鉴定负责抗肺炎球菌反应的 B 细胞亚群 (PNEUMOVACB)

本研究的目的是确定哪些特定 B 细胞亚群负责产生保护性 IgM、IgG2 和 IgA 抗肺炎球菌荚膜多糖 (capPS)，以响应健康个体对 Pneumovax 的免疫接种，这是一种原型 T 非依赖性 2 型疫苗。 换言之，IgM、G2 和 A 分泌型浆细胞来源于哪些 B 细胞？ 为了解决这个问题，将利用每个 B 细胞克隆表达的独特 Ig 重链 VDJ 标记，该策略将依赖于寻找浆母细胞 (PB)/浆细胞 (PC) 和不同 B 细胞之间的克隆父系亚群。 因此，健康个体将接种 Pneumovax 疫苗，并在第 0、7、14、28 和 56 天采集血样。 从这些血液样本开始，不同的 B 细胞亚群（特别是 IgM+IgD+CD27+ 和转换记忆 IgM-IgD-CD27+ B 细胞）和在接种疫苗后第 7 天达到峰值的 PB/PC 将通过细胞分选分离。 分泌 CapPS 的 PB 不能具体分离，但研究人员假设它们将代表响应高峰期分离的 PB/PC 的大部分。 因此，第 7 天 PB/PC 将在 96 孔 PCR 板中以散装或单个细胞的形式进行分类。 RNA 将从大量分选的 PB/PC 中提取，VDJ-µ、-alpha 和 -gamma Ig 转录物将通过 RT-PCR 扩增并通过 H-CDR 光谱分析方法进行分析，以确定显性 VDJ 特征序列最有可能对应于抗 capPS 分泌细胞。 同时，对于每个 PB/PC 单细胞，Ig 重链和相应的 Ig 轻链基因转录物将通过嵌套式 RT-PCR 扩增、测序，如果重链包含显性 VDJ 特征，它们将被克隆到真核表达中产生单克隆人抗体的载体。 然后将通过 ELISA 测试重组抗体对来自疫苗的 capPS 的反应性。 当 capPS 的 VDJ 特征得到验证时，研究人员将使用这种强大的分子工具，通过对从不同 B 细胞亚群制备的 cDNA 进行 VDJ 特异性 PCR 来寻找这些特征的存在。