A timoglobulin hatása az emberi B-sejtekre
A timoglobulin hatása az emberi B-sejtek szaporodására, aktiválására és differenciálódására
Ezt a tanulmányt azért végezzük, hogy jobban megértsük, hogyan befolyásolják az immunszuppresszív gyógyszerek (kilökődés elleni gyógyszerek, amelyeket az Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatóság (FDA) hagyott jóvá, vagy nem) az alloimmun választ (hogyan reagál egy személy immunrendszere egy másik személy immunrendszerére). . Ezt a betegek által adományozott vérsejteken végzett vérvizsgálatok határozzák meg.
Pontosabban, a kutatók különböző immunszuppresszív gyógyszereket fognak tesztelni in vitro vizsgálatokkal (laboratóriumban, kémcsövekben) önmagukban és/vagy kombinációban, hogy megvizsgálják, hogyan befolyásolhatják a B-sejtek proliferációját és differenciálódását, ami megváltozott eloszláshoz vezet a meghatározott B között. -sejt alcsoportok, valamint annak tanulmányozása, hogy a B-sejtek timoglobulinnak való kitettsége hatással lehet-e a B- és T-sejtek közötti későbbi interakcióra in vitro.
Ahhoz, hogy a kutatók megértsék, hogyan hatnak az immunszuppresszáns gyógyszerek az átültetett betegek immunrendszerére, a kutatóknak meg kell érteniük, hogyan hatnak az egészséges emberek immunrendszerére. Ehhez a kutatóknak egészséges önkéntesektől gyűjtött vért kell tanulmányozniuk.
A tanulmány áttekintése
Állapot
Beavatkozás / kezelés
Részletes leírás
Ez egy egészséges alanyokon végzett kutatás, akik egy éven keresztül vérmintákat adnak a különféle vizsgálatokhoz.
A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) egészséges önkéntesekből izolálják, és a CD19+ B sejteket CD19 mágneses mikrogyöngyök segítségével választják ki.
A B-sejttenyészeteket Iscove MDM (IMDM) táptalajból (Gibco, Paisley, Egyesült Királyság) tartalmazó tápközegben végezzük, kiegészítve 10% humán szérummal (HNS-GemCell), 0,5 ml humán inzulinnal (Sigma), 200 mM L-glutaminnal ( Sigma) és 0,5% Gentamycin (Gibco).
Az összes CD19+B sejtet anti-IgM (3 μg/ml), anti-CD40 (100 ng/ml), IL-21 (100 ng/ml) (BCR/CD40-stimuláció) jelenlétében tenyésztjük 6 napig a tenyészetben. 96 lyukú, kerek fenekű lemezek (1,0x105 sejt/lyuk), és timoglobulint különböző koncentrációkban (10-100 μg/ml) kalcineurin-gátlóval (Tacrolimus, TAC) és mTOR-gátlóval (Sirolimus, SRL) vagy anélkül a 0. napon adják hozzá .
A B-sejt-aktivitás számos paraméterét, beleértve a proliferációt, az aktiválást, a differenciálódást és a citokintermelést, áramlási citometriával követjük nyomon. Ezeket a kísérleteket az alábbi, eredménymérések részben ismertetjük.
A vizsgálók minden változóra egy- és kétváltozós elemzéseket végeznek. A vizsgálók a folytonos változókat t-próbával vagy F-próbával, a kategorikus változókat pedig Chi-négyzet vagy Fisher Exact tesztekkel értékelik. A kutatók megvizsgálják az adatok eloszlását, és megvizsgálják az összes változót lineáris vagy nemlineáris kapcsolatokra. Az adatok értékeléséhez leíró statisztikákat (átlagok, szórás, gyakoriság) és a változók közötti korrelációkat (Pearson és Spearman egyaránt) készítenek. A szükséges átalakításokat és imputációkat a nyers adateloszlás alapján végezzük el. Minden adatelemzés a SAS 9.3 statisztikai szoftverrel (SAS Inc., Cary, NC) történik. Minden teszt kétoldalú lesz, és az α <0,05 hibaarány statisztikailag szignifikánsnak minősül.
Tanulmány típusa
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi helyek
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Egyesült Államok, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
Egészséges önkénteseket fogad
Tanulmányozható nemek
Mintavételi módszer
Tanulmányi populáció
Leírás
Bevételi kritériumok:
A páciens:
- 18 évesnél idősebbnek kell lennie,
- 110 fontnál nagyobb súlyúnak kell lennie és
- nem lehet terhes a véradás idején.
Kizárási kritériumok:
(1) Nem felel meg a felvételi kritériumoknak
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
CD19+B sejtosztódás
Időkeret: 12 nap
|
3-6x106 érdeklődésre számot tartó sejtet 1,5 μM CFSE-vel jelölnek meg a stimuláció előtt.
6 nap elteltével a B-sejteket kinyerjük, megmossuk, megszámoljuk és a markerbeállítások meghatározására használják.
A sejt fenotípusát ötszínes áramlási citometriával (FC500, Beckman-Coulter) és 13-színes áramlási citometriával (Fortessa) elemzik, és az adatokat CXP szoftverrel elemzik.
Ezeknek a B-sejttenyészeteknek a felülúszóját a citokinek kimutatására, valamint az IgM-et és IgG-t termelő sejtek számának Luminex segítségével történő meghatározására használjuk fel. A 6. napon a sejteket forbol-12-mirisztát-13-acetáttal (PMA) újra stimuláljuk. ) és Ionomycin, és intracelluláris citokinfestéssel analizáltuk.
Az összes CD19+ B-sejteket CD27- (naiv) és CD27+ (memória) B-sejt-frakciókra válogatjuk, és ezeknek a sejteknek a fenotípusos jellemzését (áramlási citometriával értékelve) 6 napos anti-IgM-mel (5 μg) végzett tenyésztés után mutatjuk be. /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) és IL-21 (100 ng/ml) a gyógyszerek jelenlétében vagy hiányában.
|
12 nap
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
szaporodott T-sejtek
Időkeret: 6 nap
|
A kutatók B-sejteket (előstimulálva α-IgM és α-CD40 mAb-vel és IL-21-gyel 6 napig timoglobulin jelenlétében és távollétében) allo-CD4+CD25-T sejtekkel (2:1 arányban) együtt tenyésztik. ).
6 nap elteltével a vizsgálók elemzik a proliferált T-sejtek százalékos arányát és a citokintermelést.
|
6 nap
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Együttműködők
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Tényleges)
A tanulmány befejezése (Tényleges)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Becslés)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Tényleges)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
Kulcsszavak
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- STU00092183
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .