怀孕期间补充维生素 B12

研究区域：米尔普尔某月产孕妇入组人数较多（约300-400/月）的妇产科诊所，将被选为招募当地孕妇。 米尔布尔社区的外迁率很低。 将选择怀孕 11-14 周就诊并计划在诊所分娩以确保安全分娩的孕妇。 将向每位研究参与者提供诊所的结构化服务和标准产前护理，以确保安全分娩和产前护理。

研究人群：孕妇 (n=120) 将在妊娠 11-14 周期间接受筛查。 3 个月大的婴儿 (n=120)。

纳入标准：

• Hb 水平在 7.0-11 g/dL 范围内
• 年龄：22-35岁
• 处于妊娠中期（即妊娠 11-14 周）的母亲
• 愿意在怀孕期间留在达卡并愿意在诊所接受分娩
• 自我报告的末次月经 (LMP) 和尿妊娠试验将用于确定胎龄。

排除标准：

• 患有严重贫血的妇女；血红蛋白浓度 <7.0 g/dL
• 系统性疾病的病史或存在
• 既往复杂妊娠或早产、流产的 H/O
• 接收流感疫苗 定义：根据 WHO，贫血定义为成年女性的血红蛋白浓度 <12 g/dL。 贫血进一步分类为轻度（10-11.9 g/dL)、中度 (7.0-9.9 g/dL) 和重度 (<7.0 g/dL)。

研究设计：双盲对照试验；获得知情同意后，孕妇将被随机分配到每天接受 60 毫克铁和 400 微克叶酸的安慰剂组 (N=60) 或每天接受 250 微克维生素 B12 的补充剂组 (N=60)除了 60 毫克铁和 400 微克叶酸。 第三方（葛兰素史克，孟加拉国）将准备和供应瓶装维生素 B12 或安慰剂胶囊。 这两种胶囊在外观和味道上都相似。 他们会将瓶子标记为A和B。公司负责人将保密直至研究结束。 第一位参与者收到的胶囊 A 或 B 将通过抽签决定，此后每位候补参与者都将收到该胶囊。 参与者的 ID 将按顺序给出。 每天补充叶酸铁和 B12 将持续到产后 3 个月。 在妊娠 26-28 周时，所有母亲都将通过肌内注射 (IM) 接种一种灭活的三价流感病毒疫苗。 世卫组织为北半球推荐的标准灭活三价流感将从该项目的商业来源获得（葛兰素史克；德累斯顿，德国）。 现场工作人员 (FW) 将亲自为母亲提供两周剂量的安慰剂或补充剂，并通过卡片和剩余药片检查依从性。 孕妇将被明确告知后续随访的时间，并在各自家中进行随访时提醒她们日期。

常规服务：诊所提供的常规护理包括Hb测量、体格检查（体重、血压、脉搏、腹部检查、胎心率、必要时的超声检查）、饮食咨询、孕期正常程序说明，相关的潜在并发症，在此类事件期间如何以及何时去诊所等。 这项服务由门诊医生在护士的协助下提供。

标本：采集妊娠11～14周的母亲空腹外周血、分娩时的脐带血、24小时内的初乳以及产后3个月的母亲的母乳和外周血。 婴儿的外周血将在三个月大时采集。 将血液收集在抗凝剂 (EDTA) 涂层管中，并在 Ficoll-paque 上分层以进行密度梯度离心；血浆将从顶部分离并储存在 -70ºC 以供以后分析。 将分离外周血单核细胞 (PBMC) 以研究细胞免疫反应。 将在妊娠 11-14 周和三个月时从母亲那里收集尿液。 对于基于基因的研究，DNA 样本将被脱链，身份将根据标准程序匿名。

方法：使用 Drabakins 试剂（Sigma Diagnostics）通过分光光度法测量全血中的总血红蛋白 (Hb)。 标准化血涂片染色将用于评估巨幼红细胞性贫血（巨卵细胞和多叶中性粒细胞的存在）。 将通过酶免疫测定法测量血浆中的铁蛋白、血清转铁蛋白受体 (sTfR) 和 α-糖蛋白 (AGP)。 罗氏自动分析仪 Cobas e411 将检测血浆中的维生素 B12 和叶酸以及母乳中的维生素 B12。 尿甲基丙二酸 (MMA) 将通过荧光检测器辅助 HPLC 方法（Sigma Diagnostics, St. Louis, MO. 简而言之，MMA 将用乙酸乙酯从尿样中提取。 在注入 HPLC 之前，将提取物干燥并用单丹磺酰基尸胺和二环己基-碳二亚胺衍生化。 乙基丙二酸将用作内标。 将通过 ELISA 测量血浆和初乳/母乳中的流感疫苗特异性抗体反应（IgA、IgG）[分泌型 IgA (s-IgA)]。 将用流感疫苗刺激 PBMC 以产生胚细胞形成反应。 基因组 DNA 甲基化将通过甲基接受测定法测量，该测定法基于分离的 DNA 使用细菌 CpG 甲基转移酶 SssI“接受”来自 S-[3H-甲基] 腺苷甲硫氨酸的放射性标记甲基的能力。 尿样中的总同型半胱氨酸 (tHcy) 将通过使用具有荧光检测的 HPLC 进行测量，其中柱流出物中的硫醇由单个金汞电极检测。 NaBH4 用作还原剂，无需对样品进行衍生化处理。 ALPL、MTHFR C677T 和 FUT2 基因中的突变将通过 PCR-RFLP 测定和 DNA 测序来确定。 所有这些化验将在营养生物化学实验室进行，该实验室具有确定贫血生化标记、疫苗特异性抗体反应、DNA 甲基化和多态性化验的设施。

人体测量学和发病率的评估：将在补充开始时进行母体人体测量测量，并在补充后期间每月由训练有素的 FW 进行测量。 将在出生后 72 小时内测量出生体重和卧位身长，FW 将每月测量一次，直至 3 个月大。 在每次访问（每两周一次）时，现场研究助理 (FRA) 将从母亲那里收集有关母亲及其婴儿发病率的数据（例如 前 7 天的腹泻、呼吸道感染、皮肤病、疾病发作严重程度的评估），使用结构化问卷调查。 FRA 会告知女性第一次和后续随访的时间，并确保她们是否理解清楚。 此外，研究参与者将在可用时通过手机联系，以提醒他们访问日期。 当在各自的家中跟进时，他们将被提醒下一次访问日期。

抑郁评分：将使用流行病学研究中心抑郁症 (CES-D) 问卷调查参与者的精神状态。 问卷共20个项目，涵盖了抑郁症的六个主要方面：情绪低落、绝望、无价值感、疲劳、食欲和睡眠障碍。 它被翻译成孟加拉语并在早期的研究中进行了试点，涉及女性在前 7 天的感受。 它以前曾用于孟加拉国农村和城市妇女（Hamadani，未发表的数据），并发现它与儿童的生长发育密切相关。 FRA 将接受广泛的培训以采访女性，并且在研究之前和期间将获得观察者间的可靠性。 访谈将在 FRA 访问期间在妇女家中进行两次，第一次是在基线时，一次是在产后 3 个月。 数据将由一位在处理此类信息方面具有知识和经验的联合调查员 (JDH) 进行分析和解释。

粮食安全和饮食多样性：在许多发展中国家观察到粮食不安全对食物摄入、健康和营养状况的影响，表明粮食不安全家庭的每日人均食品总支出显着低于粮食安全家庭。 粮食不安全与母亲的焦虑和抑郁有关，这会对婴儿护理行为产生强烈的负面影响，包括母乳喂养时间和儿童营养状况。 大约一半的孟加拉国人口粮食不安全。 孟加拉国的饥饿和儿童营养不良率位居世界前列。 孟加拉约31%的农村人口“长期贫困”，约19%的农村家庭一日三餐吃不上“饱饭”。 因此，家庭粮食不安全及其对人类健康和营养状况的巨大影响在孟加拉国日益受到关注。 研究参与者的家庭食品安全状况和饮食多样性（包括孕产妇膳食能量、蛋白质、维生素 B-12 和叶酸摄入量）将首先在孕妇参加研究的基线时进行评估，此后在整个研究期间每两周进行一次评估学习。 美国农业部食品成分数据库将用于评估维生素 B-12 的摄入量。 将评估可能对结果措施产生重大影响的粮食安全状况的任何季节性变化。 粮食安全模块结构化问卷将用于衡量家庭粮食安全状况。 将对 FRA 进行培训以采访这些妇女；他们在产前和产后期间上门探访时会接受面谈。 数据将由一位在处理此类信息方面具有知识和经验的联合调查员 (KKS) 进行分析和解释。