Pancreatitis aguda inducida por CPRE y no inducida por CPRE: ¿dos entidades clínicas e inmunológicas distintas?

PROTOCOLO:

Todos los pacientes con indicación de colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (CPRE) serán preparados para la CPRE con el siguiente protocolo: se les indicará que no coman de 4 a 6 horas antes del procedimiento. Inmediatamente antes del procedimiento se administrarán con ovulos de Diclofenaco Sódico 100 mg. Una hora antes del procedimiento se tomarán 10 ml de muestra de sangre y muestra de orina y se analizarán en un laboratorio incorporado en el University Hospital Center Rijeka para los siguientes parámetros: valores de amilasa en suero y orina y lipasa en suero, pruebas de enzimas hepáticas y función renal. De 4 a 6 horas después de realizar la CPRE, se tomarán 10 ml de muestra de sangre y se analizarán en un laboratorio incorporado en el University Hospital Center Rijeka para los siguientes parámetros: valores de amilasa en suero y orina y lipasa en suero, pruebas de enzimas hepáticas y función renal. .

24 horas después del procedimiento a todos los pacientes se les tomará 30 ml de sangre venosa periférica heparinizada y muestra de orina. Se examinarán 10 mL en el Departamento de Medicina de Laboratorio, Centro Clínico Hospitalario para los siguientes parámetros: valores de amilasa en suero y orina y lipasa en suero, pruebas de enzimas hepáticas y función renal. La muestra de orina recolectada después del procedimiento se utilizará para evaluar los niveles de amilasa. Otros 20 ml de muestras de sangre se enviarán al Departamento de Fisiología e Inmunología de la Facultad de Medicina, donde se realizarán análisis inmunológicos. Todos los pacientes que se sometieron a una CPRE se dividirán en dos grupos. El primer grupo (grupo PEP) estará compuesto por pacientes que desarrollaron pancreatitis aguda después de la CPRE. Tras la confirmación clínica y de laboratorio de pancreatitis aguda de acuerdo con las directrices de la Sociedad Europea de Endoscopia Gastrointestinal (ESGE) para la pancreatitis posterior a la CPRE, se realizará un seguimiento adicional durante la hospitalización para evaluar la gravedad de la enfermedad. La gravedad de la enfermedad se evaluará de acuerdo con los criterios de Cotton para la gravedad de la pancreatitis post-CPRE. Se utilizará como grupo control (grupo no PEP) el grupo de pacientes que se sometieron a CPRE pero que no desarrollaron pancreatitis aguda dentro de las 24 horas posteriores al procedimiento, de acuerdo con las pautas de la ESGE.

A todos los pacientes con pancreatitis aguda según criterios de Atlanta ingresados ​​por Urgencias se les tomarán 30 ml de sangre venosa periférica heparinizada y muestra de orina a las 24 horas de iniciado el cuadro clínico (dolor abdominal alto frecuentemente irradiado a la espalda). Se examinarán 10 ml de muestras de sangre recolectadas en el Departamento de Medicina de Laboratorio, Centro Clínico Hospitalario para los siguientes parámetros: valores de amilasa en suero y orina y lipasa en suero, pruebas de enzimas hepáticas y función renal. Otros 20 ml de muestras de sangre se enviarán al Departamento de Fisiología e Inmunología de la Facultad de Medicina, donde se realizarán análisis inmunológicos. Este grupo de pacientes será monitoreado adicionalmente durante la hospitalización para evaluar la gravedad de la enfermedad. La gravedad de la enfermedad se evaluará según los criterios de Atlanta.

MÉTODOS Y MATERIALES

Parámetros de laboratorio

Para cada paciente incluido en el estudio, se realizarán análisis de sangre y orina en el Departamento de Medicina de Laboratorio, Clinical Hospital Center Rijeka. Las pruebas básicas de hematología incluirán: hemograma total: un recuento del número total de glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas presentes en la sangre, valores de hemoglobina y hematocrito. El análisis bioquímico del suero sanguíneo incluirá: valores de amilasa y lipasa en suero, sodio, potasio, glucosa, enzimas hepáticas (aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), Gama-glutamil transferasa (GGT), fosfatasa alcalina (ALP) ) bilirrubina directa e indirecta, función renal (urea y creatinina séricas, filtración glomerular estimada (TFGe)), proteína C reactiva y estado ácido-base de la sangre arterial.

Métodos inmunológicos

Para cada paciente incluido en el estudio, se realizará un análisis inmunológico de las muestras de sangre (24 horas después del procedimiento o del inicio de los síntomas) en el Departamento de Fisiología e Inmunología de la Facultad de Medicina de Rijeka, Croacia.

Aislamiento de células mononucleares de sangre periférica Se adquirirán veinte mililitros de sangre periférica en Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), se superpondrán en Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Noruega) y se centrifugarán (20 min a 600 g). Después de la centrifugación, las células de la interfaz se recolectarán y lavarán dos veces en medio Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 (Auckland, NZ) y se usarán inmediatamente para un procedimiento experimental adicional. La viabilidad de las células fue >95 % y se evaluará con yoduro de propidio 0,5 mg/ml/106 células (Sigma-Aldrich Chemie) y un citómetro de flujo (FACSCalibur, Becton Dickinson, San José, EE. UU.)

Detección de la superficie celular Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se tiñerán durante 30 min a 40 grados Celsius con diferentes combinaciones de ficoeritrina (PE) - cianina (Cy) anti-grupo de diferenciación (CD) 3 anticuerpos monoclonales (anticuerpo de ratón (mAb ), inmunoglobulina G 1 (IgG1)), antigrupo de diferenciación (CD)56 mAb conjugado con PE (ratón B159, IgG1) y grupo antiasesino natural 2 conjugado con isotiocianato de fluoresceína (FITC), miembro D (NKG2D) mAb (5C6). Se utilizarán anticuerpos coincidentes de isotipos de ratón conjugados con FITC, PE y PE-Cy para establecer controles negativos para cada clase de anticuerpo utilizado.

Las muestras de células teñidas se analizarán mediante citometría de flujo utilizando el citómetro de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson & Co, San José, EE. UU.).

Detección de citocina Interleucina (IL)-1 beta (β) y proteína de choque térmico (HSP) 70, 27.

Para la determinación cuantitativa de las concentraciones de IL-1 β humana en plasma, se utilizará el kit ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) de IL-1 humana.

Para la determinación cuantitativa de la proteína de choque térmico (HSP) 70 y 27 en plasma, se utilizará el kit ELISA de alta sensibilidad HSP 70 y el kit ELISA HSP 27.

Detección de pentraxina 3 (PTX 3) y procalcitonina Para la determinación cuantitativa de las concentraciones de pentraxina 3 (PTX) humana y procalcitonina en plasma se utilizará un kit ELISA específico.