Vitamin B12-Ergänzung während der Schwangerschaft

Studiengebiet: Eine Entbindungsklinik in Mirpur mit einer beträchtlichen Anzahl von schwangeren Frauen, die sich jeden Monat einschreiben (etwa 300-400/Monat), wird für die Rekrutierung lokaler schwangerer Frauen ausgewählt. Die Gemeinde in Mirpur hat eine niedrige Abwanderungsrate. Schwangere Frauen, die die Klinik in der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche aufsuchen und planen, in der Klinik zu entbinden, um eine sichere Entbindung zu gewährleisten, werden ausgewählt. Der strukturierte Service und die standardmäßige Schwangerschaftsvorsorge der Klinik für eine sichere Entbindung und Schwangerschaftsvorsorge werden jedem Studienteilnehmer zur Verfügung gestellt.

Studienpopulation: Schwangere Frauen (n=120) werden während der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche untersucht. Kleinkinder (n=120) im Alter von 3 Monaten.

Einschlusskriterien:

• Hb-Wert im Bereich von 7,0-11 g/dl
• Alter: 22-35 Jahre
• Mütter zu Beginn des zweiten Trimesters (d. h. in der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche)
• Bereit, während der Schwangerschaft in Dhaka zu bleiben und bereit, zur Entbindung in die Klinik aufgenommen zu werden
• Zur Bestimmung des Gestationsalters werden die selbstberichtete letzte Menstruationsperiode (LMP) und der Urin-Schwangerschaftstest verwendet.

Ausschlusskriterien:

• Frauen mit schwerer Anämie; Hämoglobinkonzentration <7,0 g/dl
• Vorgeschichte oder Vorhandensein einer systemischen Erkrankung
• H/O früherer komplizierter Schwangerschaften oder Frühgeburten, Abtreibungen
• Erhalt einer Influenza-Impfung Definition: Laut WHO ist eine Anämie definiert als eine Hämoglobinkonzentration < 12 g/dL bei erwachsenen Frauen. Anämie wird weiter als leicht eingestuft (10.-11.9 g/dl), moderat (7,0-9,9 g/dl) und schwer (<7,0 g/dl).

Studiendesign: Eine doppelblinde, kontrollierte Studie; Nach Einholung der Einverständniserklärung werden schwangere Frauen nach dem Zufallsprinzip entweder der Placebo-Gruppe (N = 60), die täglich 60 mg Fe und 400 µg Folsäure erhält, oder der Supplementierungsgruppe (N = 60), die 250 µg Vitamin B12 erhält, zugeteilt zusätzlich zu 60 mg Fe und 400 µg Folat. Ein Drittanbieter (GlaxoSmithKline, Bangladesch) wird Vitamin B12 oder Placebo-Kapseln in Flaschen herstellen und liefern. Die beiden Kapseln werden in Aussehen und Geschmack ähnlich sein. Sie werden die Flaschen mit A und B kennzeichnen. Das verantwortliche Personal des Unternehmens wird es bis zum Ende der Studie vertraulich behandeln. Welche Kapsel A oder B der 1. Teilnehmer erhält, wird ausgelost, danach erhält jeder zweite Teilnehmer diese Kapsel. Die IDs der Teilnehmer werden fortlaufend vergeben. Die tägliche Supplementierung von Eisen-Folat sowie von B12 wird bis zu 3 Monate nach der Geburt fortgesetzt. In der 26. bis 28. Schwangerschaftswoche erhalten alle Mütter einen einzigen inaktivierten, trivalenten Influenzavirus-Impfstoff intramuskulär (IM). Standard inaktivierte trivalente Influenza, wie von der WHO für die nördliche Hemisphäre empfohlen, wird für dieses Projekt aus kommerziellen Quellen bezogen (GlaxoSmithKline; Dresden, Deutschland). Außendienstmitarbeiter (FW) liefern den Müttern persönlich eine zweiwöchige Dosis von Placebo oder Nahrungsergänzungsmitteln und überprüfen die Einhaltung per Karte und übrig gebliebener Pillen. Die Schwangeren werden klar über die Termine der weiteren Nachsorge informiert und bei der Nachsorge in den jeweiligen Heimen an die Termine erinnert.

Regelversorgung: Die Regelversorgung der Klinik umfasst Hb-Messung, körperliche Untersuchung (Gewicht, Blutdruck, Puls, Bauchkontrolle, fetale Herzfrequenz, ggf. Ultraschalluntersuchung), Ernährungsberatung, Beschreibungen des normalen Ablaufs während der Schwangerschaft , damit verbundene mögliche Komplikationen, wie und wann man während solcher Ereignisse in die Klinik gehen sollte usw. Diese Leistung wird vom Klinikarzt mit Unterstützung des Pflegepersonals erbracht.

Proben: Nüchternes peripheres Blut wird von Müttern in der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche, Nabelschnurblut bei der Entbindung, Kolostrum innerhalb von 24 Stunden und Muttermilch und peripheres Blut von Müttern nach drei Monaten nach der Geburt entnommen. Peripheres Blut von Säuglingen wird im Alter von drei Monaten entnommen. Das Blut wird in mit Antikoagulans (EDTA) beschichteten Röhrchen gesammelt und für die Dichtegradientenzentrifugation auf Ficoll-paque geschichtet; Das Plasma wird von oben abgetrennt und zur späteren Analyse bei -70 °C gelagert. Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden zur Untersuchung der zellulären Immunantworten abgetrennt. Der Urin wird von Müttern in der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche und nach drei Monaten gesammelt. Bei genbasierten Studien werden die DNA-Proben entkoppelt und die Identität gemäß den Standardverfahren anonymisiert.

Methoden: Gesamthämoglobin (Hb) im Vollblut wird spektrophotometrisch unter Verwendung von Drabakins Reagenz (Sigma Diagnostics) gemessen. Zur Beurteilung einer megaloblastischen Anämie (Vorhandensein von Makroovalozyten und hypersegmentierten Neutrophilen) wird eine standardisierte Blutausstrichfärbung verwendet. Ferritin, Serumtransferrinrezeptor (sTfR) und α-Glykoprotein (AGP) werden im Plasma durch Enzym-Immunassays gemessen. Vitamin B12 und Folsäure im Plasma und Vitamin B12 in der Muttermilch werden im Roche Autoanalyzer Cobas e411 bestimmt. Methylmalonsäure (MMA) im Urin wird durch ein fluoreszenzdetektorgestütztes HPLC-Verfahren (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO) gemessen. Kurz gesagt wird MMA mit Ethylacetat aus der Urinprobe extrahiert. Der Extrakt wird getrocknet und mit Monodansylcadaverin und Dicyclohexylcarbodiimid derivatisiert, bevor er in die HPLC injiziert wird. Als interner Standard wird Ethylmalonsäure verwendet. Influenza-Impfstoff-spezifische Antikörperreaktionen (IgA, IgG) in Plasma und Kolostrum/Muttermilch [sekretorisches IgA (s-IgA)] werden durch ELISA gemessen. PBMC werden mit Grippeimpfstoff für eine Blastogenese-Reaktion stimuliert. Genomische DNA-Methylierung wird mit dem Methyl-Akzeptanz-Assay gemessen, basierend auf der Fähigkeit isolierter DNA, radioaktiv markierte Methylgruppen von S-[3H-Methyl]adenosylmethionin zu „akzeptieren“, unter Verwendung der bakteriellen CpG-Methyltransferase SssI. Gesamthomocystein (tHcy) wird in Urinproben mittels HPLC mit fluorimetrischer Detektion gemessen, bei der Thiole im Säulenausfluss durch eine einzelne Gold-Quecksilber-Elektrode nachgewiesen werden. NaBH4 wird als Reduktionsmittel verwendet und es ist keine Derivatisierung der Probe erforderlich. Mutationen in den Genen ALPL, MTHFR C677T und FUT2 werden durch PCR-RFLP-Assay und DNA-Sequenzierung bestimmt. Alle diese Assays werden im Nutritional Biochemistry Lab durchgeführt, das über die Einrichtungen zur Bestimmung der biochemischen Marker von Anämie, impfstoffspezifischen Antikörperreaktionen, DNA-Methylierungs- und Polymorphismus-Assays verfügt.

Bewertung der Anthropometrie und Morbidität: Anthropometrische Messungen der Mutter werden zu Beginn der Supplementierung und monatlich während der Zeit nach der Supplementierung von geschulten FWs durchgeführt. Das Geburtsgewicht und die Liegelänge werden innerhalb von 72 Stunden nach der Geburt gemessen und monatliche Messungen werden von FW bis zum Alter von 3 Monaten durchgeführt. Bei jedem Besuch (vierzehntägig) sammelt der Field Research Assistant (FRA) Daten von Müttern zur Morbidität von Müttern und ihren Säuglingen (z. Durchfall, Infektionen der Atemwege, Hauterkrankungen, Beurteilung der Schwere von Krankheitsschüben) der letzten 7 Tage mittels strukturierter Fragebögen. Die FRA informieren die Frauen über die Zeiten der ersten und der nachfolgenden Kontrollbesuche und vergewissern sich, dass sie alles klar verstanden haben. Darüber hinaus werden die Studienteilnehmer bei Verfügbarkeit über Mobiltelefone kontaktiert, um sie an die Besuchstermine zu erinnern. Bei der Nachverfolgung in den jeweiligen Heimen werden sie an die nächsten Besuchstermine erinnert.

Depressions-Score: Die Teilnehmer werden anhand des Fragebogens des Center for Epidemiological Studies-Depression (CES-D) zu ihrem psychischen Zustand befragt. Der Fragebogen enthält 20 Items, die sechs Hauptaspekte von Depressionen umfassen: depressive Stimmung, Hoffnungslosigkeit, Wertlosigkeit, Müdigkeit, Appetit und Schlafstörungen. Es wurde ins Bengali übersetzt und in früheren Studien erprobt und beinhaltet, wie sich die Frauen in den vorangegangenen 7 Tagen gefühlt haben. Es wurde zuvor bei ländlichen und städtischen Frauen in Bangladesch eingesetzt (Hamadani, unveröffentlichte Daten) und es wurde festgestellt, dass es in sinnvoller Weise mit dem Wachstum und der Entwicklung von Kindern korreliert. Die FRAs werden umfassend geschult, um die Frauen zu befragen, und vor und während der Studie werden Reliabilitäten zwischen den Beobachtern eingeholt. Das Interview wird zweimal bei den Frauen zu Hause während der Besuche der FRA durchgeführt, zuerst zu Studienbeginn und 3 Monate nach der Geburt. Die Daten werden von einem der Co-Ermittler (JDH) analysiert und interpretiert, der über Kenntnisse und Erfahrung im Umgang mit dieser Art von Informationen verfügt.

Ernährungssicherheit und Ernährungsvielfalt: Die Auswirkungen der Ernährungsunsicherheit auf die Nahrungsaufnahme, die Gesundheit und den Ernährungszustand wurden in vielen Entwicklungsländern beobachtet, die deutlich niedrigere tägliche Pro-Kopf-Gesamtausgaben für Lebensmittel in ernährungsunsicheren Haushalten zeigen als in ernährungssicheren Haushalten. Ernährungsunsicherheit wurde mit mütterlicher Angst und Depression in Verbindung gebracht, was einen starken negativen Einfluss auf die Säuglingspflegepraktiken haben kann, einschließlich der Stilldauer sowie des Ernährungszustands des Kindes. Etwa die Hälfte der Bevölkerung Bangladeschs ist von Ernährungsunsicherheit betroffen. Hunger und Mangelernährung bei Kindern gehören in Bangladesch zu den höchsten der Welt. Etwa 31 % der ländlichen Bevölkerung in Bangladesch leiden unter „chronischer Armut“ und etwa 19 % der ländlichen Haushalte können nicht „drei volle Mahlzeiten“ am Tag zu sich nehmen. Daher ist die Ernährungsunsicherheit der Haushalte in Bezug auf ihre enormen Auswirkungen auf die Gesundheit und den Ernährungszustand des Menschen in Bangladesch ein wachsendes Problem. Der Ernährungssicherheitsstatus des Haushalts und die Ernährungsvielfalt der Studienteilnehmer (einschließlich mütterlicher Nahrungsenergie, Protein, Vitamin B-12 und Folataufnahme) werden zuerst bewertet, zu Studienbeginn, wenn die schwangeren Frauen in die Studie aufgenommen werden, und danach alle zwei Wochen während der gesamten Studie lernen. Die USDA-Datenbank zur Lebensmittelzusammensetzung wird zur Bewertung der Vitamin-B-12-Aufnahme verwendet. Alle saisonalen Schwankungen des Ernährungssicherheitsstatus werden bewertet, die erhebliche Auswirkungen auf die Ergebnismessungen haben könnten. Der strukturierte Fragebogen zum Ernährungssicherheitsmodul wird verwendet, um den Ernährungssicherheitsstatus der Haushalte zu messen. Die FRAs werden darin geschult, die Frauen zu befragen; Sie führen Interviews, wenn sie während der vorgeburtlichen und nachgeburtlichen Zeit im Heim Besuche machen. Die Daten werden von einem der Co-Ermittler (KKS) analysiert und interpretiert, der über Kenntnisse und Erfahrung im Umgang mit dieser Art von Informationen verfügt.