ヒト B 細胞に対するサイモグロブリンの影響
ヒト B 細胞の増殖、活性化、分化に対するチモグロブリンの影響
この研究は、免疫抑制剤（食品医薬品局（FDA）によって承認されるかどうかの抗拒絶反応薬）が同種免疫反応（人の免疫系が他の人の免疫系に対してどのように反応するか）にどのように影響するかをより深く理解するために行われています。 。 これは、患者から提供された血球に対して実行される血液検査によって決定されます。
具体的には、研究者は、インビトロアッセイ（研究室、試験管）を単独および/または組み合わせて使用して、さまざまな免疫抑制薬をテストし、それらがB細胞の増殖と分化にどのような影響を与えるかをテストし、定義されたB細胞間の分布の変化につながります。 -細胞サブセットを調べ、B細胞のサイモグロブリンへの曝露がその後のインビトロでのB細胞とT細胞間の相互作用に影響を与えるかどうかを研究する。
研究者が免疫抑制剤が移植患者の免疫系にどのような影響を与えるかを理解できるようにするには、免疫抑制剤が健康な人の免疫系にどのような影響を与えるかを理解する必要があります。 これを行うには、研究者は健康なボランティアから採取した血液を研究する必要がある。
調査の概要
詳細な説明
これは、1 年間にわたってさまざまな分析のために血液サンプルを提供する健康な被験者を対象とした調査研究です。
末梢血単核細胞 (PBMC) は健康なボランティアから分離され、CD19 磁気マイクロビーズを使用して CD19+ B 細胞が選択されます。
B 細胞培養は、10% ヒト血清 (HNS-GemCell)、0.5 ml ヒトインスリン (Sigma)、200 mM L-グルタミン ( Sigma) および 0.5% ゲンタマイシン (Gibco)。
全 CD19+B 細胞は、抗 IgM (3μg/ml)、抗 CD40 (100ng/ml)、IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40 刺激) の存在下で 6 日間培養されます。プレート 96 ウェル丸底 (1.0x105 細胞/ウェル)、カルシニューリン阻害剤 (タクロリムス、TAC) および mTOR 阻害剤 (シロリムス、SRL) の有無にかかわらず、さまざまな濃度 (10 ～ 100 μg/ml) のチモグロブリンを 0 日目に添加します。 。
増殖、活性化、分化、サイトカイン産生などの B 細胞活性のさまざまなパラメーターがフローサイトメトリーによってモニターされます。これらの実験については、以下の結果測定セクションでさらに説明します。
研究者は、すべての変数について一変量分析と二変量分析を実行します。 研究者は、t 検定または F 検定を使用して連続変数を評価し、カイ二乗検定またはフィッシャー正確確率検定を使用してカテゴリ変数を評価します。 研究者はデータの分布を調べ、すべての変数の線形関係または非線形関係をテストします。 データを評価するために、変数間の記述統計 (平均、標準偏差、頻度) および相関関係 (ピアソンとスピアマンの両方) が実行されます。 生データの分布に基づいて、必要な変換と代入が行われます。 すべてのデータ分析は、SAS 9.3 統計ソフトウェア (SAS Inc.、ノースカロライナ州ケアリー) を使用して実行されます。 すべての検定は両側で行われ、α <0.05 の誤差率は統計的に有意であるとみなされます。
研究の種類
連絡先と場所
研究場所
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Illinois
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Chicago、Illinois、アメリカ、60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
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参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
その患者：
- 18歳以上である必要があります、
- 体重は110ポンド以上である必要があり、
- 献血時に妊娠していてはなりません。
除外基準:
(1) 包含基準に適合しない
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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CD19+B細胞分裂
時間枠：12日間
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3 ～ 6x106 個の目的の細胞は、刺激前に 1.5μM CFSE で標識されます。
6 日後、B 細胞が回収、洗浄、計数され、マーカー設定の定義に使用されます。
細胞表現型は、5 色フローサイトメトリー (FC500、Beckman-Coulter) および 13 色フローサイトメトリー (Fortessa) によって分析され、データは CXP ソフトウェアを使用して分析されます。
これらの B 細胞培養の上清は、サイトカインの検出と、Luminex による IgM および IgG 産生細胞の数の測定に使用されます。6 日目に、細胞はホルボール 12-ミリステート 13-アセテート (PMA) で再刺激されます。 ）およびイオノマイシンを使用し、細胞内サイトカイン染色によって分析しました。
総 CD19+ B 細胞は、CD27- (ナイーブ) および CD27+ (メモリー) B 細胞画分に分類され、これらの細胞の表現型の特徴付け (フローサイトメトリーによる評価) が、抗 IgM (5 μg) での 6 日間の培養後に示されます。 /ml)、抗CD40 (100ng/ml)、およびIL-21 (100ng/ml)を薬物の存在下または非存在下で測定した。
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12日間
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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増殖したT細胞
時間枠：6日間
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研究者らは、B 細胞 (チモグロブリンの存在下および非存在下で、α-IgM および α-CD40 mAb と IL-21 で 6 日間事前刺激) をアロ CD4+CD25- T 細胞 (比率 2:1) と共培養します。 ）。
6日後、研究者は増殖したT細胞の割合とサイトカイン産生を分析します。
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6日間
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協力者と研究者
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協力者
研究記録日
主要日程の研究
研究開始 (実際)
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (見積もり)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (実際)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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