Vitamine B12-suppletie tijdens de zwangerschap

Studiegebied: Een kraamkliniek in Mirpur met een aanzienlijk aantal zwangere vrouwen dat zich elke maand inschrijft (ongeveer 300-400/maand) zal worden geselecteerd voor de rekrutering van lokale zwangere vrouwen. De gemeenschap in Mirpur heeft een laag emigratiepercentage. Zwangere vrouwen die de kliniek bezoeken na 11-14 weken zwangerschap en van plan zijn om in de kliniek te bevallen om een ​​veilige bevalling te garanderen, worden geselecteerd. De gestructureerde service en standaard prenatale zorg van de kliniek voor een veilige bevalling en prenatale zorg zal aan elke deelnemer aan het onderzoek worden verstrekt.

Onderzoekspopulatie: Zwangere vrouwen (n=120) zullen gedurende 11-14 weken zwangerschap worden gescreend. Zuigelingen (n=120) op de leeftijd van 3 maanden.

Inclusiecriteria:

• Hb-niveau in het bereik van 7,0-11 g/dL
• Leeftijd: 22-35 jaar
• Moeders aan het begin van het tweede trimester (d.w.z. na 11-14 weken zwangerschap)
• Bereid om in Dhaka te blijven tijdens de zwangerschap en bereid om opgenomen te worden in de kliniek voor bevalling
• Zelfgerapporteerde laatste menstruatieperiode (LMP) en zwangerschapstest in urine worden gebruikt om de zwangerschapsduur te bepalen.

Uitsluitingscriteria:

• Vrouwen met ernstige bloedarmoede; hemoglobineconcentratie <7,0 g/dL
• Geschiedenis of aanwezigheid van systemische ziekte
• H/O van eerdere gecompliceerde zwangerschappen of vroeggeboorte, abortus
• Ontvangst van griepvaccin Definitie: Volgens de WHO wordt bloedarmoede gedefinieerd als een hemoglobineconcentratie <12 g/dL bij volwassen vrouwen. Bloedarmoede wordt verder gecategoriseerd als mild (10-11.9 g/dl), matig (7,0-9,9 g/dl) en ernstig (<7,0 g/dl).

Onderzoeksopzet: een dubbelblind gecontroleerd onderzoek; Nadat geïnformeerde toestemming is verkregen, zullen zwangere vrouwen willekeurig worden toegewezen aan de placebogroep (N=60) die dagelijks 60 mg Fe en 400 µg folaat zal krijgen of de suppletiegroep (N=60) die 250 µg vitamine B12 zal krijgen in naast 60 mg Fe en 400 µg folaat. Een derde partij (GlaxoSmithKline, Bangladesh) zal vitamine B12- of placebocapsules in flessen bereiden en leveren. De twee capsules zullen qua uiterlijk en smaak vergelijkbaar zijn. Ze zullen de flessen labelen als A en B. Het verantwoordelijke personeel van het bedrijf zal het vertrouwelijk houden tot het einde van de studie. De capsule A of B die door de 1e deelnemer wordt ontvangen, wordt bepaald door een loterij, en daarna ontvangt elke alternatieve deelnemer die capsule. De ID's van de deelnemers worden achtereenvolgens gegeven. De dagelijkse suppletie van ijzerfolaat en B12 gaat door tot 3 maanden na de bevalling. Bij een zwangerschapsduur van 26-28 weken krijgen alle moeders één geïnactiveerd, trivalent influenzavirusvaccin intramusculair (IM) toegediend. Standaard geïnactiveerde driewaardige influenza zoals aanbevolen door de WHO voor het noordelijk halfrond zal voor dit project worden verkregen van commerciële bronnen (GlaxoSmithKline; Dresden, Duitsland). Veldwerkers (FW) zullen een dosis van een placebo of supplementen voor twee weken persoonlijk aan moeders afleveren en zullen de naleving controleren met kaart en overgebleven pillen. De zwangere vrouwen zullen duidelijk worden geïnstrueerd over de tijden voor hun volgende vervolgbezoeken, en wanneer ze in de respectieve huizen worden opgevolgd, zullen ze aan de data worden herinnerd.

Routineservice: De routinematige zorg die door de kliniek wordt geboden, omvat Hb-meting, lichamelijk onderzoek (gewicht, bloeddruk, polsslag, abdominale controle, foetale hartslag, zo nodig echografisch onderzoek), advies over dieet, beschrijvingen van normale procedures tijdens de zwangerschap , bijbehorende mogelijke complicaties, hoe en wanneer naar de kliniek te gaan tijdens dergelijke evenementen enz. Deze dienst wordt verzorgd door de polikliniekarts met assistentie van de verpleegkundigen.

Specimens: Nuchter perifeer bloed wordt afgenomen bij moeders bij een zwangerschapsduur van 11 tot 14 weken, navelstrengbloed bij de bevalling, colostrum binnen 24 uur en moedermelk en perifeer bloed bij moeders na drie maanden postpartum. Perifeer bloed van baby's wordt verzameld op de leeftijd van drie maanden. Bloed zal worden verzameld in met anticoagulantia (EDTA) gecoate buisjes en in lagen op Ficoll-paque worden aangebracht voor centrifugatie met een dichtheidsgradiënt; plasma wordt van bovenaf gescheiden en bij -70ºC bewaard voor latere analyse. Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) zullen worden gescheiden voor het bestuderen van cellulaire immuunresponsen. Urine wordt verzameld bij moeders na 11 - 14 weken zwangerschap en na drie maanden. Voor op genen gebaseerde onderzoeken worden de DNA-monsters ontkoppeld en wordt de identiteit anoniem gemaakt volgens de standaardprocedures.

Methoden: Totaal hemoglobine (Hb) in volbloed zal worden gemeten door middel van spectrofotometrie met behulp van Drabakins-reagens (Sigma Diagnostics). Gestandaardiseerde bloeduitstrijkjes zullen worden gebruikt voor het evalueren van megaloblastaire anemie (aanwezigheid van macro-ovaalocyten en hypergesegmenteerde neutrofielen). Ferritine, serumtransferrinereceptor (sTfR) en α-glycoproteïne (AGP) zullen in plasma worden gemeten door middel van enzym-immuunassays. Vitamine B12 en foliumzuur in plasma en vitamine B12 in moedermelk zullen worden getest in Roche autoanalyzer Cobas e411. Urine-methylmalonzuur (MMA) zal worden gemeten door middel van een fluorescentiedetector-ondersteunde HPLC-methode (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO. In het kort zal MMA worden geëxtraheerd uit urinemonster met ethylacetaat. Het extract wordt gedroogd en gederivatiseerd met monodansylcadaverine en dicyclohexyl-carbodiimide voorafgaand aan injectie op de HPLC. Ethylmalonzuur zal als interne standaard worden gebruikt. Influenzavaccinspecifieke antilichaamresponsen (IgA, IgG) in plasma en colostrum/moedermelk [uitgescheiden IgA (s-IgA)] zullen worden gemeten met ELISA. PBMC zal worden gestimuleerd met griepvaccin voor respons op blastogenese. Genomische DNA-methylatie zal worden gemeten door middel van de methylacceptatietest gebaseerd op het vermogen van geïsoleerd DNA om radioactief gemerkte methylgroepen van S-[3H-methyl]-adenosylmethionine te "accepteren", met behulp van de bacteriële CpG-methyltransferase SssI. Totaal homocysteïne (tHcy) zal worden gemeten in urinemonsters met behulp van HPLC met fluorimetrische detectie waarbij thiolen in het kolomeffluent worden gedetecteerd door een enkele goud-kwikelektrode. NaBH4 wordt gebruikt als reductiemiddel en er is geen derivatisering van het monster vereist. Mutaties in de ALPL-, MTHFR C677T- en FUT2-genen zullen worden bepaald door middel van PCR-RFLP-assay en DNA-sequencing. Al deze assays zullen worden uitgevoerd in het Nutritional Biochemistry Lab, dat de faciliteiten heeft om de biochemische markers van anemie, vaccinspecifieke antilichaamresponsen, DNA-methylatie en polymorfisme-assays te bepalen.

Beoordeling van antropometrie en morbiditeit: Maternale antropometrische metingen zullen worden uitgevoerd aan het begin van de suppletie en maandelijks tijdens de post-suppletieperiode door getrainde FW's. Het geboortegewicht en de lengte van de ligfiets worden binnen 72 uur na de geboorte gemeten en maandelijkse metingen worden uitgevoerd door FW tot een leeftijd van 3 maanden. Bij elk bezoek (tweewekelijks) verzamelt Field Research Assistant (FRA) gegevens van moeders over de morbiditeit van moeders en hun baby's (bijv. diarree, luchtweginfecties, huidziekten, beoordeling van de ernst van ziekte-episodes) van de afgelopen 7 dagen met behulp van gestructureerde vragenlijsten. De FRA's zullen de vrouwen informeren over de tijden van de eerste en volgende vervolgbezoeken en controleren of ze het goed begrepen hebben. Bovendien zullen studiedeelnemers via mobiele telefoons worden gecontacteerd wanneer deze beschikbaar zijn om hen te herinneren aan de bezoekdata. Bij opvolging in de respectievelijke huizen zullen ze worden herinnerd aan de volgende bezoekdata.

Depressiescore: deelnemers worden geïnterviewd over hun mentale toestand met behulp van de vragenlijst van het Center for Epidemiological Studies-Depression (CES-D). De vragenlijst bevat 20 items met zes belangrijke aspecten van depressie: depressieve stemming, hopeloosheid, waardeloosheid, vermoeidheid, eetlust en slaapstoornissen. Het werd vertaald in het Bengaals en getest in eerdere studies en gaat over hoe de vrouwen zich de afgelopen 7 dagen voelden. Het is eerder gebruikt bij Bengaalse vrouwen op het platteland en in de stad (Hamadani, niet-gepubliceerde gegevens) en blijkt op een verstandige manier verband te houden met de groei en ontwikkeling van kinderen. De FRA's zullen uitgebreid worden opgeleid om de vrouwen te interviewen en de interobserverbetrouwbaarheid zal voor en tijdens het onderzoek worden verkregen. Het interview zal twee keer bij de vrouwen thuis worden afgenomen tijdens de bezoeken van de FRA's, eerst bij baseline en drie maanden na de bevalling. De gegevens worden geanalyseerd en geïnterpreteerd door een van de medeonderzoekers (JDH) die kennis en ervaring heeft met het omgaan met dit soort informatie.

Voedselzekerheid en voedingsdiversiteit: Het effect van voedselonzekerheid op de voedselinname, gezondheid en voedingsstatus is waargenomen in veel ontwikkelingslanden, waarbij de totale dagelijkse voedseluitgaven per hoofd van de bevolking significant lager zijn in huishoudens met voedselonzekerheid dan in huishoudens met voedselzekerheid. Voedselonzekerheid ging gepaard met angst en depressie bij de moeder, wat een sterke negatieve invloed kan hebben op de zorg voor zuigelingen, waaronder de duur van de borstvoeding en de voedingsstatus van het kind. Ongeveer de helft van de Bengaalse bevolking is voedselonzeker. Honger en ondervoeding bij kinderen in Bangladesh behoren tot de hoogste ter wereld. Ongeveer 31% van de plattelandsbevolking in Bangladesh lijdt aan "chronische armoede" en ongeveer 19% van de huishoudens op het platteland kan geen "volledige drie maaltijden" per dag krijgen. Voedselonzekerheid in huishoudens in relatie tot de enorme impact ervan op de gezondheid en voedingsstatus van de mens is dus een groeiende zorg in Bangladesh. De voedselzekerheidsstatus van het gezin en de diversiteit van de voeding van de deelnemers aan de studie (inclusief de inname van energie door de moeder, eiwit, vitamine B12 en foliumzuur) zullen eerst worden beoordeeld, bij de basislijn wanneer de zwangere vrouwen zullen worden ingeschreven in de studie en daarna tweewekelijks gedurende de hele studie. studie. De USDA-database met voedselsamenstelling zal worden gebruikt voor het beoordelen van de inname van vitamine B12. Elke seizoensvariatie van de voedselzekerheidsstatus zal worden beoordeeld die een significante impact kan hebben op de uitkomstmaten. Er zal een gestructureerde vragenlijst over de voedselzekerheidsmodule worden gebruikt om de voedselzekerheidsstatus van huishoudens te meten. De FRA's zullen worden opgeleid om de vrouwen te interviewen; ze zullen interviews afnemen wanneer ze tijdens de prenatale en postnatale periode thuis bezoeken. De gegevens worden geanalyseerd en geïnterpreteerd door een van de medeonderzoekers (KKS) die kennis en ervaring heeft met het omgaan met dit soort informatie.