Efeitos da Timoglobulina nas Células B Humanas
Efeitos da Timoglobulina na Proliferação, Ativação e Diferenciação de Células B Humanas
Este estudo está sendo feito para entender melhor como os medicamentos imunossupressores (medicamentos anti-rejeição que podem ou não ser aprovados pela Food and Drug Administration (FDA)) afetam a resposta aloimune (como o sistema imunológico de uma pessoa reage contra o sistema imunológico de outra pessoa) . Isso será determinado pelos exames de sangue executados nas células sanguíneas doadas pelos pacientes.
Especificamente, os investigadores testarão diferentes medicamentos imunossupressores usando ensaios in vitro (no laboratório, em tubos de ensaio) sozinhos e/ou em combinação para testar como eles podem afetar a proliferação e diferenciação de células B, levando a uma distribuição alterada entre os grupos B definidos -subconjuntos de células e para estudar se a exposição de células B à timoglobulina pode ter efeitos na interação subseqüente entre células B e T in vitro.
Para permitir que os investigadores entendam como os medicamentos imunossupressores afetam o sistema imunológico em pacientes transplantados, os pesquisadores precisam entender como eles afetam o sistema imunológico em pessoas saudáveis. Para fazer isso, os investigadores precisarão estudar o sangue coletado de voluntários saudáveis.
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Este é um estudo de pesquisa de indivíduos saudáveis que fornecerão amostras de sangue para vários ensaios durante um período de um ano.
Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) serão isoladas de voluntários saudáveis e células CD19+ B serão selecionadas usando microesferas magnéticas CD19.
As culturas de células B serão realizadas em meio de cultura composto por meio Iscove's MDM (IMDM) (Gibco, Paisley, Reino Unido) suplementado com 10% de soro humano (HNS-GemCell), 0,5 ml de insulina humana (Sigma), 200mM de L-Glutamina ( Sigma) e Gentamicina a 0,5% (Gibco).
Células CD19+B totais serão cultivadas na presença de anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40-estimulação) por 6 dias em cultura placas de 96 poços de fundo redondo (1,0x105 células/poço), e Timoglobulina em diferentes concentrações (10 a 100 μg/ml) com ou sem inibidor de calcineurina (Tacrolimus, TAC) e inibidor de mTOR (Sirolimus, SRL) serão adicionados no dia 0 .
Uma variedade de parâmetros de atividade de células B, incluindo proliferação, ativação, diferenciação e produção de citocinas, serão monitorados por citometria de fluxo. Esses experimentos são explicados na seção de medidas de resultado abaixo.
Os investigadores conduzirão análises univariadas e bivariadas para todas as variáveis. Os investigadores avaliarão variáveis contínuas usando testes t ou testes F e variáveis categóricas usando testes qui-quadrado ou exato de Fisher. Os investigadores examinarão as distribuições de dados e testarão todas as variáveis quanto a relacionamentos lineares ou não lineares. Estatísticas descritivas (médias, desvio padrão, frequência) e correlações (tanto de Pearson quanto de Spearman) entre as variáveis serão realizadas para avaliar os dados. As transformações e imputações necessárias serão realizadas com base na distribuição de dados brutos. Todas as análises de dados serão realizadas usando o software estatístico SAS 9.3 (SAS Inc., Cary, NC). Todos os testes serão bilaterais e uma taxa de erro de α <0,05 será considerada estatisticamente significativa.
Tipo de estudo
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Illinois
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Chicago, Illinois, Estados Unidos, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
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-
Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
O paciente:
- deve ter mais de 18 anos,
- deve pesar mais de 110 libras e
- não deve estar grávida no momento da doação de sangue.
Critério de exclusão:
(1) Não se encaixa nos critérios de inclusão
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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Divisão celular CD19+B
Prazo: 12 dias
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3-6x106 células de interesse serão marcadas com CFSE 1,5μM antes da estimulação.
Após 6 dias, as células B serão recuperadas, lavadas, contadas e usadas para definir as configurações do marcador.
O fenótipo celular será analisado por citometria de fluxo de cinco cores (FC500, Beckman-Coulter) e por citometria de fluxo de 13 cores (Fortessa) e os dados serão analisados usando o software CXP.
O sobrenadante dessas culturas de células B será usado para a detecção de citocinas e para determinar o número de células produtoras de IgM e IgG por Luminex. No dia 6, as células serão reestimuladas com forbol 12-miristato 13-acetato (PMA ) e Ionomicina, e analisados por coloração de citocinas intracelulares.
As células B CD19+ totais serão separadas em fração de células B CD27- (naïve) e CD27+ (memória) e a caracterização fenotípica (avaliada por citometria de fluxo) dessas células será mostrada após 6 dias de cultivo com anti-IgM (5μg /ml), anti-CD40 (100ng/ml) e IL-21 (100ng/ml) na presença ou ausência das drogas.
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12 dias
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
|---|---|---|
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células T proliferadas
Prazo: 6 dias
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Os investigadores irão co-cultivar células B (pré-estimuladas com α-IgM e α-CD40 mAb mais IL-21 por 6 dias na presença e ausência de Timoglobulina) com células T alo-CD4+CD25- (proporção 2:1 ).
Após 6 dias, os investigadores irão analisar a % de células T proliferadas e a produção de citocinas.
|
6 dias
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Colaboradores
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Real)
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Estimativa)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Outros números de identificação do estudo
- STU00092183
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