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Effetti della timoglobulina sulle cellule B umane

27 marzo 2018 aggiornato da: Lorenzo Gallon, Northwestern University

Effetti della timoglobulina sulla proliferazione, attivazione e differenziazione delle cellule B umane

Questo studio è stato condotto per comprendere meglio come i farmaci immunosoppressori (farmaci anti-rigetto che possono o meno essere approvati dalla Food and Drug Administration (FDA)) influenzano la risposta alloimmune (come il sistema immunitario di una persona reagisce contro il sistema immunitario di un'altra persona) . Ciò sarà determinato dagli esami del sangue eseguiti sulle cellule del sangue donate dai pazienti.

In particolare, gli investigatori testeranno diversi farmaci immunosoppressivi utilizzando saggi in vitro (in laboratorio, in provetta) da soli e/o in combinazione per verificare come possono influenzare la proliferazione e la differenziazione delle cellule B, portando a una distribuzione alterata tra i B definiti sottoinsiemi cellulari e studiare se l'esposizione delle cellule B alla timoglobulina può avere effetti sulla successiva interazione tra le cellule B e T in vitro.

Per consentire ai ricercatori di capire come i farmaci immunosoppressori influenzano il sistema immunitario nei pazienti trapiantati, i ricercatori devono capire come influenzano il sistema immunitario nelle persone sane. Per fare questo, gli investigatori dovranno studiare il sangue raccolto da volontari sani.

Panoramica dello studio

Stato

Ritirato

Condizioni

Intervento / Trattamento

Descrizione dettagliata

Questo è uno studio di ricerca su soggetti sani che forniranno campioni di sangue per vari test per un periodo di un anno.

Le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) saranno isolate da volontari sani e le cellule B CD19+ saranno selezionate utilizzando microsfere magnetiche CD19.

Le colture di cellule B saranno eseguite in terreno di coltura costituito da terreno MDM (IMDM) di Iscove (Gibco, Paisley, Regno Unito) integrato con siero umano al 10% (HNS- GemCell), 0,5 ml di insulina umana (Sigma), 200 mM di L-glutammina ( Sigma) e Gentamicina allo 0,5% (Gibco).

Le cellule CD19+B totali saranno coltivate in presenza di anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (stimolazione BCR/CD40) per 6 giorni in coltura piastre da 96 pozzetti a fondo tondo (1.0x105 cellule/pozzetto) e Thymoglobulin a diverse concentrazioni (da 10 a 100 μg/ml) con o senza inibitore della calcineurina (Tacrolimus, TAC) e inibitore di mTOR (Sirolimus, SRL) verranno aggiunti al giorno 0 .

Una varietà di parametri dell'attività delle cellule B tra cui la proliferazione, l'attivazione, la differenziazione e la produzione di citochine sarà monitorata mediante citometria a flusso.

Gli investigatori condurranno analisi univariate e bivariate per tutte le variabili. Gli investigatori valuteranno le variabili continue utilizzando t-test o F-test e le variabili categoriali utilizzando i test Chi-quadrato o Fisher Exact. Gli investigatori esamineranno le distribuzioni dei dati e testeranno tutte le variabili per relazioni lineari o relazioni non lineari. Statistiche descrittive (medie, deviazione standard, frequenza) e correlazioni (sia Pearson che Spearman) tra le variabili saranno condotte per valutare i dati. Le necessarie trasformazioni e imputazioni saranno condotte sulla base della distribuzione dei dati grezzi. Tutte le analisi dei dati saranno eseguite utilizzando il software statistico SAS 9.3 (SAS Inc., Cary, NC). Tutti i test saranno bilaterali e un tasso di errore di α <0,05 sarà considerato statisticamente significativo.

Tipo di studio

Osservativo

Contatti e Sedi

Questa sezione fornisce i recapiti di coloro che conducono lo studio e informazioni su dove viene condotto lo studio.

Luoghi di studio

  • Stati Uniti
    • Illinois
      • Chicago, Illinois, Stati Uniti, 60611
        • Northwestern University Comprehensive Transplant Center

Criteri di partecipazione

I ricercatori cercano persone che corrispondano a una certa descrizione, chiamata criteri di ammissibilità. Alcuni esempi di questi criteri sono le condizioni generali di salute di una persona o trattamenti precedenti.

Criteri di ammissibilità

Età idonea allo studio

18 anni e precedenti (Adulto, Adulto più anziano)

Accetta volontari sani

Sì

Sessi ammissibili allo studio

Tutto

Metodo di campionamento

Campione non probabilistico

Popolazione di studio

La popolazione in studio sarà composta da volontari sani che soddisfano i criteri di inclusione/esclusione.

Descrizione

Criterio di inclusione:

Il paziente:

  1. dovrebbe avere più di 18 anni,
  2. dovrebbe pesare più di 110 libbre e
  3. non deve essere incinta al momento della donazione del sangue.

Criteri di esclusione:

(1) Non rientrante nei criteri di inclusione

Piano di studio

Questa sezione fornisce i dettagli del piano di studio, compreso il modo in cui lo studio è progettato e ciò che lo studio sta misurando.

Come è strutturato lo studio?

Dettagli di progettazione

Cosa sta misurando lo studio?

Misure di risultato primarie

Misura del risultato
Misura Descrizione
Lasso di tempo
Divisione cellulare CD19+B
Lasso di tempo: 12 giorni
3-6x106 cellule di interesse saranno marcate con 1.5μM CFSE prima della stimolazione. Dopo 6 giorni, le cellule B saranno recuperate, lavate, contate e utilizzate per definire le impostazioni dei marcatori. Il fenotipo cellulare sarà analizzato mediante citometria a flusso a cinque colori (FC500, Beckman-Coulter) e mediante citometria a flusso a 13 colori (Fortessa) ei dati saranno analizzati utilizzando il software CXP. Il supernatante di queste colture di cellule B verrà utilizzato per il rilevamento delle citochine e per determinare il numero di cellule produttrici di IgM e IgG mediante Luminex. Al giorno 6, le cellule saranno nuovamente stimolate con forbolo 12-miristato 13-acetato (PMA ) e Ionomicina, e analizzati mediante colorazione intracellulare di citochine. Le cellule B CD19+ totali saranno ordinate in una frazione di cellule B CD27- (naïve) e CD27+ (memoria) e la caratterizzazione fenotipica (valutata mediante citometria a flusso) di queste cellule sarà mostrata dopo 6 giorni di coltura con anti-IgM (5μg /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) e IL-21 (100 ng/ml) in presenza o in assenza dei farmaci.
12 giorni

Misure di risultato secondarie

Misura del risultato
Misura Descrizione
Lasso di tempo
cellule T proliferate
Lasso di tempo: 6 giorni
Gli investigatori co-coltureranno cellule B (pre-stimolate con α-IgM e α-CD40 mAb più IL-21 per 6 giorni in presenza e in assenza di timoglobulina) con cellule T allo-CD4+CD25- (rapporto 2:1 ). Dopo 6 giorni i ricercatori analizzeranno la % di cellule T proliferate e la produzione di citochine.
6 giorni

Collaboratori e investigatori

Qui è dove troverai le persone e le organizzazioni coinvolte in questo studio.

Sponsor

Northwestern University

Collaboratori

Sanofi

Studiare le date dei record

Queste date tengono traccia dell'avanzamento della registrazione dello studio e dell'invio dei risultati di sintesi a ClinicalTrials.gov. I record degli studi e i risultati riportati vengono esaminati dalla National Library of Medicine (NLM) per assicurarsi che soddisfino specifici standard di controllo della qualità prima di essere pubblicati sul sito Web pubblico.

Studia le date principali

Inizio studio (Effettivo)

1 aprile 2014

Completamento primario (Effettivo)

1 marzo 2018

Completamento dello studio (Effettivo)

1 marzo 2018

Date di iscrizione allo studio

Primo inviato

30 aprile 2014

Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità

12 maggio 2014

Primo Inserito (Stima)

14 maggio 2014

Aggiornamenti dei record di studio

Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)

29 marzo 2018

Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC

27 marzo 2018

Ultimo verificato

1 marzo 2018

Maggiori informazioni

Termini relativi a questo studio

Parole chiave

Altri numeri di identificazione dello studio

  • STU00092183

Queste informazioni sono state recuperate direttamente dal sito web clinicaltrials.gov senza alcuna modifica. In caso di richieste di modifica, rimozione o aggiornamento dei dettagli dello studio, contattare register@clinicaltrials.gov. Non appena verrà implementata una modifica su clinicaltrials.gov, questa verrà aggiornata automaticamente anche sul nostro sito web .

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