ERCP-indusert og ikke-ERCP-indusert akutt pankreatitt: to forskjellige kliniske og immunologiske enheter?

PROTOKOLL:

Alle pasienter med indikasjon for endoskopisk retrograd kolangiopankreatografi (ERCP) vil bli forberedt på ERCP etter følgende protokoll: de vil bli instruert om å ikke spise 4 til 6 timer før prosedyren. Umiddelbart før prosedyren vil de bli administrert med Diclophenac Sodium 100 mg suppositorier. En time før prosedyren vil 10 ml blodprøve og urinprøve bli tatt og analysert i laboratorielokaler innlemmet i Universitetssykehussenteret Rijeka for følgende parametere: verdier av amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtester og nyrefunksjon. 4-6 timer etter at ERCP er utført, vil 10 ml blodprøve bli tatt og analysert i laboratorielokaler innlemmet i University Hospital Center Rijeka for følgende parametere: verdier av amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtester og nyrefunksjon .

24 timer etter prosedyren vil alle pasienter bli tatt 30 ml heparinisert perifert venøst ​​blod og urinprøve. 10 mL vil bli undersøkt i Avdeling for laboratoriemedisin, Klinisk sykehussenter for følgende parametere: verdier av amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtester og nyrefunksjon. Urinprøve tatt etter prosedyren vil bli brukt til å evaluere amylasenivåer. Andre 20 mL blodprøver vil bli sendt til Institutt for fysiologi og immunologi, School of Medicine hvor immunologisk analyse vil bli utført. Alle pasienter som gjennomgikk ERCP vil bli delt inn i to grupper. Den første gruppen (PEP-gruppen) vil bli laget av pasienter som utviklet akutt pankreatitt etter ERCP. Ved klinisk bekreftelse og laboratoriebekreftelse av akutt pankreatitt i henhold til European Society of Gastrointestinal Endoscopy (ESGE) retningslinjer for post-ERCP pankreatitt, vil det bli overvåket ytterligere under sykehusinnleggelse for evaluering av alvorlighetsgraden av sykdommen. Alvorlighetsgraden av sykdommen vil bli vurdert i henhold til Cotton-kriteriene for alvorlighetsgraden av post-ERCP pankreatitt. Gruppe av pasienter som gjennomgikk ERCP, men som ikke utviklet akutt pankreatitt innen 24 timer etter prosedyren, vil i henhold til ESGE-retningslinjene bli brukt som kontrollgruppe (ikke-PEP-gruppe).

Alle pasienter med akutt pankreatitt i henhold til Atlanta-kriteriene innlagt gjennom akuttmottaket vil bli tatt 30 ml heparinisert perifert venøst ​​blod og urinprøve 24 timer etter at de kliniske symptomene har startet (smerter i øvre del av magen stråler ofte gjennom til ryggen). 10 mL innsamlede blodprøver vil bli undersøkt ved Institutt for laboratoriemedisin, Klinisk sykehussenter for følgende parametere: verdier av amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymprøver og nyrefunksjon. Andre 20 mL blodprøver vil bli sendt til Institutt for fysiologi og immunologi, School of Medicine hvor immunologisk analyse vil bli utført. Denne pasientgruppen vil bli overvåket videre under sykehusinnleggelse for å vurdere alvorlighetsgraden av sykdommen. Alvorlighetsgraden av sykdommen vil bli vurdert i henhold til Atlanta-kriteriene.

METODER OG MATERIALER

Laboratorieparametere

For hver pasient som er inkludert i studien vil blod- og urinanalyse bli utført ved Institutt for laboratoriemedisin, Klinisk sykehussenter Rijeka. Grunnleggende hematologiske tester vil inkludere: total blodtelling - en telling av det totale antallet røde blodlegemer, hvite blodceller og blodplater tilstede i blod, verdier av hemoglobin og hematokrit. Biokjemisk analyse av blodserum vil inkludere: verdier av amylase og lipase i serum, natrium, kalium, glukose, leverenzymer (aspartataminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALT), Gama-glutamyltransferase (GGT), alkalisk fosfatase (ALP) ) direkte og indirekte bilirubin, nyrefunksjon (serumurea og kreatinin, estimert glomerulær filtrasjon (eGFR)), C-reaktivt protein og syre-basestatus i arterielt blod.

Immunologiske metoder

For hver pasient som er inkludert i studien, vil immunologisk analyse av blodprøver (24 timer etter prosedyren eller symptomdebut) utføres ved Institutt for fysiologi og immunologi, School of Medicine i Rijeka, Kroatia.

Isolering av mononukleære celler fra perifert blod Tjue milliliter perifert blod vil bli anskaffet i Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), lagt på Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norge) og sentrifugert (20 min ved 600 g). Etter sentrifugeringen vil cellene fra grensesnittet samles og vaskes to ganger i Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium (Auckland, NZ) og brukes umiddelbart for videre eksperimentell prosedyre. Levedyktigheten til cellene var >95 % vil bli vurdert med propidiumjodid 0,5 mg/ml/106 celler (Sigma-Aldrich Chemie) og et flowcytometer (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA)

Påvisning av celleoverflate Mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) vil bli farget i 30 minutter ved 40 grader Celsius med forskjellige kombinasjoner av Phycoerythrin (PE) - Cyanine (Cy) anti-cluster of differentiation (CD) 3 monoklonalt antistoff (muse-antistoff (mAb) ), Immunoglobulin G 1 (IgG1)), PE-konjugert anti-cluster of differentiation (CD)56 mAb (mus B159, IgG1) og fluorescein isothiocyanat (FITC)-konjugert anti-naturlig drepende gruppe 2, medlem D (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- og PE-Cy-konjugerte muse-isotype-matchantistoffer vil bli brukt til å sette negative kontroller for hver klasse antistoff som brukes.

Fargede celleprøver vil bli analysert med flowcytometri ved bruk av FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA).

Påvisning av cytokin Interleukin (IL)-1 beta (β) og varmesjokkprotein (HSP) 70, 27.

For kvantitativ bestemmelse av humane IL-1 β-konsentrasjoner i plasma, vil Human IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Kit bli brukt.

For kvantitativ bestemmelse av varmesjokkprotein (HSP) 70 og 27 i plasma, vil HSP 70 høysensitiv ELISA-sett og HSP 27 ELISA-sett bli brukt.

Påvisning av pentraxin 3 (PTX 3) og prokalsitonin For kvantitativ bestemmelse av human pentraxin 3 (PTX) og prokalsitonin konsentrasjoner i plasmaspesifikke ELISA-sett vil bli brukt.