Effets de la thymoglobuline sur les cellules B humaines
Effets de la thymoglobuline sur la prolifération, l'activation et la différenciation des cellules B humaines
Cette étude est en cours pour mieux comprendre comment les médicaments immunosuppresseurs (médicaments anti-rejet qui peuvent ou non être approuvés par la Food and Drug Administration (FDA)) affectent la réponse allo-immune (comment le système immunitaire d'une personne réagit contre le système immunitaire d'une autre personne) . Cela sera déterminé par les tests sanguins effectués sur les patients ayant donné des cellules sanguines.
Plus précisément, les chercheurs testeront différents médicaments immunosuppresseurs à l'aide d'essais in vitro (en laboratoire, dans des tubes à essai) seuls et/ou en combinaison pour tester comment ils peuvent affecter la prolifération et la différenciation des lymphocytes B, entraînant une distribution altérée parmi les B définis. -cellules et pour étudier si l'exposition des cellules B à la thymoglobuline peut avoir des effets sur l'interaction ultérieure entre les cellules B et T in vitro.
Pour permettre aux chercheurs de comprendre comment les médicaments immunosuppresseurs affectent le système immunitaire chez les patients transplantés, les chercheurs doivent comprendre comment ils affectent le système immunitaire chez les personnes en bonne santé. Pour ce faire, les enquêteurs devront étudier du sang prélevé sur des volontaires sains.
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
Il s'agit d'une étude de recherche sur des sujets sains qui fourniront des échantillons de sang pour divers dosages sur une période d'un an.
Des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) seront isolées de volontaires sains et des cellules B CD19+ seront sélectionnées à l'aide de microbilles magnétiques CD19.
Les cultures de lymphocytes B seront réalisées dans un milieu de culture composé de milieu MDM (IMDM) d'Iscove (Gibco, Paisley, Royaume-Uni) additionné de 10 % de sérum humain (HNS-GemCell), 0,5 ml d'insuline humaine (Sigma), 200 mM de L-Glutamine ( Sigma) et gentamycine 0,5 % (Gibco).
Les cellules CD19+B totales seront cultivées en présence d'anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40-stimulation) pendant 6 jours en culture plaques 96 puits fond rond (1.0x105 cellules/puits), et de la Thymoglobuline à différentes concentrations (10 à 100 μg/ml) avec ou sans inhibiteur de la calcineurine (Tacrolimus, TAC) et inhibiteur de mTOR (Sirolimus, SRL) seront ajoutés au jour 0 .
Divers paramètres de l'activité des lymphocytes B, notamment la prolifération, l'activation, la différenciation et la production de cytokines, seront surveillés par cytométrie en flux. Ces expériences sont expliquées plus en détail dans la section ci-dessous sur les mesures des résultats.
Les enquêteurs effectueront des analyses univariées et bivariées pour toutes les variables. Les enquêteurs évalueront les variables continues à l'aide de tests t ou de tests F et les variables catégorielles à l'aide de tests Chi-square ou Fisher Exact. Les enquêteurs examineront les distributions de données et testeront toutes les variables pour les relations linéaires ou les relations non linéaires. Des statistiques descriptives (moyennes, écart-type, fréquence) et des corrélations (Pearson et Spearman) entre les variables seront effectuées pour évaluer les données. La transformation et les imputations nécessaires seront effectuées sur la base de la distribution des données brutes. Toutes les analyses de données seront effectuées à l'aide du logiciel statistique SAS 9.3 (SAS Inc., Cary, NC). Tous les tests seront bilatéraux et un taux d'erreur de α <0,05 sera considéré comme statistiquement significatif.
Type d'étude
Contacts et emplacements
Lieux d'étude
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Illinois
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Chicago, Illinois, États-Unis, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
Sexes éligibles pour l'étude
Méthode d'échantillonnage
Population étudiée
La description
Critère d'intégration:
Le patient:
- avoir plus de 18 ans,
- devrait peser plus de 110 livres et
- ne doit pas être enceinte au moment du don de sang.
Critère d'exclusion:
(1) Ne rentre pas dans les critères d'inclusion
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Division cellulaire CD19+B
Délai: 12 jours
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3-6x106 cellules d'intérêt seront marquées avec 1,5 μM CFSE avant stimulation.
Après 6 jours, les cellules B seront récupérées, lavées, comptées et utilisées pour définir les paramètres des marqueurs.
Le phénotype cellulaire sera analysé par cytométrie en flux à cinq couleurs (FC500, Beckman-Coulter) et par cytométrie en flux à 13 couleurs (Fortessa) et les données seront analysées à l'aide du logiciel CXP.
Le surnageant de ces cultures de cellules B sera utilisé pour la détection des cytokines et pour déterminer le nombre de cellules productrices d'IgM et d'IgG par Luminex. Au jour 6, les cellules seront restimulées avec du phorbol 12-myristate 13-acétate (PMA ) et l'ionomycine, et analysés par coloration intracellulaire des cytokines.
Les cellules B CD19+ totales seront triées en une fraction de cellules B CD27- (naïves) et CD27+ (mémoire) et la caractérisation phénotypique (évaluée par cytométrie en flux) de ces cellules sera montrée après 6 jours de culture avec des anti-IgM (5μg /ml), anti-CD40 (100ng/ml) et IL-21 (100ng/ml) en présence ou en l'absence des médicaments.
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12 jours
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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lymphocytes T proliférés
Délai: 6 jours
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Les chercheurs co-cultureront des cellules B (pré-stimulées avec α-IgM et α-CD40 mAb plus IL-21 pendant 6 jours en présence et en l'absence de Thymoglobuline) avec des cellules allo-CD4 + CD25-T (ratio 2: 1 ).
Après 6 jours, les enquêteurs analyseront le % de lymphocytes T proliférés et la production de cytokines.
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6 jours
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Collaborateurs
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Réel)
Achèvement primaire (Réel)
Achèvement de l'étude (Réel)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Estimation)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Autres numéros d'identification d'étude
- STU00092183
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