インフルエンザワクチンに対する細胞免疫応答に対するトシリズマブの効果

包含基準:

• 関節リウマチ患者
• 18歳以上
• トシリズマブによる少なくとも3か月の治療を受けている

除外基準:

・卵アレルギー

研究のデザイン:

- 患者と対照者は季節性インフルエンザのワクチン接種を受けます。 ワクチン接種当日と4週間後に採血します。

ＰＢＭＣの単離 ＰＢＭＣは、採血直後に、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ、ノルウェー、オスロ）での密度勾配遠心分離によって、ヘパリン添加静脈血から単離される。 細胞を計数し、熱不活化１０％ウシ胎児血清、ペニシリン１００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン０．１ｍｇ／ｍｌ、および２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、イスラエル）を添加したＲＰＭＩ １６４０に懸濁する。

PBMC からの IFN-ガンマ分泌 IFN-ガンマ分泌レベルは、インフルエンザ抗原混合物または SEB で刺激されるか、または未処理のまま放置される PBMC の上清における ELISA によって測定されます。

グランザイムB活性アッセイ PBMCを48ウェルプレート(1.8×106細胞/ウェル)で0.5ml/ウェルで培養し、上記のようにインフルエンザ抗原混合物およびSEBで刺激する。 細胞は溶解バッファー (150mM NaCl、15mM Tris、1% Triton x100) で溶解され、次の温度で保存されます。

-760℃。 グランザイム B 活性は、Gijzen et al. によって記載されたプロトコールに従って測定されます。 [13]。 簡単に説明すると、グランザイム B の放出を可能にするために、凍結した細胞ライセートを 3 回の凍結/解凍サイクルにさらします。組換えグランザイム B 標準 (Enzo Life Sciences International, Inc.、PA) と細胞ライセートを 96 ウェルに 2 つずつ追加します。プレート (20 μl/ウェル)。 反応は、アッセイ緩​​衝液（100mM HEPES pH 7.5、10％（w/v）、スクロース、0.1 % (w/v) CHAPS、および 10 mM DTT (Sigma Aldrich、レホヴォト、イスラエル)。 プレートを密封し、覆い、暗い加湿チャンバー内で３７℃で２０時間インキュベートする。 インキュベーション後、プレートを 405 nm で読み取ります。 グランザイム B ユニットは、log (濃度)-log (吸光度) プロットの 4 次多項式曲線を使用して計算され、BCA タンパク質アッセイ (Thermo Scientific、イリノイ州) によってタンパク質濃度について補正されます。

体液性反応 抗体反応は、以前に記載された標準的な WHO 手順に従って HI 検査によって測定されます [14]。 阻害を示さない抗血清の力価は 1/10 として記録されます。 体液性反応は、HI 抗体の力価の 4 倍以上の上昇、または非防御ベースライン レベル (<1/40) から 1/40 への上昇として定義されます。 抗体の幾何平均力価を計算して、グループ全体の免疫力を評価します。