ERCP-indusoitu ja ei-ERCP-indusoitu akuutti haimatulehdus: kaksi erillistä kliinistä ja immunologista kokonaisuutta?

PROTOKOLLA:

Kaikki potilaat, joilla on indikaatio endoskooppiseen retrogradiseen kolangiopankreatografiaan (ERCP), valmistellaan ERCP:tä varten seuraavan protokollan mukaisesti: heitä neuvotaan olemaan syömättä 4–6 tuntia ennen toimenpidettä. Välittömästi ennen toimenpidettä heille annetaan Diclophenac Sodium 100 mg peräpuikkoja. Tuntia ennen toimenpidettä otetaan 10 ml verinäyte ja virtsanäyte ja analysoidaan Rijekan yliopistollisen sairaalakeskuksen laboratoriotiloissa seuraavat parametrit: amylaasiarvot seerumissa ja virtsa- ja lipaasiarvot seerumissa, maksaentsyymitestit ja munuaisten toiminta. 4-6 tuntia ERCP:n suorittamisen jälkeen otetaan 10 ml verinäyte ja analysoidaan Rijekan yliopistollisen sairaalan laboratoriotiloissa seuraavat parametrit: amylaasiarvot seerumissa ja virtsassa ja lipaasiarvot seerumissa, maksaentsyymitestit ja munuaisten toiminta. .

24 tuntia toimenpiteen jälkeen kaikille potilaille otetaan 30 ml heparinisoitua perifeeristä laskimoveri- ja virtsanäytettä. 10 ml:sta tutkitaan Kliinisen sairaalakeskuksen laboratoriolääketieteen osastolla seuraavat parametrit: amylaasiarvot seerumissa ja virtsassa sekä lipaasiarvot seerumissa, maksaentsyymitestit ja munuaisten toiminta. Toimenpiteen jälkeen kerättyä virtsanäytettä käytetään amylaasitasojen arvioimiseen. Muut 20 ml verinäytteitä lähetetään lääketieteellisen korkeakoulun fysiologian ja immunologian laitokselle, jossa suoritetaan immunologinen analyysi. Kaikki ERCP:n saaneet potilaat jaetaan kahteen ryhmään. Ensimmäinen ryhmä (PEP-ryhmä) koostuu potilaista, joille kehittyi akuutti haimatulehdus ERCP:n jälkeen. Kun akuutti haimatulehdus on kliinisesti ja laboratoriossa varmistettu European Society of Gastrointestinal Endoscopy (ESGE) -ohjeiden mukaisesti ERCP:n jälkeiselle haimatulehdukselle, häntä seurataan edelleen sairaalahoidon aikana taudin vakavuuden arvioimiseksi. Sairauden vakavuus arvioidaan ERCP:n jälkeisen haimatulehduksen vakavuuden Cotton-kriteerien mukaan. Potilasryhmää, joille tehtiin ERCP, mutta ei kehittynyt akuuttia haimatulehdusta 24 tunnin kuluessa toimenpiteestä ESGE:n ohjeiden mukaisesti, käytetään kontrolliryhmänä (ei-PEP-ryhmä).

Kaikille päivystyspoliklinikan kautta vastaanotetuille potilaille, joilla on Atlantan kriteerien mukaan akuutti haimatulehdus, otetaan 30 ml heparinisoitua perifeeristä laskimoveri- ja virtsanäytettä 24 tunnin kuluttua kliinisten oireiden alkamisesta (ylävatsakipu, joka säteilee usein selkään). 10 ml kerätyistä verinäytteistä tutkitaan Kliinisen sairaalakeskuksen laboratoriolääketieteen laitoksella seuraavat parametrit: amylaasiarvot seerumissa ja virtsassa ja lipaasiarvot seerumissa, maksaentsyymitestit ja munuaisten toiminta. Muut 20 ml verinäytteitä lähetetään lääketieteellisen korkeakoulun fysiologian ja immunologian laitokselle, jossa suoritetaan immunologinen analyysi. Tätä potilasryhmää seurataan edelleen sairaalahoidon aikana taudin vakavuuden arvioimiseksi. Taudin vakavuus arvioidaan Atlantan kriteerien mukaan.

MENETELMÄT JA MATERIAALIT

Laboratorioparametrit

Jokaiselle tutkimukseen osallistuvalle potilaalle tehdään veri- ja virtsaanalyysit Rijekan kliinisen sairaalakeskuksen laboratoriolääketieteen osastolla. Perushematologiset testit sisältävät: kokonaisverenkuvan - veressä olevien punasolujen, valkosolujen ja verihiutaleiden kokonaismäärän, hemoglobiinin ja hematokriittiarvon. Veriseerumin biokemiallinen analyysi sisältää: seerumin amylaasin ja lipaasin arvot, natriumin, kaliumin, glukoosin, maksaentsyymit (aspartaattiaminotransferaasi (AST), alaniiniaminotransferaasi (ALT), gama-glutamyylitransferaasi (GGT), alkalinen fosfataasi (ALP) ) suora ja epäsuora bilirubiini, munuaisten toiminta (seerumin urea ja kreatiniini, arvioitu glomerulussuodatus (eGFR)), C-reaktiivinen proteiini ja valtimoveren happo-emästila.

Immunologiset menetelmät

Jokaiselle tutkimukseen osallistuvalle potilaalle suoritetaan immunologinen verinäytteiden analyysi (24 tuntia toimenpiteen tai oireiden alkamisen jälkeen) Rijekan lääketieteellisen korkeakoulun fysiologian ja immunologian osastolla, Kroatiassa.

Ääreisveren mononukleaarisolujen eristäminen Kaksikymmentä millilitraa ääreisverta hankitaan Vacutainerissa (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), peitetään Lymphoprep-kalvolla (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norja) ja sentrifugoidaan (20 min 600 g). Sentrifugoinnin jälkeen solut rajapinnasta kerätään ja pestään kahdesti Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 -elatusaineessa (Auckland, NZ) ja käytetään välittömästi lisäkokeelliseen menettelyyn. Solujen elinkelpoisuus oli >95 %, arvioidaan propidiumjodidilla 0,5 mg/ml/106 solua (Sigma-Aldrich Chemie) ja virtaussytometrillä (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA)

Solun pinnan havaitseminen Perifeerisen veren mononukleaarisoluja (PBMC) värjätään 30 minuuttia 40 celsiusasteessa erilaisilla yhdistelmillä fykoerytriini (PE) - syaniini (Cy) anti-erilaistumisklusteri (CD) 3 monoklonaalinen vasta-aine (hiiren vasta-aine (mAb) ), Immunoglobuliini G 1 (IgG1)), PE-konjugoitu erilaistumisklusterin vastainen (CD)56 mAb (hiiri B159, IgG1) ja fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC) konjugoitu anti-luonnollinen tappaja ryhmä 2, jäsen D (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- ja PE-Cy-konjugoituja hiiren isotyyppivasta-aineita käytetään negatiivisten kontrollien asettamiseksi jokaiselle käytetylle vasta-aineluokalle.

Värjäytyneet solunäytteet analysoidaan virtaussytometrisesti käyttämällä FACSCalibur-virtaussytometriä (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA).

Sytokiinin Interleukiini (IL)-1 beetan (β) ja lämpösokkiproteiinin (HSP) 70, 27 havaitseminen.

Ihmisen IL-1 β -pitoisuuksien kvantitatiiviseen määrittämiseen plasmassa käytetään ihmisen IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) -sarjaa.

Plasman lämpösokkiproteiinin (HSP) 70 ja 27 kvantitatiiviseen määritykseen käytetään HSP 70 High Sensitivity ELISA Kit- ja HSP 27 ELISA -pakkauksia.

Pentraksiini 3:n (PTX 3) ja prokalsitoniinin havaitseminen Ihmisen pentraksiini 3:n (PTX) ja prokalsitoniinipitoisuuksien kvantitatiiviseen määritykseen käytetään plasmaspesifistä ELISA-pakkausta.