ERCP-geïnduceerde en niet-ERCP-geïnduceerde acute pancreatitis: twee verschillende klinische en immunologische entiteiten?

PROTOCOL:

Alle patiënten met een indicatie voor endoscopische retrograde cholangiopancreatografie (ERCP) worden voorbereid op ERCP volgens het volgende protocol: ze krijgen de instructie om 4 tot 6 uur voor de ingreep niet te eten. Direct voor de ingreep krijgen ze Diclophenac Natrium 100 mg zetpillen toegediend. Een uur voor de procedure wordt 10 ml bloedmonster en urinemonster genomen en geanalyseerd in laboratoriumruimten in het Universitair Ziekenhuiscentrum Rijeka voor de volgende parameters: waarden van amylase in serum en urine en lipase in serum, leverenzymtesten en nierfunctie. 4-6 uur nadat ERCP is uitgevoerd, wordt 10 ml bloedmonster genomen en geanalyseerd in laboratoriumruimten in het Universitair Ziekenhuiscentrum Rijeka voor de volgende parameters: waarden van amylase in serum en urine en lipase in serum, leverenzymtesten en nierfunctie .

24 uur na de procedure wordt bij alle patiënten 30 ml gehepariniseerd perifeer veneus bloed en urine afgenomen. 10 ml zal worden onderzocht op de afdeling Laboratoriumgeneeskunde, Klinisch Ziekenhuiscentrum voor de volgende parameters: waarden van amylase in serum en urine en lipase in serum, leverenzymtesten en nierfunctie. Urinemonster verzameld na de procedure zal worden gebruikt om amylaseniveaus te evalueren. Andere 20 ml bloedmonsters worden naar de afdeling Fysiologie en Immunologie, School of Medicine gestuurd, waar immunologische analyse zal worden uitgevoerd. Alle patiënten die ERCP hebben ondergaan, worden in twee groepen verdeeld. De eerste groep (PEP-groep) bestaat uit patiënten die acute pancreatitis ontwikkelden na ERCP. Na klinische en laboratoriumbevestiging van acute pancreatitis volgens de richtlijnen van de European Society of Gastrointestinal Endoscopie (ESGE) voor post-ERCP-pancreatitis, zal tijdens ziekenhuisopname verder worden gecontroleerd voor evaluatie van de ernst van de ziekte. De ernst van de ziekte zal worden beoordeeld volgens de Cotton-criteria voor de ernst van pancreatitis na ERCP. Groep patiënten die ERCP ondergingen maar geen acute pancreatitis ontwikkelden binnen 24 uur na de procedure, volgens ESGE-richtlijnen, zal worden gebruikt als controlegroep (niet-PEP-groep).

Bij alle patiënten met acute pancreatitis volgens de criteria van Atlanta die via de spoedeisende hulp zijn opgenomen, wordt 24 uur nadat de klinische symptomen zijn begonnen (bovenbuikpijn die vaak uitstraalt naar de rug) 30 ml gehepariniseerd perifeer veneus bloed- en urinemonster afgenomen. 10 ml van de verzamelde bloedmonsters zal worden onderzocht op de afdeling Laboratoriumgeneeskunde, Klinisch Ziekenhuiscentrum voor de volgende parameters: waarden van amylase in serum en urine en lipase in serum, leverenzymtesten en nierfunctie. Andere 20 ml bloedmonsters worden naar de afdeling Fysiologie en Immunologie, School of Medicine gestuurd, waar immunologische analyse zal worden uitgevoerd. Deze groep patiënten zal tijdens de ziekenhuisopname verder worden gecontroleerd om de ernst van de ziekte te beoordelen. De ernst van de ziekte zal worden beoordeeld volgens de criteria van Atlanta.

METHODEN EN MATERIALEN

Laboratorium parameters

Voor elke patiënt die deelneemt aan het onderzoek, zullen bloed- en urineanalyses worden uitgevoerd op de afdeling Laboratoriumgeneeskunde, Klinisch Ziekenhuiscentrum Rijeka. Basis hematologische tests omvatten: totaal aantal bloedcellen - een telling van het totale aantal rode bloedcellen, witte bloedcellen en bloedplaatjes in het bloed, waarden van hemoglobine en hematocriet. Biochemische analyse van bloedserum omvat: waarden van amylase en lipase in serum, natrium, kalium, glucose, leverenzymen (aspartaataminotransferase (AST), alanineaminotransferase (ALT), gama-glutamyltransferase (GGT), alkalische fosfatase (ALP) ) directe en indirecte bilirubine, nierfunctie (serumureum en creatinine, geschatte glomerulaire filtratie (eGFR)), C-reactief proteïne en zuur-basestatus van arterieel bloed.

Immunologische methoden

Voor elke patiënt die deelneemt aan de studie zal immunologische analyse van bloedmonsters (24 uur na de procedure of het begin van de symptomen) worden uitgevoerd in de afdeling Fysiologie en Immunologie, School of Medicine in Rijeka, Kroatië.

Isolatie van mononucleaire cellen uit perifeer bloed Twintig milliliter perifeer bloed zal worden verkregen in Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), over Lymphoprep gelegd (Nycomed Pharma AS, Oslo, Noorwegen) en gecentrifugeerd (20 min bij 600 g). Na het centrifugeren worden de cellen van het grensvlak verzameld en tweemaal gewassen in Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium (Auckland, NZ) en onmiddellijk gebruikt voor verdere experimentele procedure. De levensvatbaarheid van de cellen was >95% zal worden beoordeeld met propidiumjodide 0,5 mg/ml/106 cellen (Sigma-Aldrich Chemie) en een flowcytometer (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, VS).

Detectie van celoppervlak Mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC) worden gedurende 30 minuten bij 40 graden Celsius gekleurd met verschillende combinaties van fyco-erythrine (PE) - cyanine (Cy) anti-cluster van differentiatie (CD) 3 monoklonaal antilichaam (muis-antilichaam (mAb ), Immunoglobuline G 1 (IgG1)), PE-geconjugeerde anti-cluster van differentiatie (CD) 56 mAb (muis B159, IgG1) en fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC)-geconjugeerde anti-natural-killer groep 2, lid D (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- en PE-Cy-geconjugeerde muis-isotype-match-antilichamen zullen worden gebruikt om negatieve controles in te stellen voor elke gebruikte antilichaamklasse.

Gekleurde celmonsters zullen worden geanalyseerd door middel van flowcytometrie met behulp van de FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson & Co, San Jose, VS).

Detectie van cytokine Interleukine (IL)-1 bèta (β) en hitteschokeiwit (HSP) 70, 27.

Voor de kwantitatieve bepaling van humane IL-1 β-concentraties in plasma zal de Human IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Kit worden gebruikt.

Voor de kwantitatieve bepaling van heat shock protein (HSP) 70 en 27 in plasma worden HSP 70 High Sensitive ELISA Kit en HSP 27 ELISA Kit gebruikt.

Detectie van pentraxine 3 (PTX 3) en procalcitonine Voor de kwantitatieve bepaling van humane pentraxine 3 (PTX) en procalcitonineconcentraties in plasma-specifieke ELISA Kit zal worden gebruikt.