抗肺炎球菌反応を担うB細胞サブセットの特定 (PNEUMOVACB)

この研究の目的は、どの特定の B 細胞サブセットが、ニューモバックスによる健康な人の予防接種に応答して防御的な IgM、IgG2、および IgA 抗肺炎球菌莢膜多糖類 (capPS) の産生に関与しているかを特定することです。典型的な T 非依存性 2 型ワクチン。 言い換えれば、IgM、G2、および A 分泌形質細胞はどの B 細胞に由来するのでしょうか? この問題に対処するために、各 B 細胞クローンによって発現される固有の Ig 重鎖 VDJ シグネチャを利用し、その戦略は形質芽細胞 (PB)/形質細胞 (PC) と異なる B 細胞間のクローン分離の検索に依存します。部分集団。 したがって、健康な人はニューモバックスワクチンを接種し、0、7、14、28、56日目に血液サンプルを収集します。 これらの血液サンプルから出発して、異なる B 細胞サブセット (特に IgM+IgD+CD27+ およびスイッチドメモリー IgM-IgD-CD27+ B 細胞) およびワクチン接種後 7 日目にピークに達する PB/PC がセルソーティングによって分離されます。 CapPS 分泌 PB を特異的に単離することはできませんが、研究者らは、それらが応答のピーク時に単離された PB/PC の大部分を占めると想定しています。 したがって、7 日目の PB/PC は、96 ウェル PCR プレートでバルクまたは単一細胞の両方で選別されます。 バルク選別された PB/PC から RNA が抽出され、VDJ-μ、-α、および -γ Ig 転写物が RT-PCR によって増幅され、H-CDR スペクトラタイピング法によって分析され、主要な VDJ シグネチャーの配列が特定されます。おそらく抗capPS分泌細胞に相当します。 並行して、各 PB/PC 単一細胞について、Ig 重鎖および対応する Ig 軽鎖遺伝子転写物がネステッド RT-PCR によって増幅され、配列決定され、重鎖に優勢な VDJ シグネチャが含まれている場合、それらは真核生物の発現にクローン化されます。モノクローナルヒト Abs を生成するベクター。 次に、組換え抗体はワクチン由来の capPS に対する反応性について ELISA によってテストされます。 この強力な分子ツールを使用して capPS の VDJ サインが検証される場合、研究者は、さまざまな B 細胞サブセットから調製された cDNA に対する VDJ 特異的 PCR を通じてこれらのサインの存在を探します。