Effekter av thymoglobulin på humane B-celler
Effekter av thymoglobulin på spredning, aktivering og differensiering av menneskelige B-celler
Denne studien blir gjort for å bedre forstå hvordan immundempende medisiner (anti-avvisningsmedisiner som kanskje eller ikke er godkjent av Food and Drug Administration (FDA)) påvirker alloimmunresponsen (hvordan en persons immunsystem reagerer mot en annen persons immunsystem) . Dette vil bli bestemt av blodprøvene som kjøres på pasientens donerte blodceller.
Spesifikt vil etterforskerne teste forskjellige immunsuppresjonsmedisiner ved å bruke in vitro-analyser (i laboratoriet, i reagensrør) alene og/eller i kombinasjon for å teste hvordan de kan påvirke B-celleproliferasjon og differensiering, noe som fører til en endret fordeling blant definerte B -celleundergrupper og for å studere om eksponering av B-celler for thymoglobulin kan ha effekter på etterfølgende interaksjon mellom B- og T-celler in vitro.
For å gjøre det mulig for etterforskerne å forstå hvordan immundempende medisiner påvirker immunforsvaret hos transplanterte pasienter, må etterforskerne forstå hvordan de påvirker immunforsvaret hos friske mennesker. For å gjøre dette, må etterforskerne studere blod samlet inn fra friske frivillige.
Studieoversikt
Status
Intervensjon / Behandling
Detaljert beskrivelse
Dette er en forskningsstudie av friske forsøkspersoner som skal levere blodprøver for ulike analyser over en periode på ett år.
Perifere mononukleære blodceller (PBMC) vil bli isolert fra friske frivillige og CD19+ B-celler vil bli valgt ved hjelp av CD19 magnetiske mikroperler.
B-cellekulturer vil bli utført i kulturmedium bestående av Iscoves MDM (IMDM) medium (Gibco, Paisley, UK) supplert med 10 % humant serum (HNS- GemCell), 0,5 ml humant insulin (Sigma), 200 mM L-glutamin ( Sigma) og 0,5 % Gentamycin (Gibco).
Totale CD19+B-celler vil bli dyrket i nærvær av anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40-stimulering) i 6 dager i kultur plater 96 brønner rundbunn (1,0x105 celler/brønn), og Thymoglobulin i forskjellige konsentrasjoner (10 til 100 μg/ml) med eller uten kalsineurinhemmer (Tacrolimus, TAC) og mTOR-hemmer (Sirolimus, SRL) vil bli tilsatt på dag 0 .
En rekke parametere for B-celleaktivitet inkludert proliferasjon, aktivering, differensiering og cytokinproduksjon vil bli overvåket ved hjelp av flowcytometri. Disse eksperimentene er ytterligere forklart i avsnittet om utfallsmål nedenfor.
Etterforskerne vil gjennomføre univariate og bivariate analyser for alle variabler. Etterforskerne vil evaluere kontinuerlige variabler ved å bruke t-tester eller F-tester og kategoriske variabler ved hjelp av Chi-square eller Fisher Exact-tester. Etterforskerne vil undersøke datafordelinger og teste alle variabler for lineære sammenhenger eller ikke-lineære sammenhenger. Beskrivende statistikk (gjennomsnitt, standardavvik, frekvens) og korrelasjoner (både Pearson og Spearman) mellom variabler vil bli utført for å vurdere dataene. Nødvendig transformasjon og imputasjoner vil bli utført basert på distribusjon av rådata. Alle dataanalyser vil bli utført ved hjelp av SAS 9.3 statistisk programvare (SAS Inc., Cary, NC). Alle tester vil være tosidige og en feilrate på α <0,05 vil bli vurdert som statistisk signifikant.
Studietype
Kontakter og plasseringer
Studiesteder
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Forente stater, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Deltakelseskriterier
Kvalifikasjonskriterier
Alder som er kvalifisert for studier
Tar imot friske frivillige
Kjønn som er kvalifisert for studier
Prøvetakingsmetode
Studiepopulasjon
Beskrivelse
Inklusjonskriterier:
Pasienten:
- bør være over 18 år,
- bør veie mer enn 110 lbs og
- bør ikke være gravid på tidspunktet for blodgivning.
Ekskluderingskriterier:
(1) Passer ikke inn i inklusjonskriteriene
Studieplan
Hvordan er studiet utformet?
Designdetaljer
Hva måler studien?
Primære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
CD19+B celledeling
Tidsramme: 12 dager
|
3-6x106 celler av interesse vil bli merket med 1,5μM CFSE før stimulering.
Etter 6 dager vil B-celler gjenvinnes, vaskes, telles og brukes til å definere markørinnstillinger.
Cellefenotypen vil bli analysert med fem-farge flowcytometri (FC500, Beckman-Coulter) og ved 13-farge flowcytometri (Fortessa) og data vil bli analysert ved hjelp av CXP-programvare.
Supernatanten av disse B-cellekulturene vil bli brukt for cytokindeteksjon, og for å bestemme antall IgM- og IgG-produserende celler av Luminex. På dag 6 vil cellene bli re-stimulert med phorbol 12-myristat 13-acetat (PMA) ) og ionomycin, og analysert ved intracellulær cytokinfarging.
Totale CD19+ B-celler vil bli sortert i en CD27- (naiv) og CD27+ (minne) B-cellefraksjon og den fenotypiske karakteriseringen (vurdert ved flowcytometri) av disse cellene vil bli vist etter 6 dagers dyrking med anti-IgM (5μg) /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) og IL-21 (100 ng/ml) i nærvær eller fravær av medikamentene.
|
12 dager
|
Sekundære resultatmål
Resultatmål |
Tiltaksbeskrivelse |
Tidsramme |
|---|---|---|
|
prolifererte T-celler
Tidsramme: 6 dager
|
Etterforskerne vil samdyrke B-celler (forhåndsstimulert med α-IgM og α-CD40 mAb pluss IL-21 i 6 dager i nærvær og fravær av Thymoglobulin) med allo-CD4+CD25-T-celler (forhold 2:1 ).
Etter 6 dager vil etterforskerne analysere prosentandelen av prolifererte T-celler og cytokinproduksjonen.
|
6 dager
|
Samarbeidspartnere og etterforskere
Sponsor
Samarbeidspartnere
Studierekorddatoer
Studer hoveddatoer
Studiestart (Faktiske)
Primær fullføring (Faktiske)
Studiet fullført (Faktiske)
Datoer for studieregistrering
Først innsendt
Først innsendt som oppfylte QC-kriteriene
Først lagt ut (Anslag)
Oppdateringer av studieposter
Sist oppdatering lagt ut (Faktiske)
Siste oppdatering sendt inn som oppfylte QC-kriteriene
Sist bekreftet
Mer informasjon
Begreper knyttet til denne studien
Andre studie-ID-numre
- STU00092183
Denne informasjonen ble hentet direkte fra nettstedet clinicaltrials.gov uten noen endringer. Hvis du har noen forespørsler om å endre, fjerne eller oppdatere studiedetaljene dine, vennligst kontakt register@clinicaltrials.gov. Så snart en endring er implementert på clinicaltrials.gov, vil denne også bli oppdatert automatisk på nettstedet vårt. .