Effecten van thymoglobuline op menselijke B-cellen
Effecten van thymoglobuline op proliferatie, activering en differentiatie van menselijke B-cellen
Deze studie wordt uitgevoerd om beter te begrijpen hoe immunosuppressiva (anti-afstotingsmedicijnen die al dan niet zijn goedgekeurd door de Food and Drug Administration (FDA)) de allo-immuunrespons beïnvloeden (hoe het immuunsysteem van een persoon reageert tegen het immuunsysteem van een ander). . Dit wordt bepaald door de bloedtesten die worden uitgevoerd op de door de patiënt gedoneerde bloedcellen.
Concreet zullen de onderzoekers verschillende immunosuppressieve medicijnen testen met behulp van in-vitro-assays (in het laboratorium, in reageerbuizen) alleen en/of in combinatie om te testen hoe ze de proliferatie en differentiatie van B-cellen kunnen beïnvloeden, wat leidt tot een gewijzigde verdeling over gedefinieerde B-celproliferatie en -differentiatie. subsets van cellen en om te onderzoeken of blootstelling van B-cellen aan thymoglobuline effecten kan hebben op de daaropvolgende interactie tussen B- en T-cellen in vitro.
Om de onderzoekers in staat te stellen te begrijpen hoe immunosuppressiva het immuunsysteem van transplantatiepatiënten beïnvloeden, moeten de onderzoekers begrijpen hoe ze het immuunsysteem van gezonde mensen beïnvloeden. Om dit te doen, zullen de onderzoekers bloed moeten bestuderen dat is verzameld van gezonde vrijwilligers.
Studie Overzicht
Toestand
Interventie / Behandeling
Gedetailleerde beschrijving
Dit is een onderzoeksstudie van gezonde proefpersonen die gedurende een jaar bloedmonsters zullen leveren voor verschillende assays.
Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC) zullen worden geïsoleerd uit gezonde vrijwilligers en CD19+ B-cellen zullen worden geselecteerd met behulp van CD19 magnetische microbolletjes.
B-celkweken zullen worden uitgevoerd in kweekmedium bestaande uit Iscove's MDM (IMDM) medium (Gibco, Paisley, UK) aangevuld met 10% humaan serum (HNS-GemCell), 0,5 ml humane insuline (Sigma), 200 mM L-glutamine ( Sigma) en 0,5% Gentamycine (Gibco).
Totaal aantal CD19+B-cellen zal worden gekweekt in aanwezigheid van anti-IgM (3μg/ml), anti-CD40 (100ng/ml), IL-21 (100ng/ml) (BCR/CD40-stimulatie) gedurende 6 dagen in cultuur platen 96 wells met ronde bodem (1,0x105 cellen/well), en Thymoglobuline in verschillende concentraties (10 tot 100 μg/ml) met of zonder calcineurineremmer (Tacrolimus, TAC) en mTOR-remmer (Sirolimus, SRL) worden toegevoegd op dag 0 .
Een verscheidenheid aan parameters van B-celactiviteit, waaronder proliferatie, activatie, differentiatie en cytokineproductie, zal worden gecontroleerd door middel van flowcytometrie. Deze experimenten worden verder uitgelegd in de sectie met uitkomstmaten hieronder.
De onderzoekers voeren univariate en bivariate analyses uit voor alle variabelen. De onderzoekers evalueren continue variabelen met behulp van t-toetsen of F-toetsen en categorische variabelen met behulp van Chi-kwadraat- of Fisher Exact-toetsen. De onderzoekers onderzoeken de gegevensdistributies en testen alle variabelen op lineaire relaties of niet-lineaire relaties. Beschrijvende statistieken (gemiddelden, standaarddeviatie, frequentie) en correlaties (zowel Pearson als Spearman) tussen variabelen zullen worden uitgevoerd om de gegevens te beoordelen. Noodzakelijke transformatie en imputaties zullen worden uitgevoerd op basis van de distributie van onbewerkte gegevens. Alle gegevensanalyses worden uitgevoerd met behulp van SAS 9.3 statistische software (SAS Inc., Cary, NC). Alle tests zijn tweezijdig en een foutenpercentage van α <0,05 wordt als statistisch significant beschouwd.
Studietype
Contacten en locaties
Studie Locaties
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Verenigde Staten, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
De patient:
- moet ouder zijn dan 18 jaar,
- zou meer dan 110 lbs moeten wegen en
- mag niet zwanger zijn op het moment van bloeddonatie.
Uitsluitingscriteria:
(1) Past niet binnen de inclusiecriteria
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
CD19+B-celdeling
Tijdsspanne: 12 dagen
|
3-6x106 interessante cellen zullen vóór stimulatie worden gelabeld met 1,5 μM CFSE.
Na 6 dagen worden B-cellen teruggewonnen, gewassen, geteld en gebruikt om markerinstellingen te definiëren.
Het celfenotype zal worden geanalyseerd door middel van flowcytometrie met vijf kleuren (FC500, Beckman-Coulter) en door flowcytometrie met 13 kleuren (Fortessa) en de gegevens zullen worden geanalyseerd met behulp van CXP-software.
Het supernatant van deze B-celculturen zal worden gebruikt voor de detectie van cytokinen en voor het bepalen van het aantal IgM- en IgG-producerende cellen door Luminex. Op dag 6 worden de cellen opnieuw gestimuleerd met forbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA ) en ionomycine, en geanalyseerd door intracellulaire cytokinekleuring.
Het totale aantal CD19+ B-cellen zal worden gesorteerd in een CD27- (naïeve) en CD27+ (geheugen) B-celfractie en de fenotypische karakterisering (beoordeeld door flowcytometrie) van deze cellen zal worden aangetoond na 6 dagen kweken met anti-IgM (5μg /ml), anti-CD40 (100ng/ml) en IL-21 (100ng/ml) in aan- of afwezigheid van de medicijnen.
|
12 dagen
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
geprolifereerde T-cellen
Tijdsspanne: 6 dagen
|
De onderzoekers zullen B-cellen (vooraf gestimuleerd met α-IgM en α-CD40 mAb plus IL-21 gedurende 6 dagen in aan- en afwezigheid van Thymoglobuline) co-kweken met allo-CD4+CD25-T-cellen (verhouding 2:1 ).
Na 6 dagen analyseren de onderzoekers het % prolifererende T-cellen en de cytokineproductie.
|
6 dagen
|
Medewerkers en onderzoekers
Sponsor
Medewerkers
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (Werkelijk)
Primaire voltooiing (Werkelijk)
Studie voltooiing (Werkelijk)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (Schatting)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (Werkelijk)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Andere studie-ID-nummers
- STU00092183
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .