им напомнят о датах.

Обычные услуги: рутинная помощь, предоставляемая клиникой, включает измерение гемоглобина, физикальное обследование (масса тела, артериальное давление, частота пульса, проверка брюшной полости, частота сердечных сокращений плода, ультразвуковое исследование по мере необходимости), консультирование по диете, описание обычных процедур во время беременности. , связанные с этим возможные осложнения, как и когда обращаться в клинику во время таких событий и т. д. Эта услуга предоставляется врачом поликлиники при содействии медсестер.

Образцы: периферическую кровь натощак собирают у матерей в возрасте от 11 до 14 недель беременности, пуповинную кровь при родах, молозиво в течение 24 часов, грудное молоко и периферическую кровь у матерей через три месяца после родов. Периферическую кровь у младенцев собирают в возрасте трех месяцев. Кровь будет собираться в пробирки, покрытые антикоагулянтом (ЭДТА), и помещаться слоями на Ficoll-paque для центрифугирования в градиенте плотности; плазма будет отделяться сверху и храниться при -70ºC для последующего анализа. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) будут выделены для изучения клеточных иммунных реакций. Моча будет собираться у матерей на 11-14 неделе беременности и в три месяца. Для исследований на основе генов образцы ДНК будут разъединены, и личность будет анонимной в соответствии со стандартными процедурами.

Методы. Общий гемоглобин (Hb) в цельной крови будет измеряться спектрофотометрически с использованием реактива Драбакинса (Sigma Diagnostics). Стандартизированное окрашивание мазка крови будет использоваться для оценки мегалобластной анемии (наличие макроовалоцитов и гиперсегментированных нейтрофилов). Ферритин, рецептор трансферрина сыворотки (sTfR) и α-гликопротеин (AGP) будут измеряться в плазме с помощью иммуноферментного анализа. Витамин B12 и фолиевая кислота в плазме, а также витамин B12 в грудном молоке будут определяться на автоанализаторе Roche Cobas e411. Содержание метилмалоновой кислоты в моче (ММА) будет измеряться методом ВЭЖХ с использованием флуоресцентного детектора (Sigma Diagnostics, Сент-Луис, Миссури. Кратко ММА будет извлечен из образца мочи с помощью этилацетата. Экстракт сушат и дериватизируют монодансилкадаверином и дициклогексилкарбодиимидом перед введением в ВЭЖХ. Этилмалоновая кислота будет использоваться в качестве внутреннего стандарта. Реакция антител, специфичных к противогриппозной вакцине (IgA, IgG) в плазме и молозиве/грудном молоке [секреторный IgA (s-IgA)], будет измеряться с помощью ELISA. РВМС будут стимулировать вакциной против гриппа для ответа на бластогенез. Метилирование геномной ДНК будет измеряться с помощью анализа приемлемости метила, основанного на способности выделенной ДНК «принимать» меченые радиоактивным изотопом метильные группы из S-[3H-метил] аденозилметионина с использованием бактериальной CpG-метилтрансферазы SssI. Общий гомоцистеин (tHcy) будет измеряться в образцах мочи с помощью ВЭЖХ с флуориметрическим обнаружением, при котором тиолы в вытекающем из колонки потоке обнаруживаются с помощью одного золотортутного электрода. NaBH4 используется в качестве восстановителя, и дериватизация образца не требуется. Мутации в генах ALPL, MTHFR C677T и FUT2 будут определяться анализом ПЦР-ПДРФ и секвенированием ДНК. Все эти анализы будут проводиться в лаборатории биохимии питания, в которой есть средства для определения биохимических маркеров анемии, ответов вакциноспецифических антител, метилирования ДНК и полиморфизма.

Оценка антропометрии и заболеваемости: Антропометрические измерения матерей будут проводиться в начале введения добавок и ежемесячно в течение периода после введения добавок обученными РС. Масса тела при рождении и длина тела в положении лежа будут измеряться в течение 72 часов после рождения, а ежемесячные измерения будут проводиться FW в возрасте до 3 месяцев. При каждом посещении (раз в две недели) ассистент полевых исследований (FRA) будет собирать данные от матерей о заболеваемости матерей и их детей (например, диарея, респираторные инфекции, кожные заболевания, оценка тяжести эпизодов заболевания) за предшествующие 7 дней с использованием структурированных анкет. FRA информируют женщин о времени первого и последующих контрольных визитов и проверяют, все ли они поняли. Кроме того, с участниками исследования свяжутся по мобильным телефонам, когда они будут доступны, чтобы напомнить им о датах посещения. При последующем наблюдении в соответствующих домах им напомнят даты следующего визита.

Оценка депрессии: участники будут опрошены об их психическом состоянии с использованием опросника Центра эпидемиологических исследований депрессии (CES-D). Опросник содержит 20 пунктов, охватывающих шесть основных аспектов депрессии: депрессивное настроение, безнадежность, бесполезность, утомляемость, нарушения аппетита и сна. Он был переведен на бенгали и опробован в более ранних исследованиях и включает в себя то, как женщины чувствовали себя в течение предшествующих 7 дней. Ранее он применялся у сельских и городских бангладешских женщин (Хамадани, неопубликованные данные), и было обнаружено, что он заметно коррелирует с ростом и развитием детей. FRA будут тщательно обучены интервьюировать женщин, и будет получена надежность от наблюдателей до и во время исследования. Интервью будет проводиться дважды в домах женщин во время визитов FRA, сначала на исходном уровне и через 3 месяца после родов. Данные будут проанализированы и интерпретированы одним из соисследователей (JDH), который обладает знаниями и опытом работы с такого рода информацией.

Продовольственная безопасность и разнообразие рациона. Влияние отсутствия продовольственной безопасности на потребление пищи, состояние здоровья и состояние питания наблюдалось во многих развивающихся странах, показывая значительно более низкие общие ежедневные расходы на продовольствие на душу населения в домохозяйствах, не обеспеченных продовольствием, по сравнению с домохозяйствами, обеспеченными продовольствием. Отсутствие продовольственной безопасности было связано с материнской тревогой и депрессией, что может иметь сильное негативное влияние на методы ухода за младенцами, включая продолжительность грудного вскармливания, а также состояние питания ребенка. Около половины населения Бангладеш испытывает нехватку продовольствия. Голод и детское недоедание в Бангладеш являются одними из самых высоких в мире. Около 31% сельского населения Бангладеш страдает от «хронической бедности», а около 19% сельских домохозяйств не могут иметь «полноценное трехразовое питание». Таким образом, отсутствие продовольственной безопасности домохозяйств в связи с ее огромным воздействием на здоровье и состояние питания человека вызывает растущую озабоченность в Бангладеш. Статус продовольственной безопасности домохозяйства и разнообразие рациона питания участников исследования (включая калорийность питания матерей, потребление белка, витамина B-12 и фолиевой кислоты) будут оцениваться в первую очередь, на исходном уровне, когда беременные женщины будут включены в исследование, а затем каждые две недели в течение всего периода исследования. изучать. База данных по составу продуктов питания Министерства сельского хозяйства США будет использоваться для оценки потребления витамина B-12. Будут оцениваться любые сезонные колебания состояния продовольственной безопасности, которые могут оказать существенное влияние на итоговые показатели. Структурированная анкета по модулю продовольственной безопасности будет использоваться для измерения состояния продовольственной безопасности домохозяйств. FRA будут обучены проводить интервью с женщинами; они будут брать интервью, когда будут посещать дом в дородовой и послеродовой периоды. Данные будут проанализированы и интерпретированы одним из соисследователей (KKS), который обладает знаниями и опытом работы с такого рода информацией.