Efectos de la timoglobulina en las células B humanas
Efectos de la timoglobulina sobre la proliferación, activación y diferenciación de células B humanas
Este estudio se realiza para comprender mejor cómo los medicamentos inmunosupresores (medicamentos contra el rechazo que pueden o no estar aprobados por la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA)) afectan la respuesta aloinmune (cómo reacciona el sistema inmunitario de una persona contra el sistema inmunitario de otra persona) . Esto se determinará mediante los análisis de sangre realizados en las células sanguíneas donadas de los pacientes.
Específicamente, los investigadores probarán diferentes medicamentos inmunosupresores utilizando ensayos in vitro (en el laboratorio, en tubos de ensayo) solos o en combinación para probar cómo pueden afectar la proliferación y diferenciación de células B, lo que lleva a una distribución alterada entre B definidos. -subconjuntos de células y estudiar si la exposición de las células B a la timoglobulina puede tener efectos sobre la interacción posterior entre las células B y T in vitro.
Para que los investigadores puedan comprender cómo los medicamentos inmunosupresores afectan el sistema inmunitario de los pacientes trasplantados, los investigadores deben comprender cómo afectan al sistema inmunitario de las personas sanas. Para hacer esto, los investigadores deberán estudiar la sangre recolectada de voluntarios sanos.
Descripción general del estudio
Estado
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
Este es un estudio de investigación de sujetos sanos que proporcionarán muestras de sangre para varios ensayos durante un período de un año.
Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislarán de voluntarios sanos y las células B CD19+ se seleccionarán utilizando microesferas magnéticas CD19.
Los cultivos de células B se realizarán en un medio de cultivo que consta de medio MDM (IMDM) de Iscove (Gibco, Paisley, Reino Unido) suplementado con suero humano al 10 % (HNS-GemCell), 0,5 ml de insulina humana (Sigma), L-glutamina 200 mM ( Sigma) y gentamicina al 0,5% (Gibco).
Las células B CD19+ totales se cultivarán en presencia de anti-IgM (3 μg/ml), anti-CD40 (100 ng/ml), IL-21 (100 ng/ml) (estimulación con BCR/CD40) durante 6 días en cultivo. Placas de 96 pocillos de fondo redondo (1,0x105 células/pocillo) y Timoglobulina a diferentes concentraciones (10 a 100 μg/ml) con o sin inhibidor de calcineurina (Tacrolimus, TAC) e inhibidor de mTOR (Sirolimus, SRL) se añadirán el día 0 .
Una variedad de parámetros de la actividad de las células B, incluida la proliferación, la activación, la diferenciación y la producción de citoquinas, se controlarán mediante citometría de flujo. Estos experimentos se explican con más detalle en la sección de medidas de resultado a continuación.
Los investigadores realizarán análisis univariados y bivariados para todas las variables. Los investigadores evaluarán las variables continuas mediante pruebas t o pruebas F y las variables categóricas mediante pruebas Chi-cuadrado o Fisher Exact. Los investigadores examinarán las distribuciones de datos y probarán todas las variables en busca de relaciones lineales o relaciones no lineales. Se realizarán estadísticas descriptivas (medias, desviación estándar, frecuencia) y correlaciones (tanto de Pearson como de Spearman) entre las variables para evaluar los datos. Las transformaciones e imputaciones necesarias se realizarán en función de la distribución de datos sin procesar. Todos los análisis de datos se realizarán utilizando el software estadístico SAS 9.3 (SAS Inc., Cary, NC). Todas las pruebas serán bilaterales y una tasa de error de α <0,05 se considerará estadísticamente significativa.
Tipo de estudio
Contactos y Ubicaciones
Ubicaciones de estudio
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Illinois
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Chicago, Illinois, Estados Unidos, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
El paciente:
- debe tener más de 18 años,
- debe pesar más de 110 libras y
- No debe estar embarazada en el momento de la donación de sangre.
Criterio de exclusión:
(1) No se ajusta a los criterios de inclusión
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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División de células CD19+B
Periodo de tiempo: 12 días
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Se marcarán 3-6x106 células de interés con CFSE 1,5 μM antes de la estimulación.
Después de 6 días, las células B se recuperarán, lavarán, contarán y usarán para definir la configuración del marcador.
El fenotipo celular se analizará mediante citometría de flujo de cinco colores (FC500, Beckman-Coulter) y mediante citometría de flujo de 13 colores (Fortessa) y los datos se analizarán mediante el software CXP.
El sobrenadante de estos cultivos de células B se usará para la detección de citocinas y para determinar el número de células productoras de IgM e IgG mediante Luminex. En el día 6, las células se volverán a estimular con forbol 12-miristato 13-acetato (PMA ) y la ionomicina, y se analizaron mediante tinción de citoquinas intracelulares.
Las células B CD19+ totales se clasificarán en una fracción de células B CD27- (naïve) y CD27+ (memoria) y la caracterización fenotípica (evaluada por citometría de flujo) de estas células se mostrará después de 6 días de cultivo con anti-IgM (5 μg /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) e IL-21 (100 ng/ml) en presencia o ausencia de los fármacos.
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12 días
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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células T proliferadas
Periodo de tiempo: 6 días
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Los investigadores cocultivarán células B (preestimuladas con α-IgM y α-CD40 mAb más IL-21 durante 6 días en presencia y ausencia de timoglobulina) con alo-CD4+CD25-células T (proporción 2:1 ).
Después de 6 días, los investigadores analizarán el % de células T proliferadas y la producción de citoquinas.
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6 días
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Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
Finalización primaria (Actual)
Finalización del estudio (Actual)
Fechas de registro del estudio
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- STU00092183
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