Effekter av tymoglobulin på mänskliga B-celler
Effekter av tymoglobulin på proliferation, aktivering och differentiering av mänskliga B-celler
Denna studie görs för att bättre förstå hur immunsuppressiva mediciner (anti-avstötningsmediciner som kan eller inte kan godkännas av Food and Drug Administration (FDA)) påverkar det alloimmuna svaret (hur en persons immunsystem reagerar mot en annan persons immunsystem) . Detta kommer att avgöras av de blodprover som körs på de donerade blodkropparna från patienterna.
Specifikt kommer utredarna att testa olika immunsuppressionsmediciner med hjälp av in vitro-analyser (i laboratoriet, i provrör) ensamma och/eller i kombination för att testa hur de kan påverka B-cellsproliferation och differentiering, vilket leder till en förändrad fördelning bland definierade B. -cellundergrupper och att studera om exponering av B-celler för tymoglobulin kan ha effekter på efterföljande interaktion mellan B- och T-celler in vitro.
För att göra det möjligt för utredarna att förstå hur immunsuppressiva läkemedel påverkar immunförsvaret hos transplanterade patienter, måste utredarna förstå hur de påverkar immunförsvaret hos friska människor. För att göra detta måste utredarna studera blod som samlats in från friska frivilliga.
Studieöversikt
Status
Intervention / Behandling
Detaljerad beskrivning
Detta är en forskningsstudie av friska försökspersoner som kommer att lämna blodprover för olika analyser under en period av ett år.
Perifera mononukleära blodceller (PBMC) kommer att isoleras från friska frivilliga och CD19+ B-celler kommer att väljas ut med CD19 magnetiska mikropärlor.
B-cellsodlingar kommer att utföras i odlingsmedium bestående av Iscoves MDM (IMDM) medium (Gibco, Paisley, Storbritannien) kompletterat med 10 % humant serum (HNS- GemCell), 0,5 ml humant insulin (Sigma), 200 mM L-glutamin ( Sigma) och 0,5 % Gentamycin (Gibco).
Totalt antal CD19+B-celler kommer att odlas i närvaro av anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40-stimulering) under 6 dagar i kultur plattor 96 brunnar rundbottnad (1,0x105 celler/brunn), och tymoglobulin i olika koncentrationer (10 till 100 μg/ml) med eller utan kalcineurinhämmare (Tacrolimus, TAC) och mTOR-hämmare (Sirolimus, SRL) kommer att tillsättas dag 0 .
En mängd parametrar för B-cellsaktivitet inklusive proliferation, aktivering, differentiering och cytokinproduktion kommer att övervakas med flödescytometri. Dessa experiment förklaras ytterligare i avsnittet om resultatmått nedan.
Utredarna kommer att genomföra univariata och bivariata analyser för alla variabler. Utredarna kommer att utvärdera kontinuerliga variabler med hjälp av t-tester eller F-tester och kategoriska variabler med Chi-square eller Fisher Exact-test. Utredarna kommer att undersöka datafördelningar och testa alla variabler för linjära samband eller icke-linjära samband. Beskrivande statistik (medelvärden, standardavvikelse, frekvens) och korrelationer (både Pearson och Spearman) mellan variabler kommer att utföras för att bedöma data. Nödvändig omvandling och imputering kommer att utföras baserat på distributionen av rådata. Alla dataanalyser kommer att utföras med hjälp av SAS 9.3 statistisk programvara (SAS Inc., Cary, NC). Alla tester kommer att vara tvåsidiga och en felfrekvens på α <0,05 kommer att anses vara statistiskt signifikant.
Studietyp
Kontakter och platser
Studieorter
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Förenta staterna, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Deltagandekriterier
Urvalskriterier
Åldrar som är berättigade till studier
Tar emot friska volontärer
Kön som är behöriga för studier
Testmetod
Studera befolkning
Beskrivning
Inklusionskriterier:
Patienten:
- bör vara äldre än 18 år,
- bör väga mer än 110 lbs och
- bör inte vara gravid vid tidpunkten för blodgivningen.
Exklusions kriterier:
(1) Passar inte in i inklusionskriterierna
Studieplan
Hur är studien utformad?
Designdetaljer
Vad mäter studien?
Primära resultatmått
Resultatmått |
Åtgärdsbeskrivning |
Tidsram |
|---|---|---|
|
CD19+B celldelning
Tidsram: 12 dagar
|
3-6x106 celler av intresse kommer att märkas med 1,5 μM CFSE före stimulering.
Efter 6 dagar kommer B-celler att återvinnas, tvättas, räknas och användas för att definiera markörinställningar.
Cellfenotypen kommer att analyseras med femfärgsflödescytometri (FC500, Beckman-Coulter) och med 13-färgsflödescytometri (Fortessa) och data kommer att analyseras med CXP-mjukvara.
Supernatanten av dessa B-cellskulturer kommer att användas för cytokindetektion och för att bestämma antalet IgM- och IgG-producerande celler av Luminex. På dag 6 kommer cellerna att återstimuleras med forbol 12-myristat 13-acetat (PMA) ) och jonomycin, och analyserades genom intracellulär cytokinfärgning.
Totalt antal CD19+ B-celler kommer att sorteras i en CD27- (naiv) och CD27+ (minne) B-cellsfraktion och den fenotypiska karaktäriseringen (bedömd med flödescytometri) av dessa celler kommer att visas efter 6 dagars odling med anti-IgM (5μg) /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) och IL-21 (100 ng/ml) i närvaro eller frånvaro av läkemedlen.
|
12 dagar
|
Sekundära resultatmått
Resultatmått |
Åtgärdsbeskrivning |
Tidsram |
|---|---|---|
|
prolifererade T-celler
Tidsram: 6 dagar
|
Utredarna kommer att samodla B-celler (förstimulerade med α-IgM och α-CD40 mAb plus IL-21 i 6 dagar i närvaro och frånvaro av tymoglobulin) med allo-CD4+CD25-T-celler (förhållande 2:1) ).
Efter 6 dagar kommer utredarna att analysera % av prolifererade T-celler och cytokinproduktionen.
|
6 dagar
|
Samarbetspartners och utredare
Sponsor
Samarbetspartners
Studieavstämningsdatum
Studera stora datum
Studiestart (Faktisk)
Primärt slutförande (Faktisk)
Avslutad studie (Faktisk)
Studieregistreringsdatum
Först inskickad
Först inskickad som uppfyllde QC-kriterierna
Första postat (Uppskatta)
Uppdateringar av studier
Senaste uppdatering publicerad (Faktisk)
Senaste inskickade uppdateringen som uppfyllde QC-kriterierna
Senast verifierad
Mer information
Termer relaterade till denna studie
Andra studie-ID-nummer
- STU00092183
Denna information hämtades direkt från webbplatsen clinicaltrials.gov utan några ändringar. Om du har några önskemål om att ändra, ta bort eller uppdatera dina studieuppgifter, vänligen kontakta register@clinicaltrials.gov. Så snart en ändring har implementerats på clinicaltrials.gov, kommer denna att uppdateras automatiskt även på vår webbplats .