ERCP 诱发和非 ERCP 诱发的急性胰腺炎：两个不同的临床和免疫实体？

协议：

所有有内镜逆行胰胆管造影术 (ERCP) 指征的患者都将按照以下方案准备 ERCP：他们将被告知在手术前 4 至 6 小时不要进食。 在手术前，他们将立即服用双氯芬酸钠 100 毫克栓剂。 手术前一小时，将在里耶卡大学医院中心的实验室采集 10 mL 血样和尿样并分析以下参数：血清和尿液中的淀粉酶值以及血清中的脂肪酶值、肝酶测试和肾功能。 ERCP 执行后 4-6 小时，将采集 10 mL 血样并在里耶卡大学医院中心合并的实验室分析以下参数：血清和尿液中的淀粉酶值以及血清中的脂肪酶值、肝酶测试和肾功能.

手术后 24 小时，将对所有患者采集 30 毫升肝素化外周静脉血和尿液样本。 将在临床医院中心检验医学部检查 10 mL 的以下参数：血清和尿液中的淀粉酶值以及血清中的脂肪酶值、肝酶测试和肾功能。 手术后收集的尿液样本将用于评估淀粉酶水平。 另取20mL血样送医学院生理免疫学系进行免疫学分析。 所有接受 ERCP 的患者将分为两组。 第一组（PEP 组）将由 ERCP 后发生急性胰腺炎的患者组成。 根据欧洲胃肠内窥镜学会（ESGE）关于 ERCP 后胰腺炎的指南，在临床和实验室确认急性胰腺炎后，将在住院期间进一步监测以评估疾病的严重程度。 疾病的严重程度将根据 ERCP 后胰腺炎严重程度的 Cotton 标准进行评估。 根据ESGE指南，将接受ERCP但术后24小时内未发生急性胰腺炎的患者组作为对照组（非PEP组）。

所有经急诊科收治的符合亚特兰大标准的急性胰腺炎患者均在出现临床症状（上腹痛常放射至背部）后24小时抽取30ml肝素化外周静脉血和尿液样本。 采集的 10 mL 血液样本将在临床医院中心检验医学部检查以下参数：血清和尿液中的淀粉酶值以及血清中的脂肪酶值、肝酶测试和肾功能。 另取20mL血样送医学院生理免疫学系进行免疫学分析。 这组患者将在住院期间接受进一步监测，以评估疾病的严重程度。 将根据亚特兰大标准评估疾病的严重程度。

方法和材料

实验室参数

对于参与研究的每位患者，血液和尿液分析将在里耶卡临床医院中心的实验室医学部进行。 基本血液学测试将包括：全血细胞计数——血液中红细胞、白细胞和血小板的总数，血红蛋白和血细胞比容的值。 血清生化分析将包括：血清中淀粉酶和脂肪酶、钠、钾、葡萄糖、肝酶（天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、γ-谷氨酰转移酶 (GGT)、碱性磷酸酶 (ALP)）的值) 直接和间接胆红素、肾功能（血清尿素和肌酐、估计肾小球滤过率 (eGFR)）、C 反应蛋白和动脉血酸碱状态。

免疫学方法

对于研究中包括的每位患者，血液样本的免疫学分析（手术后或症状出现后 24 小时）将在克罗地亚里耶卡医学院生理学和免疫学系进行。

外周血单核细胞的分离 将在 Vacutainer（Becton Dickinson，Franklin Lakes，NY）中采集 20 毫升外周血，覆盖在 Lymphoprep（Nycomed Pharma AS，奥斯陆，挪威）上并离心（600 g 20 分钟）。 离心后，将收集来自界面的细胞并在 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 培养基（新西兰奥克兰）中洗涤两次，并立即用于进一步的实验程序。 细胞的存活率 >95% 将使用碘化丙锭 0.5 mg/ml/106 个细胞（Sigma-Aldrich Chemie）和流式细胞仪（FACSCalibur，Becton Dickinson，San Jose，USA）进行评估

细胞表面检测外周血单个核细胞（PBMC）将在40摄氏度下用不同组合的藻红蛋白（PE）-花青素（Cy）抗分化簇（CD）3单克隆抗体（小鼠抗体（mAb）染色30分钟)、免疫球蛋白 G 1 (IgG1))、PE 偶联的抗分化簇 (CD)56 mAb（小鼠 B159、IgG1）和异硫氰酸荧光素 (FITC) 偶联的第 2 组抗自然杀伤因子 D (NKG2D)单克隆抗体 (5C6)。 FITC-、PE-和 PE-Cy 缀合的小鼠同种型匹配抗体将用于为所用的每一类抗体设置阴性对照。

染色的细胞样品将使用 FACSCalibur 流式细胞仪（Becton Dickinson & Co, San Jose, USA）通过流式细胞术进行分析。

检测细胞因子白细胞介素 (IL)-1 β (β) 和热休克蛋白 (HSP) 70, 27。

对于血浆中人 IL-1 β 浓度的定量测定，将使用人 IL-1 ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒。

对于血浆中热休克蛋白 (HSP) 70 和 27 的定量测定，将使用 HSP 70 高灵敏度 ELISA 试剂盒和 HSP 27 ELISA 试剂盒。

五聚蛋白 3 (PTX 3) 和降钙素原的检测 为了定量测定血浆中人五聚蛋白 3 (PTX) 和降钙素原的浓度，将使用特异性 ELISA 试剂盒。