ERCP-induzierte und nicht-ERCP-induzierte akute Pankreatitis: Zwei unterschiedliche klinische und immunologische Entitäten?

PROTOKOLL:

Alle Patienten mit Indikation zur endoskopischen retrograden Cholangiopankreatikographie (ERCP) werden nach folgendem Protokoll auf die ERCP vorbereitet: Sie werden angewiesen, 4 bis 6 Stunden vor dem Eingriff nichts zu essen. Unmittelbar vor dem Eingriff werden ihnen Diclophenac-Natrium 100 mg Zäpfchen verabreicht. Eine Stunde vor dem Eingriff werden 10 ml Blut- und Urinprobe entnommen und in Laborräumen des Universitätsklinikums Rijeka auf folgende Parameter analysiert: Amylasewerte im Serum und Urin und Lipase im Serum, Leberenzymtests und Nierenfunktion. 4-6 Stunden nach der Durchführung der ERCP werden 10 ml Blut entnommen und in den Laborräumen des Universitätsklinikums Rijeka auf folgende Parameter analysiert: Amylasewerte im Serum und Urin und Lipase im Serum, Leberenzymtests und Nierenfunktion .

24 Stunden nach dem Eingriff werden allen Patienten 30 ml heparinisiertes peripheres venöses Blut und eine Urinprobe entnommen. 10 ml werden in der Abteilung für Labormedizin, Klinisches Krankenhauszentrum auf folgende Parameter untersucht: Werte von Amylase im Serum und Urin und Lipase im Serum, Leberenzymtests und Nierenfunktion. Die nach dem Eingriff entnommene Urinprobe wird zur Bewertung des Amylasespiegels verwendet. Weitere 20 ml Blutproben werden an die Abteilung für Physiologie und Immunologie der medizinischen Fakultät geschickt, wo eine immunologische Analyse durchgeführt wird. Alle Patienten, die sich einer ERCP unterzogen haben, werden in zwei Gruppen eingeteilt. Die erste Gruppe (PEP-Gruppe) wird aus Patienten gebildet, die nach ERCP eine akute Pankreatitis entwickelten. Nach klinischer und laborchemischer Bestätigung einer akuten Pankreatitis gemäß den Richtlinien der European Society of Gastrointestinal Endoscopy (ESGE) für Post-ERCP-Pankreatitis wird während des Krankenhausaufenthalts weiter überwacht, um den Schweregrad der Erkrankung zu beurteilen. Der Schweregrad der Erkrankung wird gemäß den Cotton-Kriterien für den Schweregrad einer Post-ERCP-Pankreatitis beurteilt. Eine Gruppe von Patienten, die sich einer ERCP unterzogen haben, aber innerhalb von 24 Stunden nach dem Eingriff keine akute Pankreatitis entwickelt haben, wird gemäß den ESGE-Richtlinien als Kontrollgruppe (Nicht-PEP-Gruppe) verwendet.

Allen Patienten mit akuter Pankreatitis nach Atlanta-Kriterien, die über die Notaufnahme aufgenommen werden, werden 24 Stunden nach Beginn der klinischen Symptome (Oberbauchschmerzen oft mit Ausstrahlung in den Rücken) 30 ml heparinisiertes peripheres venöses Blut und eine Urinprobe entnommen. 10 ml der gesammelten Blutproben werden in der Abteilung für Labormedizin, Klinisches Krankenhauszentrum auf folgende Parameter untersucht: Werte von Amylase im Serum und Urin und Lipase im Serum, Leberenzymtests und Nierenfunktion. Weitere 20 ml Blutproben werden an die Abteilung für Physiologie und Immunologie der medizinischen Fakultät geschickt, wo eine immunologische Analyse durchgeführt wird. Diese Patientengruppe wird während des Krankenhausaufenthalts weiter überwacht, um den Schweregrad der Erkrankung zu beurteilen. Der Schweregrad der Erkrankung wird gemäß den Atlanta-Kriterien beurteilt.

Methoden und Materialien

Laborparameter

Für jeden in die Studie eingeschlossenen Patienten werden Blut- und Urinanalysen in der Abteilung für Labormedizin des Klinischen Krankenhauszentrums Rijeka durchgeführt. Zu den grundlegenden hämatologischen Tests gehören: Gesamtblutbild – eine Zählung der Gesamtzahl der im Blut vorhandenen roten Blutkörperchen, weißen Blutkörperchen und Blutplättchen, Hämoglobin- und Hämatokritwerte. Die biochemische Analyse des Blutserums umfasst: Werte von Amylase und Lipase im Serum, Natrium, Kalium, Glukose, Leberenzyme (Aspartat-Aminotransferase (AST), Alanin-Aminotransferase (ALT), Gama-Glutamyl-Transferase (GGT), alkalische Phosphatase (ALP) ) direktes und indirektes Bilirubin, Nierenfunktion (Serumharnstoff und Kreatinin, geschätzte glomeruläre Filtration (eGFR)), C-reaktives Protein und Säure-Basen-Status des arteriellen Blutes.

Immunologische Methoden

Für jeden in die Studie eingeschlossenen Patienten wird eine immunologische Analyse von Blutproben (24 Stunden nach dem Eingriff oder dem Einsetzen der Symptome) in der Abteilung für Physiologie und Immunologie der Medizinischen Fakultät in Rijeka, Kroatien, durchgeführt.

Isolierung peripherer mononukleärer Blutzellen Zwanzig Milliliter peripheres Blut werden in Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY) aufgenommen, auf Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norwegen) überschichtet und zentrifugiert (20 min bei 600 g). Nach der Zentrifugation werden die Zellen von der Grenzfläche gesammelt und zweimal in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640-Medium (Auckland, NZ) gewaschen und sofort für das weitere experimentelle Verfahren verwendet. Die Lebensfähigkeit der Zellen war >95 % wird mit Propidiumiodid 0,5 mg/ml/106 Zellen (Sigma-Aldrich Chemie) und einem Durchflusszytometer (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA) bewertet

Nachweis der Zelloberfläche Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden für 30 min bei 40 Grad Celsius mit verschiedenen Kombinationen von Phycoerythrin (PE) - Cyanin (Cy) Anti-Cluster of Differentiation (CD) 3 monoklonaler Antikörper (Maus-Antikörper (mAb ), Immunglobulin G 1 (IgG1)), PE-konjugierter Anti-Cluster of Differentiation (CD)56 mAb (Maus B159, IgG1) und Fluorescein-Isothiocyanat (FITC)-konjugierter Anti-Natural-Killer-Gruppe 2, Mitglied D (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- und PE-Cy-konjugierte Maus-Isotyp-Match-Antikörper werden verwendet, um Negativkontrollen für jede verwendete Antikörperklasse festzulegen.

Angefärbte Zellproben werden durch Durchflusszytometrie unter Verwendung eines FACSCalibur-Durchflusszytometers (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA) analysiert.

Nachweis von Zytokin Interleukin (IL)-1 beta (β) und Hitzeschockprotein (HSP) 70, 27.

Zur quantitativen Bestimmung der Human-IL-1-β-Konzentrationen im Plasma wird das Human-IL-1-ELISA-Kit (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) verwendet.

Für die quantitative Bestimmung von Hitzeschockprotein (HSP) 70 und 27 in Plasma werden das HSP 70 High sensitive ELISA Kit und das HSP 27 ELISA Kit verwendet.

Nachweis von Pentraxin 3 (PTX 3) und Procalcitonin Zur quantitativen Bestimmung der Konzentrationen von humanem Pentraxin 3 (PTX) und Procalcitonin im Plasma wird ein spezifischer ELISA-Kit verwendet.