Влияние тимоглобулина на В-клетки человека
Влияние тимоглобулина на пролиферацию, активацию и дифференцировку В-клеток человека
Это исследование проводится, чтобы лучше понять, как иммунодепрессанты (лекарства против отторжения, которые могут быть одобрены или не одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA)) влияют на аллоиммунный ответ (как иммунная система человека реагирует на иммунную систему другого человека) . Это будет определено анализами крови, проведенными на клетках крови, пожертвованных пациентами.
В частности, исследователи будут тестировать различные иммуносупрессивные препараты, используя анализы in vitro (в лаборатории, в пробирках) по отдельности и/или в комбинации, чтобы проверить, как они могут влиять на пролиферацию и дифференцировку В-клеток, приводя к изменению распределения среди определенных B-клеток. -клеток и изучить, может ли воздействие тимоглобулина на В-клетки повлиять на последующее взаимодействие между В- и Т-клетками in vitro.
Чтобы исследователи могли понять, как иммунодепрессанты влияют на иммунную систему пациентов после трансплантации, исследователи должны понять, как они влияют на иммунную систему здоровых людей. Для этого следователям потребуется изучить кровь, взятую у здоровых добровольцев.
Обзор исследования
Статус
Вмешательство/лечение
Подробное описание
Это исследование здоровых людей, которые будут предоставлять образцы крови для различных анализов в течение одного года.
Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) будут выделены у здоровых добровольцев, а CD19+ В-клетки будут отобраны с использованием магнитных микрогранул CD19.
Культуры В-клеток будут выращивать в культуральной среде, состоящей из среды Iscove MDM (IMDM) (Gibco, Пейсли, Великобритания) с добавлением 10% человеческой сыворотки (HNS-GemCell), 0,5 мл человеческого инсулина (Sigma), 200 мМ L-глютамина ( Sigma) и 0,5% гентамицина (Gibco).
Всего клеток CD19+B будут культивировать в присутствии анти-IgM (3 мкг/мл), анти-CD40 (100 нг/мл), IL-21 (100 нг/мл) (стимуляция BCR/CD40) в течение 6 дней в культуре. планшеты 96 лунок с круглым дном (1,0x105 клеток/лунку) и тимоглобулин в различных концентрациях (от 10 до 100 мкг/мл) с ингибитором кальциневрина (такролимус, TAC) и ингибитором mTOR (сиролимус, SRL) или без них будут добавлены в день 0 .
Различные параметры активности В-клеток, включая пролиферацию, активацию, дифференцировку и продукцию цитокинов, будут контролироваться с помощью проточной цитометрии. Эти эксперименты более подробно объясняются в разделе, посвященном результатам, ниже.
Исследователи проведут однофакторный и двумерный анализ для всех переменных. Исследователи будут оценивать непрерывные переменные, используя t-тесты или F-тесты, и категориальные переменные, используя критерий хи-квадрат или точный критерий Фишера. Исследователи изучат распределения данных и проверят все переменные на линейные или нелинейные отношения. Для оценки данных будут проводиться описательная статистика (среднее значение, стандартное отклонение, частота) и корреляции (как Пирсона, так и Спирмена) между переменными. Необходимое преобразование и вменение будут проводиться на основе распределения необработанных данных. Все анализы данных будут выполняться с использованием статистического программного обеспечения SAS 9.3 (SAS Inc., Кэри, Северная Каролина). Все тесты будут двусторонними, и частота ошибок α <0,05 будет считаться статистически значимой.
Тип исследования
Контакты и местонахождение
Места учебы
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Соединенные Штаты, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Критерии участия
Критерии приемлемости
Возраст, подходящий для обучения
Принимает здоровых добровольцев
Полы, имеющие право на обучение
Метод выборки
Исследуемая популяция
Описание
Критерии включения:
Пациент:
- должен быть старше 18 лет,
- должен весить более 110 фунтов и
- не должна быть беременной на момент сдачи крови.
Критерий исключения:
(1) Не соответствует критериям включения
Учебный план
Как устроено исследование?
Детали дизайна
Что измеряет исследование?
Первичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
Деление клеток CD19+B
Временное ограничение: 12 дней
|
3-6x106 представляющих интерес клеток будут помечены 1,5 мкМ CFSE перед стимуляцией.
Через 6 дней В-клетки будут извлечены, промыты, подсчитаны и использованы для определения настроек маркера.
Клеточный фенотип будет проанализирован с помощью пятицветной проточной цитометрии (FC500, Beckman-Coulter) и 13-цветной проточной цитометрии (Fortessa), а данные будут проанализированы с использованием программного обеспечения CXP.
Супернатант этих культур В-клеток будет использоваться для обнаружения цитокинов и для определения количества клеток, продуцирующих IgM и IgG, с помощью Luminex. ) и иономицин, и анализировали путем окрашивания внутриклеточных цитокинов.
Общее количество В-клеток CD19+ будет отсортировано на фракцию В-клеток CD27- (наивные) и CD27+ (память), а фенотипическая характеристика (оцененная с помощью проточной цитометрии) этих клеток будет показана через 6 дней культивирования с анти-IgM (5 мкг /мл), анти-CD40 (100 нг/мл) и IL-21 (100 нг/мл) в присутствии или в отсутствие препаратов.
|
12 дней
|
Вторичные показатели результатов
Мера результата |
Мера Описание |
Временное ограничение |
|---|---|---|
|
пролиферирующие Т-клетки
Временное ограничение: 6 дней
|
Исследователи будут совместно культивировать В-клетки (предварительно стимулированные α-IgM и α-CD40 mAb плюс IL-21 в течение 6 дней в присутствии и в отсутствие тимоглобулина) с алло-CD4+CD25-Т-клетками (соотношение 2:1). ).
Через 6 дней исследователи будут анализировать % пролиферирующих Т-клеток и продукцию цитокинов.
|
6 дней
|
Соавторы и исследователи
Спонсор
Соавторы
Даты записи исследования
Изучение основных дат
Начало исследования (Действительный)
Первичное завершение (Действительный)
Завершение исследования (Действительный)
Даты регистрации исследования
Первый отправленный
Впервые представлено, что соответствует критериям контроля качества
Первый опубликованный (Оценивать)
Обновления учебных записей
Последнее опубликованное обновление (Действительный)
Последнее отправленное обновление, отвечающее критериям контроля качества
Последняя проверка
Дополнительная информация
Термины, связанные с этим исследованием
Ключевые слова
Другие идентификационные номера исследования
- STU00092183
Эта информация была получена непосредственно с веб-сайта clinicaltrials.gov без каких-либо изменений. Если у вас есть запросы на изменение, удаление или обновление сведений об исследовании, обращайтесь по адресу register@clinicaltrials.gov. Как только изменение будет реализовано на clinicaltrials.gov, оно будет автоматически обновлено и на нашем веб-сайте. .