ERCP誘発性および非ERCP誘発性急性膵炎：2つの異なる臨床的および免疫学的実体？

プロトコル：

内視鏡的逆行性胆道膵管造影（ERCP）の適応があるすべての患者は、次のプロトコルでERCPの準備ができます。手順の4〜6時間前に食事をしないように指示されます。 処置の直前に、ジクロフェナク ナトリウム 100 mg 坐剤を投与します。 手順の 1 時間前に、10 mL の血液サンプルと尿サンプルが採取され、次のパラメータについてリエカ大学病院センターに組み込まれた実験施設で分析されます。 ERCP 実施の 4 ～ 6 時間後、10 mL の血液サンプルが採取され、リエカ大学病院センターに組み込まれた実験施設で次のパラメータについて分析されます。 .

手順の24時間後に、すべての患者から30mlのヘパリン化末梢静脈血および尿サンプルを採取します。 10 mL は臨床病院センターの臨床検査医学部門で次のパラメータについて検査されます: 血清および尿中のアミラーゼおよび血清中のリパーゼの値、肝酵素検査および腎機能 処置後に採取された尿サンプルは、アミラーゼレベルを評価するために使用されます。 他の 20 mL の血液サンプルは、免疫学的分析が行われる医学部の生理学および免疫学科に送られます。 ERCPを受けたすべての患者は2つのグループに分けられます。 最初のグループ（PEPグループ）は、ERCP後に急性膵炎を発症した患者で構成されます。 ERCP後の膵炎に関する欧州消化器内視鏡学会（ESGE）のガイドラインに従って急性膵炎が臨床的および検査室で確認されると、疾患の重症度を評価するために入院中にさらに監視されます。 疾患の重症度は、ERCP後の膵炎の重症度に関するコットン基準に従って評価されます。 ERCP を受けたが、ESGE ガイドラインに従って、処置後 24 時間以内に急性膵炎を発症しなかった患者のグループは、対照グループ (非 PEP グループ) として使用されます。

救急部門を通じて入院したアトランタ基準による急性膵炎のすべての患者は、臨床症状が始まってから 24 時間後に 30 ml のヘパリン添加末梢静脈血と尿サンプルを採取します (上腹部の痛みはしばしば背中に放散します)。 収集された血液サンプル 10 mL は、以下のパラメーターについて、臨床病院センターの検査医学部門で検査されます。 他の 20 mL の血液サンプルは、免疫学的分析が行われる医学部の生理学および免疫学科に送られます。 このグループの患者は、入院中、疾患の重症度を評価するためにさらに監視されます。 疾患の重症度は、アトランタ基準に従って評価されます。

方法と材料

実験室パラメータ

研究に含まれる各患者について、リエカ臨床病院センターの検査医学部門で血液および尿分析が行われます。 基本的な血液検査には以下が含まれます：総血球数 - 血液中に存在する赤血球、白血球、血小板の総数、ヘモグロビンとヘマトクリットの値。 血清の生化学的分析には、血清中のアミラーゼおよびリパーゼの値、ナトリウム、カリウム、グルコース、肝臓酵素（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（AST）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ALT）、ガマグルタミルトランスフェラーゼ（GGT）、アルカリホスファターゼ（ALP）が含まれます。 ）直接および間接ビリルビン、腎機能（血清尿素およびクレアチニン、推定糸球体濾過（eGFR））、C反応性タンパク質および動脈血の酸塩基状態。

免疫学的方法

研究に含まれる各患者について、血液サンプルの免疫学的分析（手順または症状の発症の24時間後）は、クロアチアのリエカにある医学部の生理学および免疫学科で行われます。

末梢血単核細胞の単離 20ミリリットルの末梢血をVacutainer（Becton Dickinson、Franklin Lakes、NY）で取得し、Lymphoprep（Nycomed Pharma AS、Oslo、Norway）に重ね、遠心分離します（600 gで20分間）。 遠心分離後、界面からの細胞を収集し、Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 培地 (オークランド、NZ) で 2 回洗浄し、さらなる実験手順にすぐに使用します。 細胞の生存率は > 95% でした。ヨウ化プロピジウム 0.5 mg/ml/106 細胞 (Sigma-Aldrich Chemie) およびフローサイトメーター (FACSCalibur、Becton Dickinson、San Jose、USA) で評価されます。

細胞表面の検出 末梢血単核細胞 (PBMC) は、フィコエリトリン (PE) - シアニン (Cy) 抗分化クラスター (CD) 3 モノクローナル抗体 (マウス抗体 (mAb) ）、免疫グロブリンG 1（IgG1））、PE結合抗分化クラスター（CD）56 mAb（マウスB159、IgG1）およびフルオレセインイソチオシアネート（FITC）結合抗ナチュラルキラーグループ2、メンバーD（NKG2D） mAb (5C6)。 FITC、PE、および PE-Cy 結合マウス アイソタイプ マッチ抗体を使用して、使用する抗体の各クラスのネガティブ コントロールを設定します。

染色された細胞サンプルは、FACSCalibur フローサイトメーター (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA) を使用したフローサイトメトリーによって分析されます。

サイトカイン インターロイキン (IL)-1 ベータ (β) および熱ショックタンパク質 (HSP) の検出 70, 27.

血漿中のヒト IL-1 β 濃度の定量には、Human IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) キットを使用します。

血漿中の熱ショックタンパク質 (HSP) 70 および 27 の定量には、HSP 70 高感度 ELISA キットおよび HSP 27 ELISA キットを使用します。

ペントラキシン３（ＰＴＸ３）およびプロカルシトニンの検出 血漿中のヒトペントラキシン３（ＰＴＸ）およびプロカルシトニン濃度の定量的決定のために、特異的ＥＬＩＳＡキットが使用される。