ERCP-induceret og ikke-ERCP-induceret akut pancreatitis: to forskellige kliniske og immunologiske enheder?

PROTOKOL:

Alle patienter med indikation for endoskopisk retrograd kolangiopankreatografi (ERCP) vil blive forberedt til ERCP efter følgende protokol: de vil blive instrueret i ikke at spise 4 til 6 timer før proceduren. Umiddelbart før proceduren vil de blive administreret med Diclophenac Sodium 100 mg suppositorier. En time før proceduren vil 10 ml blodprøve og urinprøve blive udtaget og analyseret i laboratorielokaler indbygget i University Hospital Center Rijeka for følgende parametre: værdier af amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtest og nyrefunktion. 4-6 timer efter at ERCP er udført, vil 10 ml blodprøve blive taget og analyseret i laboratorielokaler indbygget i University Hospital Center Rijeka for følgende parametre: værdier af amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtest og nyrefunktion .

24 timer efter proceduren vil alle patienter blive udtaget 30 ml hepariniseret perifert venøst ​​blod- og urinprøve. 10 mL vil blive undersøgt i Afdelingen for Laboratoriemedicin, Klinisk Hospitalscenter for følgende parametre: værdier af amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtest og nyrefunktion. Urinprøve opsamlet efter proceduren vil blive brugt til at evaluere amylaseniveauer. Andre 20 mL blodprøver vil blive sendt til Institut for Fysiologi og Immunologi, School of Medicine, hvor immunologisk analyse vil blive udført. Alle patienter, der har gennemgået ERCP, vil blive opdelt i to grupper. Den første gruppe (PEP-gruppen) vil blive lavet af patienter, der udviklede akut pancreatitis efter ERCP. Efter klinisk og laboratoriebekræftelse af akut pancreatitis i henhold til European Society of Gastrointestinal Endoscopy (ESGE) retningslinjer for post-ERCP pancreatitis, vil blive overvåget yderligere under hospitalsindlæggelse med henblik på evaluering af sygdommens sværhedsgrad. Sværhedsgraden af ​​sygdommen vil blive vurderet i henhold til Cotton-kriterierne for sværhedsgraden af ​​post-ERCP pancreatitis. Gruppe af patienter, der gennemgik ERCP, men som ikke udviklede akut pancreatitis inden for 24 timer efter proceduren, vil ifølge ESGE-retningslinjerne blive brugt som kontrolgruppe (ikke-PEP-gruppe).

Alle patienter med akut pancreatitis i henhold til Atlanta-kriterier indlagt gennem Akutafdelingen vil blive taget 30 ml hepariniseret perifert veneblod og urinprøve 24 timer efter, at de kliniske symptomer er startet (øvre mavesmerter stråler ofte igennem til ryggen). 10 mL af indsamlede blodprøver vil blive undersøgt i Afdelingen for Laboratoriemedicin, Klinisk Hospitalscenter for følgende parametre: værdier af amylase i serum og urin og lipase i serum, leverenzymtest og nyrefunktion. Andre 20 mL blodprøver vil blive sendt til Institut for Fysiologi og Immunologi, School of Medicine, hvor immunologisk analyse vil blive udført. Denne gruppe patienter vil blive overvåget yderligere under hospitalsindlæggelse for at vurdere sværhedsgraden af ​​sygdommen. Sværhedsgraden af ​​sygdommen vil blive vurderet i henhold til Atlanta-kriterierne.

METODER OG MATERIALER

Laboratorieparametre

For hver patient, der er inkluderet i undersøgelsen, vil blod- og urinanalyse blive udført i Institut for Laboratoriemedicin, Klinisk Hospitalscenter Rijeka. Grundlæggende hæmatologiske test vil omfatte: totalt blodtal - en optælling af det samlede antal røde blodlegemer, hvide blodlegemer og blodplader til stede i blodet, værdier af hæmoglobin og hæmatokrit. Biokemisk analyse af blodserum vil omfatte: værdier af amylase og lipase i serum, natrium, kalium, glucose, leverenzymer (aspartataminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALT), Gama-glutamyltransferase (GGT), alkalisk fosfatase (ALP) ) direkte og indirekte bilirubin, nyrefunktion (serumurinstof og kreatinin, estimeret glomerulær filtration (eGFR)), C-reaktivt protein og syre-base status i arterielt blod.

Immunologiske metoder

For hver patient, der er inkluderet i undersøgelsen, vil immunologisk analyse af blodprøver (24 timer efter proceduren eller symptomernes begyndelse) blive udført i Institut for Fysiologi og Immunologi, School of Medicine i Rijeka, Kroatien.

Isolering af mononukleære celler fra perifert blod. Tyve milliliter perifert blod vil blive erhvervet i Vacutainer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), overlejret på Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norge) og centrifugeret (20 minutter ved 600 g). Efter centrifugeringen vil cellerne fra grænsefladen blive opsamlet og vasket to gange i Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium (Auckland, NZ) og straks brugt til yderligere eksperimentel procedure. Cellernes levedygtighed var >95% vil blive vurderet med propidiumiodid 0,5 mg/ml/106 celler (Sigma-Aldrich Chemie) og et flowcytometer (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA)

Påvisning af celleoverflade Mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) vil blive farvet i 30 minutter ved 40 grader Celsius med forskellige kombinationer af Phycoerythrin (PE) - Cyanin (Cy) anti-cluster of differentiation (CD) 3 monoklonalt antistof (muse antistof (mAb) ), Immunoglobulin G 1 (IgG1)), PE-konjugeret anti-klynge af differentiering (CD)56 mAb (mus B159, IgG1) og fluorescein isothiocyanat (FITC)-konjugeret anti-naturlig dræber gruppe 2, medlem D (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- og PE-Cy-konjugerede muse-isotype-match-antistoffer vil blive brugt til at indstille negative kontroller for hver klasse af anvendt antistof.

Farvede celleprøver vil blive analyseret ved flowcytometri ved hjælp af FACSCalibur flowcytometer (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA).

Påvisning af cytokin Interleukin (IL)-1 beta (β) og varmechokprotein (HSP) 70, 27.

Til den kvantitative bestemmelse af humane IL-1 β-koncentrationer i plasma vil Human IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Kit blive brugt.

Til den kvantitative bestemmelse af varmechokprotein (HSP) 70 og 27 i plasma, vil HSP 70 High sensitivity ELISA Kit og HSP 27 ELISA kit blive brugt.

Påvisning af pentraxin 3 (PTX 3) og procalcitonin Til kvantitativ bestemmelse af human pentraxin 3 (PTX) og procalcitonin koncentrationer i plasmaspecifikke ELISA Kit vil blive brugt.