Supplémentation en vitamine B12 pendant la grossesse

Zone d'étude : Une maternité à Mirpur avec un nombre important de femmes enceintes s'inscrivant chaque mois (environ 300 à 400/mois) sera sélectionnée pour le recrutement de femmes enceintes locales. La communauté de Mirpur a un faible taux d'émigration. Les femmes enceintes se présentant à la clinique à 11-14 semaines de gestation et prévoyant d'accoucher à la clinique pour assurer un accouchement sans danger seront sélectionnées. Le service structuré et les soins prénatals standard de la clinique pour un accouchement en toute sécurité et des soins prénatals seront fournis à chaque participant à l'étude.

Population de l'étude : Les femmes enceintes (n = 120) seront dépistées pendant 11 à 14 semaines de gestation. Nourrissons (n ​​= 120) à l'âge de 3 mois.

Critère d'intégration:

• Niveau d'Hb dans la plage de 7,0 à 11 g/dL
• Âge : 22-35 ans
• Mères au début du deuxième trimestre (c'est-à-dire à 11-14 semaines de gestation)
• Disposé à rester à Dhaka pendant la grossesse et disposé à être admis à la clinique pour l'accouchement
• La dernière période menstruelle (LMP) autodéclarée et le test de grossesse urinaire seront utilisés pour déterminer l'âge gestationnel.

Critère d'exclusion:

• Femmes souffrant d'anémie sévère ; concentration d'hémoglobine <7,0 g/dL
• Antécédents ou présence de maladie systémique
• H/O de grossesses compliquées antérieures ou d'accouchement prématuré, avortement
• Réception du vaccin antigrippal Définition : Selon l'OMS, l'anémie est définie comme une concentration d'hémoglobine <12 g/dL chez la femme adulte. L'anémie est en outre classée comme légère (10-11,9 g/dL), modérée (7,0-9,9 g/dL) et sévère (<7,0 g/dL).

Conception de l'étude : essai contrôlé en double aveugle ; Une fois le consentement éclairé obtenu, les femmes enceintes seront assignées au hasard soit au groupe placebo (N = 60) qui recevra 60 mg de Fe et 400 µg de folate par jour, soit au groupe de supplémentation (N = 60) qui recevra 250 µg de vitamine B12 en addition à 60 mg de Fe et 400µg de folate. Un tiers (GlaxoSmithKline, Bangladesh) préparera et fournira de la vitamine B12 ou une capsule placebo dans des bouteilles. Les deux capsules seront similaires en apparence et en goût. Ils étiquetteront les bouteilles comme A et B. Le personnel responsable de la Société en gardera la confidentialité jusqu'à la fin de l'étude. La capsule A ou B à recevoir par le 1er participant sera déterminée par une loterie, et ensuite chaque participant suppléant recevra cette capsule. Les identifiants des participants seront donnés séquentiellement. La supplémentation quotidienne en fer-folate ainsi qu'en B12 se poursuivra jusqu'à 3 mois après l'accouchement. À 26-28 semaines de gestation, toutes les mères recevront un seul vaccin antigrippal trivalent inactivé par voie intramusculaire (IM). La grippe trivalente inactivée standard recommandée par l'OMS pour l'hémisphère Nord sera obtenue auprès de sources commerciales pour ce projet (GlaxoSmithKline ; Dresde, Allemagne). Les agents de terrain (FW) fourniront une dose de deux semaines de placebo ou de suppléments aux mères en personne et vérifieront l'observance par carte et restes de pilules. Les femmes enceintes seront clairement informées des heures de leurs visites de suivi ultérieures et, lors du suivi dans leurs maisons respectives, les dates leur seront rappelées.

Service de routine : les soins de routine fournis par la clinique comprennent la mesure de l'Hb, un examen physique (poids, tension artérielle, pouls, bilan abdominal, fréquence cardiaque fœtale, examen échographique si nécessaire), des conseils sur l'alimentation, des descriptions des procédures normales pendant la grossesse , complications potentielles associées, comment et quand se rendre à la clinique lors de tels événements, etc. Ce service est assuré par le médecin de la clinique avec l'aide des infirmières.

Échantillons : Le sang périphérique à jeun sera prélevé sur les mères entre 11 et 14 semaines de gestation, le sang de cordon à l'accouchement, le colostrum dans les 24 heures et le lait maternel et le sang périphérique des mères après trois mois post-partum. Le sang périphérique des nourrissons sera prélevé à l'âge de trois mois. Le sang sera prélevé dans des tubes revêtus d'anticoagulant (EDTA) et déposé sur du Ficoll-paque pour une centrifugation en gradient de densité ; le plasma sera séparé du haut et stocké à -70°C pour une analyse ultérieure. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) seront séparées pour étudier les réponses immunitaires cellulaires. L'urine sera recueillie des mères à 11 - 14 semaines de gestation et à trois mois. Pour les études basées sur les gènes, les échantillons d'ADN seront dissociés et l'identité sera rendue anonyme conformément aux procédures standard.

Méthodes : L'hémoglobine totale (Hb) dans le sang total sera mesurée par spectrophotométrie à l'aide du réactif Drabakins (Sigma Diagnostics). Un frottis sanguin standardisé sera utilisé pour évaluer l'anémie mégaloblastique (présence de macroovalocytes et de neutrophiles hypersegmentés). La ferritine, le récepteur de la transferrine sérique (sTfR) et l'α-glycoprotéine (AGP) seront mesurés dans le plasma par des dosages immunitaires enzymatiques. La vitamine B12 et le folate dans le plasma et la vitamine B12 dans le lait maternel seront dosés dans l'autoanalyseur Roche Cobas e411. L'acide méthylmalonique urinaire (MMA) sera mesuré par la méthode HPLC assistée par détecteur de fluorescence (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO. En bref, le MMA sera extrait de l'échantillon d'urine avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait est séché et dérivatisé avec de la monodansylcadavérine et du dicyclohexyl-carbodiimide avant l'injection sur HPLC. L'acide éthylmalonique sera utilisé comme étalon interne. Les réponses en anticorps spécifiques du vaccin antigrippal (IgA, IgG) dans le plasma et le colostrum/lait maternel [IgA sécrétoires (s-IgA)] seront mesurées par ELISA. Les PBMC seront stimulés avec le vaccin contre la grippe pour une réponse à la blastogenèse. La méthylation de l'ADN génomique sera mesurée par le test d'acceptation du méthyle basé sur la capacité de l'ADN isolé à "accepter" les groupes méthyle radiomarqués de la S-[3H-méthyl] adénosylméthionine, en utilisant la CpG méthyltransférase bactérienne SssI. L'homocystéine totale (tHcy) sera mesurée dans des échantillons d'urine en utilisant la HPLC avec détection fluorimétrique dans laquelle les thiols dans l'effluent de la colonne sont détectés par une seule électrode or-mercure. NaBH4 est utilisé comme réducteur et aucune dérivation de l'échantillon n'est nécessaire. Les mutations dans les gènes ALPL, MTHFR C677T et FUT2 seront déterminées par test PCR-RFLP et séquençage de l'ADN. Tous ces tests seront effectués dans le laboratoire de biochimie nutritionnelle qui dispose des installations nécessaires pour déterminer les marqueurs biochimiques de l'anémie, les réponses d'anticorps spécifiques aux vaccins, la méthylation de l'ADN et les tests de polymorphisme.

Évaluation de l'anthropométrie et de la morbidité : Des mesures anthropométriques maternelles seront prises au début de la supplémentation et mensuellement pendant la période post-supplémentation par des FW formés. Le poids de naissance et la longueur en position couchée seront pris dans les 72 heures suivant la naissance et les mesures mensuelles seront prises par FW jusqu'à l'âge de 3 mois. À chaque visite (tous les quinze jours), l'assistant de recherche sur le terrain (FRA) recueillera des données auprès des mères sur la morbidité des mères et de leurs nourrissons (par ex. diarrhée, infections respiratoires, dermatoses, évaluation de la gravité des épisodes pathologiques) des 7 derniers jours à l'aide de questionnaires structurés. Les ARF informeront les femmes de l'heure de la première visite de suivi et des suivantes et s'assureront qu'elles ont bien compris. De plus, les participants à l'étude seront contactés par téléphone cellulaire lorsqu'ils seront disponibles pour leur rappeler les dates de visite. Lors du suivi dans les maisons respectives, les dates des prochaines visites leur seront rappelées.

Score de dépression : les participants seront interrogés sur leur état mental à l'aide du questionnaire du Centre d'études épidémiologiques sur la dépression (CES-D). Le questionnaire contient 20 items comprenant six aspects majeurs de la dépression : humeur dépressive, désespoir, inutilité, fatigue, appétit et troubles du sommeil. Il a été traduit en bengali et piloté dans des études antérieures et implique comment les femmes se sont senties au cours des 7 jours précédents. Il a déjà été utilisé chez les femmes bangladaises rurales et urbaines (Hamadani, données non publiées) et s'est avéré corrélé sensiblement à la croissance et au développement des enfants. Les FRA seront largement formés pour interroger les femmes et les fiabilités inter-observateurs seront obtenues avant et pendant l'étude. L'interview sera menée deux fois au domicile des femmes lors des visites des FRA, d'abord au départ et à 3 mois après l'accouchement. Les données seront analysées et interprétées par l'un des co-enquêteurs (JDH) qui a des connaissances et de l'expérience dans le traitement de ce type d'informations.

Sécurité alimentaire et diversité alimentaire : L'effet de l'insécurité alimentaire sur l'apport alimentaire, la santé et l'état nutritionnel a été observé dans de nombreux pays en développement, montrant des dépenses alimentaires quotidiennes totales par habitant nettement inférieures dans les ménages en situation d'insécurité alimentaire par rapport aux ménages en sécurité alimentaire. L'insécurité alimentaire était associée à l'anxiété et à la dépression maternelles, ce qui peut avoir une forte influence négative sur les pratiques de soins aux nourrissons, y compris la durée de l'allaitement ainsi que l'état nutritionnel de l'enfant. Environ la moitié de la population bangladaise est en situation d'insécurité alimentaire. La faim et la malnutrition infantile au Bangladesh sont parmi les plus élevées au monde. Environ 31% de la population rurale du Bangladesh souffre de "pauvreté chronique" et environ 19% des ménages ruraux ne peuvent pas prendre "trois repas complets" par jour. Ainsi, l'insécurité alimentaire des ménages par rapport à son énorme impact sur la santé et l'état nutritionnel de l'homme est une préoccupation croissante au Bangladesh. L'état de la sécurité alimentaire des ménages et la diversité alimentaire des participants à l'étude (y compris l'apport maternel en énergie alimentaire, en protéines, en vitamine B-12 et en folate) seront d'abord évalués, au départ lorsque les femmes enceintes seront inscrites à l'étude, puis tous les quinze jours tout au long de l'étude. étude. La base de données sur la composition des aliments de l'USDA sera utilisée pour évaluer l'apport en vitamine B-12. Toute variation saisonnière de l'état de la sécurité alimentaire sera évaluée qui pourrait avoir un impact significatif sur les mesures des résultats. Un questionnaire structuré sur le module de sécurité alimentaire sera utilisé pour mesurer l'état de la sécurité alimentaire des ménages. Les FRA seront formés pour interroger les femmes ; elles prendront des entretiens lors de leurs visites pendant les périodes prénatales et postnatales à domicile. Les données seront analysées et interprétées par l'un des co-investigateurs (KKS) qui a des connaissances et de l'expérience dans le traitement de ce type d'informations.