Vitamin B12 tilskud under graviditet

Undersøgelsesområde: En barselsklinik i Mirpur med et betydeligt antal gravide kvinder, der tilmelder sig hver måned (ca. 300-400/måned) vil blive udvalgt til rekruttering af lokale gravide kvinder. Samfundet i Mirpur har en lav udvandringsrate. Gravide kvinder, der går på klinikken ved 11-14 ugers graviditet og planlægger at føde på klinikken for at sikre sikker fødsel, vil blive udvalgt. Klinikkens strukturerede service og standard svangerskabspleje for sikker levering og svangrepleje vil blive leveret til hver undersøgelsesdeltager.

Undersøgelsespopulation: Gravide kvinder (n=120) vil blive screenet under 11-14 ugers graviditet. Spædbørn (n=120) ved 3 måneders alderen.

Inklusionskriterier:

• Hb-niveau i området 7,0-11 g/dL
• Alder: 22-35 år
• Mødre i begyndelsen af ​​andet trimester (dvs. ved 11-14 ugers graviditet)
• Villig til at blive i Dhaka under graviditeten og villig til at blive indlagt i klinikken til levering
• Selvrapporteret sidste menstruationsperiode (LMP) og uringraviditetstest vil blive brugt til at bestemme svangerskabsalderen.

Ekskluderingskriterier:

• Kvinder med svær anæmi; hæmoglobinkoncentration <7,0 g/dL
• Anamnese eller tilstedeværelse af systemisk sygdom
• H/O af tidligere komplicerede graviditeter eller for tidlig fødsel, abort
• Modtagelse af influenzavaccine Definition: Ifølge WHO defineres anæmi som en hæmoglobinkoncentration <12 g/dL hos voksne kvinder. Anæmi er yderligere kategoriseret som mild (10-11.9 g/dL), moderat (7,0-9,9 g/dL) og svær (<7,0 g/dL).

Studiedesign: Et dobbeltblindt kontrolleret forsøg; Efter informeret samtykke er opnået, vil gravide kvinder blive tilfældigt tildelt enten placebogruppen (N=60), der vil modtage 60 mg Fe og 400 µg folat dagligt, eller tilskudsgruppen (N=60), der vil modtage 250 µg vitamin B12 i tilsætning til 60 mg Fe og 400 µg folat. En tredjepart (GlaxoSmithKline, Bangladesh) vil forberede og levere vitamin B12 eller placebo-kapsler i flasker. De to kapsler vil være ens i udseende og smag. De vil mærke flaskerne som A og B. Det ansvarlige personale fra virksomheden vil holde det fortroligt indtil undersøgelsens afslutning. Kapslen enten A eller B, der skal modtages af den 1. deltager, vil blive bestemt ved et lotteri, og derefter vil hver alternativ deltager modtage denne kapsel. Deltagernes ID vil blive givet sekventielt. Det daglige tilskud af jern-folat samt af B12 vil fortsætte op til 3 måneder efter fødslen. Ved 26-28 svangerskabsuger vil alle mødre modtage en enkelt inaktiveret, trivalent influenzavirusvaccine intramuskulært (IM). Standard inaktiveret trivalent influenza som anbefalet af WHO for den nordlige halvkugle vil blive opnået fra kommercielle kilder til dette projekt (GlaxoSmithKline; Dresden, Tyskland). Feltarbejdere (FW) vil levere to ugers dosis af enten placebo eller kosttilskud til mødre personligt og vil kontrollere overensstemmelsen med kort og resterende piller. De gravide vil blive tydeligt instrueret om tidspunkterne for deres efterfølgende kontrolbesøg, og ved opfølgning i de respektive hjem vil de blive mindet om datoerne.

Rutineservice: Klinikkens rutinemæssige pleje omfatter Hb-måling, fysisk undersøgelse (vægt, blodtryk, puls, mavekontrol, føtal puls, ultralydsundersøgelse efter behov), rådgivning om kost, beskrivelser af normale procedurer under graviditeten , tilknyttede potentielle komplikationer, hvordan og hvornår man skal henvende sig til klinikken under sådanne begivenheder osv. Denne service ydes af kliniklægen med assistance fra sygeplejerskerne.

Prøver: Fastende perifert blod vil blive indsamlet fra mødre ved 11 til 14 ugers graviditet, navlestrengsblod ved fødslen, råmælk inden for 24 timer og modermælk og perifert blod fra mødre efter tre måneder efter fødslen. Perifert blod fra spædbørn vil blive indsamlet ved tre måneders alderen. Blod vil blive opsamlet i antikoagulant (EDTA) coatede rør og lagt på Ficoll-paque til tæthedsgradientcentrifugering; plasma vil blive adskilt fra toppen og opbevaret ved -70ºC til senere analyse. Mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) vil blive adskilt for at studere cellulære immunresponser. Urin vil blive indsamlet fra mødre ved 11 - 14 ugers graviditet og ved tre måneder. For genbaserede undersøgelser vil DNA-prøverne blive afkoblet, og identiteten vil blive gjort anonym i henhold til standardprocedurerne.

Metoder: Total hæmoglobin (Hb) i fuldblod vil blive målt ved spektrofotometri ved hjælp af Drabakins Reagent (Sigma Diagnostics). Standardiseret blodudstrygningsfarvning vil blive brugt til at evaluere megaloblastisk anæmi (tilstedeværelse af makroovalocytter og hypersegmenterede neutrofiler). Ferritin, serumtransferrinreceptor (sTfR) og α-glycoprotein (AGP) vil blive målt i plasma ved hjælp af enzymimmunassays. Vitamin B12 og folat i plasma og vitamin B12 i modermælk vil blive analyseret i Roche autoanalyzer Cobas e411. Urin-methylmalonsyre (MMA) vil blive målt ved hjælp af fluorescensdetektor-assisteret HPLC-metode (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO. Kort fortalt vil MMA blive ekstraheret fra urinprøven med ethylacetat. Ekstrakten tørres og derivatiseres med monodansylcadaverin og dicyclohexylcarbodiimid før injektion på HPLC. Ethylmalonsyre vil blive brugt som en intern standard. Influenzavaccine-specifikke antistofresponser (IgA, IgG) i plasma og colostrum/modermælk [sekretorisk IgA (s-IgA)] vil blive målt ved ELISA. PBMC vil blive stimuleret med influenzavaccine til blastogensis respons. Genomisk DNA-methylering vil blive målt ved methylacceptanceassayet baseret på isoleret DNA's evne til at "acceptere" radioaktivt mærkede methylgrupper fra S-[3H-methyl] adenosylmethionin ved hjælp af den bakterielle CpG-methyltransferase SssI. Total homocystein (tHcy) vil blive målt i urinprøver ved hjælp af HPLC med fluorimetrisk detektion, hvor thioler i søjleafløbet detekteres af en enkelt guld-kviksølv-elektrode. NaBH4 bruges som reduktionsmiddel, og der kræves ingen derivatisering af prøven. Mutationer i ALPL-, MTHFR C677T- og FUT2-generne vil blive bestemt ved PCR-RFLP-assay og DNA-sekventering. Alle disse analyser vil blive udført i Nutritional Biochemistry Lab, som har faciliteterne til at bestemme de biokemiske markører for anæmi, vaccinespecifikke antistofresponser, DNA-methylering og polymorfi-assays.

Vurdering af antropometri og morbiditet: Maternelle antropometriske målinger vil blive taget i begyndelsen af ​​tilskud og månedligt i perioden efter tilskud af uddannede FW'er. Fødselsvægt og liggende længde vil blive taget inden for 72 timer efter fødslen, og månedlige målinger vil blive taget af FW op til 3 måneders alderen. Ved hvert besøg (hver fjortende dag) vil Field Research Assistant (FRA) indsamle data fra mødre om morbiditet hos mødre og deres spædbørn (f.eks. diarré, luftvejsinfektioner, hudsygdomme, vurdering af sværhedsgraden af ​​sygdomsepisoder) de foregående 7 dage ved hjælp af strukturerede spørgeskemaer. FRA'erne vil informere kvinderne om tidspunkterne for de første og efterfølgende opfølgningsbesøg og sikre, om de har forstået klart. Derudover vil undersøgelsens deltagere blive kontaktet over mobiltelefoner, når de er tilgængelige, for at minde dem om besøgsdatoer. Når de følges op i de respektive hjem, vil de blive mindet om de næste besøgsdatoer.

Depressionsscore: Deltagerne vil blive interviewet om deres mentale status ved hjælp af Center for Epidemiologiske Studier-Depression (CES-D) spørgeskema. Spørgeskemaet indeholder 20 emner, der omfatter seks hovedaspekter af depression: deprimeret humør, håbløshed, værdiløshed, træthed, appetit og søvnforstyrrelser. Det blev oversat til bengali og testet i tidligere undersøgelser og involverer, hvordan kvinderne havde det i løbet af de foregående 7 dage. Det er tidligere blevet brugt til kvinder i landdistrikter og byer i Bangladesh (Hamadani, upublicerede data) og har fundet en fornuftig sammenhæng med børns vækst og udvikling. FRA'erne vil blive grundigt trænet til at interviewe kvinderne, og inter-observatør-pålideligheder vil blive opnået før og under undersøgelsen. Interviewet vil blive gennemført to gange hjemme hos kvinderne under FRAs besøg, først ved baseline og 3 måneder efter fødslen. Dataene vil blive analyseret og fortolket af en af ​​co-investigatorerne (JDH), som har viden og erfaring i at håndtere denne type information.

Fødevaresikkerhed og diætdiversitet: Effekten af ​​fødevareusikkerhed på fødevareindtag, sundhed og ernæringsstatus er blevet observeret i mange udviklingslande, der viser signifikant lavere samlede daglige fødevareudgifter pr. indbygger i fødevareusikre husholdninger end fødevaresikre husholdninger. Fødevareusikkerhed var forbundet med mødres angst og depression, som kan have stærk negativ indflydelse på spædbørnsplejepraksis, herunder amningsvarighed samt børns ernæringsstatus. Omkring halvdelen af ​​den bangladeshiske befolkning er fødevareusikre. Sult og underernæring i barndommen i Bangladesh er blandt de højeste i verden. Omkring 31 % af landbefolkningen i Bangladesh lider af "kronisk fattigdom", og omkring 19 % af landhusholdningerne kan ikke få "hele tre måltider" om dagen. Derfor er husholdningernes fødevareusikkerhed i forhold til dens enorme indvirkning på sundhed og ernæringsstatus på mennesker en voksende bekymring i Bangladesh. Husstandens fødevaresikkerhedsstatus og diætdiversitet for undersøgelsesdeltagerne (inklusive moderens diætenergi, protein, vitamin B-12 og folatindtag) vil blive vurderet først ved baseline, når de gravide kvinder vil blive optaget i undersøgelsen og derefter hver 14. dag gennem hele studiet. undersøgelse. USDA fødevaresammensætningsdatabase vil blive brugt til at vurdere vitamin B-12 indtag. Enhver sæsonbestemt variation i fødevaresikkerhedsstatus vil blive vurderet, som kan have væsentlig indflydelse på resultatmålene. Et struktureret spørgeskema om fødevaresikkerhedsmodul vil blive brugt til at måle husstandens fødevaresikkerhedsstatus. FRA'erne vil blive trænet i at interviewe kvinderne; de vil tage samtaler, når de aflægger besøg i svangre- og efterfødselsperioden i hjemmet. Dataene vil blive analyseret og fortolket af en af ​​medundersøgerne (KKS), som har viden og erfaring i at håndtere denne type information.