ERCP 유도성 및 비ERCP 비유도성 급성 췌장염: 두 가지 뚜렷한 임상 및 면역학적 실체?

규약:

내시경 역행 담췌관조영술(ERCP)에 적응증이 있는 모든 환자는 다음 프로토콜에 따라 ERCP를 준비합니다: 시술 4~6시간 전에는 음식을 먹지 않도록 지시받습니다. 절차 직전에 Diclophenac Sodium 100mg 좌약을 투여합니다. 절차 1시간 전에 혈액 샘플과 소변 샘플 10mL를 채취하여 리예카 대학 병원 센터에 통합된 실험실 구내에서 혈청 및 소변의 아밀라아제 값과 혈청의 리파아제 값, 간 효소 검사 및 신장 기능에 대해 분석합니다. ERCP 수행 4~6시간 후 혈액 샘플 10mL를 채취하여 Rijeka 대학 병원 센터에 통합된 실험실 구내에서 다음 매개변수에 대해 분석합니다: 혈청 및 소변의 아밀라아제 및 혈청의 리파아제 값, 간 효소 검사 및 신장 기능 .

시술 24시간 후 모든 환자는 30ml의 헤파린 처리된 말초 정맥혈과 소변 샘플을 채취합니다. 10mL는 다음 매개변수에 대해 임상 병원 센터의 진단검사의학과에서 검사됩니다: 혈청 및 소변의 아밀라아제 및 혈청의 리파아제 값, 간 효소 검사 및 신장 기능. 절차 후 수집된 소변 샘플은 아밀라아제 수치를 평가하는 데 사용됩니다. 나머지 20mL의 혈액 샘플은 면역학적 분석이 수행될 의과대학 생리학 및 면역학부로 보내질 것입니다. ERCP를 받은 모든 환자는 두 그룹으로 나뉩니다. 첫 번째 그룹(PEP 그룹)은 ERCP 후 급성 췌장염이 발생한 환자로 구성됩니다. ERCP 후 췌장염에 대한 ESGE(European Society of Gastrointestinal Endoscopy) 가이드라인에 따라 급성 췌장염의 임상 및 검사실 확인 시 질병의 중증도 평가를 위해 입원 중에 추가로 모니터링됩니다. 질병의 중증도는 ERCP 후 췌장염의 중증도에 대한 코튼 기준에 따라 평가됩니다. ESGE 가이드라인에 따라 ERCP를 시행하였으나 시술 후 24시간 이내에 급성 췌장염이 발생하지 않은 환자 그룹을 대조군(non-PEP 그룹)으로 사용합니다.

응급실을 통해 입원한 애틀랜타 기준에 따른 모든 급성 췌장염 환자는 임상 증상이 시작된 후 24시간에 30ml의 헤파린 처리된 말초 정맥 혈액 및 소변 샘플을 채취합니다(상복부 통증은 종종 등으로 발산됨). 수집된 혈액 샘플 10mL는 임상 병원 센터 진단검사의학과에서 혈청 및 소변의 아밀라아제 및 혈청의 리파아제 값, 간 효소 검사 및 신장 기능에 대해 검사됩니다. 나머지 20mL의 혈액 샘플은 면역학적 분석이 수행될 의과대학 생리학 및 면역학부로 보내질 것입니다. 이 환자 그룹은 질병의 중증도를 평가하기 위해 입원 중에 추가로 모니터링됩니다. 질병의 중증도는 애틀랜타 기준에 따라 평가됩니다.

방법 및 재료

실험실 매개변수

연구에 포함된 각 환자에 대해 혈액 및 소변 분석은 Rijeka 임상 병원 센터의 진단 검사 의학과에서 수행됩니다. 기본 혈액 검사에는 다음이 포함됩니다. 총 혈구 수 - 혈액에 존재하는 적혈구, 백혈구 및 혈소판의 총 수, 헤모글로빈 및 헤마토크리트 값. 혈청의 생화학적 분석에는 다음이 포함됩니다. ) 직접 및 간접 빌리루빈, 신장 기능(혈청 요소 및 크레아티닌, 추정 사구체 여과(eGFR)), 동맥혈의 C-반응성 단백질 및 산-염기 상태.

면역학적 방법

연구에 포함된 각 환자에 대해 혈액 샘플의 면역학적 분석(절차 후 24시간 또는 증상 발생 후)은 크로아티아 리예카의 의과대학 생리학 및 면역학과에서 수행될 것입니다.

말초 혈액 단핵 세포의 분리 말초 혈액 20밀리리터를 Vacutainer(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY)에서 획득하고 Lymphoprep(Nycomed Pharma AS, 노르웨이 오슬로)에 겹쳐서 원심분리합니다(600g에서 20분). 원심분리 후, 계면으로부터 세포를 수집하고 RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 1640 배지(뉴질랜드주 오클랜드)에서 2회 세척하고 추가 실험 절차에 즉시 사용한다. 세포의 생존율은 >95%였으며 요오드화 프로피듐 0.5 mg/ml/106 세포(Sigma-Aldrich Chemie) 및 유세포 분석기(FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA)로 평가할 것입니다.

세포 표면의 검출 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)는 피코에리트린(PE) - 시아닌(Cy) 분화 방지 클러스터(CD) 3 단클론 항체(마우스 항체(mAb) ), 면역글로불린 G 1(IgG1)), PE-컨쥬게이션된 항-분화 클러스터(CD)56 mAb(마우스 B159, IgG1) 및 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC)-컨쥬게이션된 항-자연-킬러 그룹 2, 멤버 D(NKG2D) mAb(5C6). FITC-, PE- 및 PE-Cy 접합 마우스 이소형 일치 항체는 사용된 항체의 각 부류에 대한 음성 대조군을 설정하는 데 사용됩니다.

염색된 세포 샘플은 FACSCalibur 유동 세포 계측기(Becton Dickinson & Co, San Jose, USA)를 사용하여 유동 세포 계측법으로 분석됩니다.

사이토카인 인터루킨(IL)-1 베타(β) 및 열 충격 단백질(HSP) 70, 27의 검출.

혈장 내 human IL-1β 농도 정량을 위해서는 Human IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Kit를 사용합니다.

혈장 내 HSP(Heat Shock Protein) 70 및 27의 정량 측정을 위해 HSP 70 High Sensitivity ELISA Kit 및 HSP 27 ELISA Kit를 사용합니다.

펜트락신 3(PTX 3) 및 프로칼시토닌 검출 인간 펜트락신 3(PTX) 및 프로칼시토닌 농도를 정량적으로 측정하기 위해 혈장 특정 ELISA 키트를 사용합니다.