Pancréatite aiguë induite et non induite par la CPRE : deux entités cliniques et immunologiques distinctes ?

PROTOCOLE:

Tous les patients ayant une indication de cholangiopancréatographie rétrograde endoscopique (CPRE) seront préparés à la CPRE selon le protocole suivant : ils recevront l'instruction de ne pas manger 4 à 6 heures avant l'intervention. Immédiatement avant la procédure, ils seront administrés avec des suppositoires de diclophénac sodique 100 mg. Une heure avant la procédure, 10 ml d'échantillon de sang et d'échantillon d'urine seront prélevés et analysés dans des locaux de laboratoire intégrés au centre hospitalier universitaire de Rijeka pour les paramètres suivants : valeurs d'amylase dans le sérum et l'urine et de lipase dans le sérum, tests d'enzymes hépatiques et fonction rénale. 4 à 6 heures après la réalisation de la CPRE, 10 ml d'échantillon de sang seront prélevés et analysés dans des locaux de laboratoire intégrés au centre hospitalier universitaire de Rijeka pour les paramètres suivants : valeurs d'amylase dans le sérum et l'urine et de lipase dans le sérum, tests d'enzymes hépatiques et fonction rénale. .

24 heures après la procédure, tous les patients recevront 30 ml de sang veineux périphérique hépariné et un échantillon d'urine. 10 mL seront examinés au Département de médecine de laboratoire du Centre hospitalier clinique pour les paramètres suivants : valeurs d'amylase dans le sérum et l'urine et de lipase dans le sérum, tests d'enzymes hépatiques et fonction rénale. L'échantillon d'urine recueilli après la procédure sera utilisé pour évaluer les niveaux d'amylase. D'autres 20 ml d'échantillons de sang seront envoyés au Département de physiologie et d'immunologie de l'École de médecine où une analyse immunologique sera effectuée. Tous les patients qui ont subi une CPRE seront divisés en deux groupes. Le premier groupe (groupe PEP) sera composé de patients ayant développé une pancréatite aiguë suite à une CPRE. Après confirmation clinique et en laboratoire de la pancréatite aiguë conformément aux directives de la Société européenne d'endoscopie gastro-intestinale (ESGE) pour la pancréatite post-ERCP, une surveillance supplémentaire sera effectuée pendant l'hospitalisation pour évaluer la gravité de la maladie. La gravité de la maladie sera évaluée selon les critères de Cotton pour la gravité de la pancréatite post-CPRE. Le groupe de patients qui ont subi une CPRE mais qui n'ont pas développé de pancréatite aiguë dans les 24 heures suivant la procédure, conformément aux directives de l'ESGE, sera utilisé comme groupe témoin (groupe non PEP).

Tous les patients atteints de pancréatite aiguë selon les critères d'Atlanta admis par le service des urgences recevront 30 ml de sang veineux périphérique hépariné et un échantillon d'urine 24 heures après le début des symptômes cliniques (douleur abdominale supérieure irradiant souvent vers le dos). 10 mL d'échantillons sanguins prélevés seront examinés au Département de médecine de laboratoire du Centre hospitalier clinique pour les paramètres suivants : valeurs d'amylase dans le sérum et l'urine et de lipase dans le sérum, tests d'enzymes hépatiques et fonction rénale. D'autres 20 ml d'échantillons de sang seront envoyés au Département de physiologie et d'immunologie de l'École de médecine où une analyse immunologique sera effectuée. Ce groupe de patients fera l'objet d'un suivi supplémentaire pendant l'hospitalisation pour évaluer la gravité de la maladie. La gravité de la maladie sera évaluée selon les critères d'Atlanta.

MÉTHODES ET MATÉRIAUX

Paramètres de laboratoire

Pour chaque patient inclus dans l'étude, une analyse de sang et d'urine sera effectuée dans le département de médecine de laboratoire du centre hospitalier clinique de Rijeka. Les tests d'hématologie de base comprendront : numération globulaire totale - un décompte du nombre total de globules rouges, de globules blancs et de plaquettes présents dans le sang, les valeurs d'hémoglobine et d'hématocrite. L'analyse biochimique du sérum sanguin comprendra : les valeurs d'amylase et de lipase dans le sérum, le sodium, le potassium, le glucose, les enzymes hépatiques (aspartate aminotransférase (AST), alanine aminotransférase (ALT), Gama-glutamyl transférase (GGT), phosphatase alcaline (ALP) ) bilirubine directe et indirecte, fonction rénale (urée et créatinine sériques, filtration glomérulaire estimée (eGFR)), protéine C-réactive et état acido-basique du sang artériel.

Méthodes immunologiques

Pour chaque patient inclus dans l'étude, une analyse immunologique des échantillons de sang (24 heures après la procédure ou l'apparition des symptômes) sera effectuée au Département de physiologie et d'immunologie de l'École de médecine de Rijeka, en Croatie.

Isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique Vingt millilitres de sang périphérique seront prélevés dans Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), superposés sur Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norvège) et centrifugés (20 min à 600 g). Après la centrifugation, les cellules de l'interface seront collectées et lavées deux fois dans le milieu Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 (Auckland, NZ) et utilisées immédiatement pour une procédure expérimentale ultérieure. La viabilité des cellules était> 95% sera évaluée avec de l'iodure de propidium 0,5 mg / ml / 106 cellules (Sigma-Aldrich Chemie) et un cytomètre en flux (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA)

Détection de la surface cellulaire Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) seront colorées pendant 30 min à 40 degrés Celsius avec différentes combinaisons de phycoérythrine (PE) - cyanine (Cy) anti-cluster de différenciation (CD) 3 anticorps monoclonal (anticorps de souris (mAb ), immunoglobuline G 1 (IgG1)), mAb anti-groupe de différenciation (CD)56 conjugué à PE (souris B159, IgG1) et anti-tueur naturel conjugué à l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) groupe 2, membre D (NKG2D) AcM (5C6). Les anticorps correspondants aux isotypes de souris conjugués FITC, PE et PE-Cy seront utilisés pour établir des contrôles négatifs pour chaque classe d'anticorps utilisée.

Les échantillons de cellules colorées seront analysés par cytométrie en flux à l'aide du cytomètre en flux FACSCalibur (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA).

Détection de la cytokine Interleukine (IL)-1 bêta (β) et de la protéine de choc thermique (HSP) 70, 27.

Pour la détermination quantitative des concentrations d'IL-1 β humaine dans le plasma, le kit ELISA d'IL-1 humain (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) sera utilisé.

Pour la détermination quantitative des protéines de choc thermique (HSP) 70 et 27 dans le plasma, le kit ELISA haute sensibilité HSP 70 et le kit ELISA HSP 27 seront utilisés.

Détection de la pentraxine 3 (PTX 3) et de la procalcitonine Pour la détermination quantitative des concentrations humaines de pentraxine 3 (PTX) et de procalcitonine dans le plasma, un kit ELISA spécifique sera utilisé.