Thymoglobuliinin vaikutukset ihmisen B-soluihin
Thymoglobuliinin vaikutukset ihmisen B-solujen lisääntymiseen, aktivaatioon ja erilaistumiseen
Tämä tutkimus tehdään ymmärtääkseen paremmin, kuinka immunosuppressiiviset lääkkeet (hyljintälääkkeet, jotka voivat olla tai eivät ole elintarvike- ja lääkeviraston (FDA) hyväksymiä) vaikuttavat alloimmuunivasteeseen (miten ihmisen immuunijärjestelmä reagoi toisen henkilön immuunijärjestelmää vastaan) . Tämä määritetään potilaiden luovuttamien verisolujen verikokeilla.
Erityisesti tutkijat testaavat erilaisia immunosuppressiolääkkeitä käyttämällä in vitro -määrityksiä (laboratoriossa, koeputkissa) yksinään ja/tai yhdistelmänä testatakseen, kuinka ne voivat vaikuttaa B-solujen lisääntymiseen ja erilaistumiseen, mikä johtaa muuttuneeseen jakautumiseen määriteltyjen B-solujen kesken. -solujen alaryhmiä ja tutkia, voiko B-solujen altistuminen tymoglobuliinille vaikuttaa myöhempään B- ja T-solujen väliseen vuorovaikutukseen in vitro.
Jotta tutkijat voisivat ymmärtää, kuinka immunosuppressiiviset lääkkeet vaikuttavat elinsiirtopotilaiden immuunijärjestelmään, tutkijoiden on ymmärrettävä, kuinka ne vaikuttavat terveiden ihmisten immuunijärjestelmään. Tätä varten tutkijoiden on tutkittava terveiltä vapaaehtoisilta kerättyä verta.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Tämä on tutkimustutkimus terveistä koehenkilöistä, jotka toimittavat verinäytteitä erilaisia määrityksiä varten yhden vuoden ajan.
Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC) eristetään terveistä vapaaehtoisista ja CD19+ B-solut valitaan käyttämällä CD19-magneettisia mikrohelmiä.
B-soluviljelmät suoritetaan viljelyalustassa, joka koostuu Iscoven MDM (IMDM) -elatusaineesta (Gibco, Paisley, UK), jota on täydennetty 10 % ihmisen seerumilla (HNS-GemCell), 0,5 ml:lla ihmisinsuliinia (Sigma), 200 mM L-glutamiinia ( Sigma) ja 0,5 % gentamysiini (Gibco).
CD19+B-solujen kokonaismäärää viljellään anti-IgM:n (3 µg/ml), anti-CD40:n (100 ng/ml), IL-21:n (100 ng/ml) (BCR/CD40-stimulaatio) läsnä ollessa 6 päivän ajan viljelmässä. 96-kuoppaiset pyöreäpohjaiset levyt (1,0 x 105 solua/kuoppa) ja tymoglobuliinia eri pitoisuuksina (10-100 μg/ml) kalsineuriinin estäjän (takrolimuusi, TAC) ja mTOR-estäjän (Sirolimus, SRL) kanssa tai ilman niitä lisätään päivänä 0. .
Useita B-soluaktiivisuuden parametreja, mukaan lukien proliferaatio, aktivaatio, erilaistuminen ja sytokiinituotanto, seurataan virtaussytometrian avulla. Näitä kokeita selitetään tarkemmin alla olevassa tulosmittausosiossa.
Tutkijat tekevät yksi- ja kaksimuuttujaanalyysejä kaikille muuttujille. Tutkijat arvioivat jatkuvia muuttujia t-testeillä tai F-testeillä ja kategorisia muuttujia khin neliö- tai Fisher Exact -testeillä. Tutkijat tutkivat datajakaumia ja testaavat kaikki muuttujat lineaaristen tai epälineaaristen suhteiden varalta. Aineiston arvioimiseksi tehdään kuvaavia tilastoja (keskiarvot, keskihajonta, taajuus) ja muuttujien väliset korrelaatiot (sekä Pearson että Spearman). Tarvittavat muunnos ja imputoinnit suoritetaan raakadatajakauman perusteella. Kaikki data-analyysit suoritetaan käyttämällä SAS 9.3 -tilastoohjelmistoa (SAS Inc., Cary, NC). Kaikki testit ovat kaksipuolisia ja virhesuhdetta α <0,05 pidetään tilastollisesti merkitsevänä.
Opintotyyppi
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
Illinois
-
Chicago, Illinois, Yhdysvallat, 60611
- Northwestern University Comprehensive Transplant Center
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
Potilas:
- tulee olla yli 18-vuotias,
- pitäisi painaa yli 110 kiloa ja
- ei saa olla raskaana verenluovutushetkellä.
Poissulkemiskriteerit:
(1) Ei sovi sisällyttämiskriteerien piiriin
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
CD19+B-solujen jakautuminen
Aikaikkuna: 12 päivää
|
Kiinnostuksen kohteena olevat 3-6 x 106 solua leimataan 1,5 µM CFSE:llä ennen stimulaatiota.
Kuuden päivän kuluttua B-solut otetaan talteen, pestään, lasketaan ja niitä käytetään markkeriasetusten määrittämiseen.
Solufenotyyppi analysoidaan viiden värin virtaussytometrialla (FC500, Beckman-Coulter) ja 13-värivirtaussytometrillä (Fortessa) ja tiedot analysoidaan CXP-ohjelmistolla.
Näiden B-soluviljelmien supernatanttia käytetään sytokiinien havaitsemiseen ja IgM:ää ja IgG:tä tuottavien solujen lukumäärän määrittämiseen Luminexilla. Päivänä 6 soluja stimuloidaan uudelleen forboli-12-myristaatti-13-asetaatilla (PMA) ) ja ionomysiini, ja analysoitiin intrasellulaarisella sytokiinivärjäyksellä.
CD19+ B-solujen kokonaismäärä lajitellaan CD27- (naiivit) ja CD27+ (muisti) B-solufraktioon, ja näiden solujen fenotyyppinen karakterisointi (virtaussytometrisesti arvioituna) esitetään 6 päivän viljelyn jälkeen anti-IgM:llä (5 μg) /ml), anti-CD40 (100 ng/ml) ja IL-21 (100 ng/ml) lääkkeiden läsnä ollessa tai ilman.
|
12 päivää
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
lisääntyneet T-solut
Aikaikkuna: 6 päivää
|
Tutkijat viljelevät B-soluja (esistimuloituja α-IgM:llä ja α-CD40 mAb:llä sekä IL-21:llä 6 päivän ajan tymoglobuliinin läsnäollessa ja poissa ollessa) allo-CD4+CD25-T-solujen kanssa (suhde 2:1) ).
Kuuden päivän kuluttua tutkijat analysoivat lisääntyneiden T-solujen prosenttiosuuden ja sytokiinituotannon.
|
6 päivää
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvio)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- STU00092183
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .