ERCP által kiváltott és nem ERCP által kiváltott akut hasnyálmirigy-gyulladás: két különböző klinikai és immunológiai entitás?

JEGYZŐKÖNYV:

Minden endoszkópos retrográd cholangiopancreatography (ERCP) indikációval rendelkező beteget fel kell készíteni az ERCP-re a következő protokoll szerint: utasítják őket, hogy a beavatkozás előtt 4-6 órával ne egyenek. Közvetlenül a beavatkozás előtt Diclophenac Sodium 100 mg-os kúpokkal kell beadni. A beavatkozás előtt egy órával 10 ml vér- és vizeletmintát veszünk, és a Rijekai Egyetemi Kórház Központjában található laboratóriumban megvizsgáljuk a következő paramétereket: amiláz szérum és vizelet és lipáz értékek a szérumban, májenzim tesztek és veseműködés. 4-6 órával az ERCP elvégzése után 10 ml vérmintát vesznek, és a Rijekai Egyetemi Kórház Központjában található laboratóriumban elemzik a következő paramétereket: amiláz és vizelet, valamint lipáz értékek a szérumban, májenzim tesztek és vesefunkció .

24 órával a beavatkozás után minden betegnek 30 ml heparinizált perifériás vénás vért és vizeletmintát veszünk. 10 ml-t a Klinikai Kórházi Központ Laboratóriumi Osztályán megvizsgálnak a következő paraméterek tekintetében: amiláz és vizelet, valamint lipáz értékek a szérumban, májenzim tesztek és veseműködés. Az eljárás után gyűjtött vizeletmintát használjuk fel az amiláz szintjének értékelésére. További 20 ml vérmintát az Orvostudományi Kar Élettani és Immunológiai Osztályára küldenek, ahol immunológiai elemzést végeznek. Az ERCP-n átesett összes beteget két csoportra osztják. Az első csoport (PEP csoport) olyan betegekből áll, akiknél akut hasnyálmirigy-gyulladás alakult ki ERCP-t követően. Az akut hasnyálmirigy-gyulladás klinikai és laboratóriumi megerősítése után az Európai Gasztrointesztinális Endoszkópiai Társaság (ESGE) az ERCP utáni hasnyálmirigy-gyulladásra vonatkozó iránymutatásai szerint a kórházi kezelés során a betegség súlyosságának értékelése céljából további monitorozásra kerül sor. A betegség súlyosságát az ERCP utáni hasnyálmirigy-gyulladás súlyosságára vonatkozó Cotton-kritériumok szerint értékelik. Azon betegek csoportja, akik ERCP-n estek át, de nem alakult ki akut hasnyálmirigy-gyulladás az eljárást követő 24 órán belül, az ESGE irányelveinek megfelelően, kontrollcsoportként (nem PEP csoport).

A sürgősségi osztályon felvett, Atlanta kritériumok szerint akut hasnyálmirigy-gyulladásban szenvedő betegektől 30 ml heparinizált perifériás vénás vér- és vizeletmintát vesznek 24 órával a klinikai tünetek (gyakran a hátba sugárzó felső hasi fájdalom) megjelenése után. 10 ml vérmintát a Klinikai Kórházi Központ Laboratóriumi Orvostudományi Osztályán vizsgálnak meg a következő paraméterek tekintetében: amiláz szérum és vizelet és lipáz értékek a szérumban, májenzim tesztek és vesefunkció. További 20 ml vérmintát az Orvostudományi Kar Élettani és Immunológiai Osztályára küldenek, ahol immunológiai elemzést végeznek. Ezt a betegcsoportot a kórházi kezelés során tovább monitorozzák a betegség súlyosságának értékelése céljából. A betegség súlyosságát az atlantai kritériumok szerint értékelik.

MÓDSZEREK ÉS ANYAGOK

Laboratóriumi paraméterek

Minden egyes vizsgálatba bevont beteg esetében vér- és vizeletvizsgálatot végeznek a Rijekai Klinikai Kórház Központ Laboratóriumi Osztályán. Az alapvető hematológiai vizsgálatok a következőket tartalmazzák: teljes vérkép – a vérben jelenlévő vörösvértestek, fehérvérsejtek és vérlemezkék teljes számának számlálása, a hemoglobin és a hematokrit értéke. A vérszérum biokémiai elemzése a következőket tartalmazza: amiláz és lipáz értéke a szérumban, nátrium, kálium, glükóz, májenzimek (aszpartát-aminotranszferáz (AST), alanin-aminotranszferáz (ALT), gama-glutamil-transzferáz (GGT), alkalikus foszfatáz (ALP) ) direkt és indirekt bilirubin, vesefunkció (szérum karbamid és kreatinin, becsült glomeruláris filtráció (eGFR)), C-reaktív fehérje és az artériás vér sav-bázis állapota.

Immunológiai módszerek

Minden vizsgálatba bevont beteg esetében a vérminták immunológiai elemzését (24 órával a beavatkozás vagy a tünetek megjelenése után) végzik el a horvátországi Rijeka Orvostudományi Karának Élettani és Immunológiai Osztályán.

Perifériás vér mononukleáris sejtek izolálása Húsz milliliter perifériás vért veszünk a Vacutainerben (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NY), ráfektetjük Lymphoprepre (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norvégia), és centrifugáljuk (20 perc 600 g-vel). A centrifugálás után a határfelületről származó sejteket összegyűjtjük és kétszer mossuk Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 táptalajban (Auckland, NZ), és azonnal felhasználjuk a további kísérleti eljárásokhoz. A sejtek életképessége >95%, 0,5 mg/ml/106 sejt propidium-jodiddal (Sigma-Aldrich Chemie) és áramlási citométerrel (FACSCalibur, Becton Dickinson, San Jose, USA) értékeljük.

A sejtfelszín kimutatása A perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC) 30 percig festik 40 Celsius-fokon a fikoeritrin (PE) - cianin (Cy) differenciálódási klaszter (CD) 3 monoklonális antitest (egér antitest (mAb) különböző kombinációival. ), immunglobulin G 1 (IgG1), PE-konjugált differenciálódási klaszter (CD)56 mAb (egér B159, IgG1) és fluoreszcein-izotiocianát (FITC) konjugált anti-természetes gyilkos csoport 2, D tag (NKG2D) mAb (5C6). FITC-, PE- és PE-Cy-konjugált egér izotípus-egyező antitesteket használunk a negatív kontrollok beállításához az egyes használt antitest-osztályokhoz.

A megfestett sejtmintákat áramlási citometriával elemezzük FACSCalibur áramlási citométerrel (Becton Dickinson & Co, San Jose, USA).

Citokin Interleukin (IL)-1 béta (β) és hősokkfehérje (HSP) kimutatása 70, 27.

A plazma humán IL-1 β-koncentrációinak kvantitatív meghatározásához Humán IL-1 ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) készletet kell használni.

A plazmában lévő hősokk-fehérje (HSP) 70 és 27 mennyiségi meghatározásához a HSP 70 High Sensitivity ELISA Kit és a HSP 27 ELISA készletet használják.

A pentraxin 3 (PTX 3) és a prokalcitonin kimutatása A humán pentraxin 3 (PTX) és a prokalcitonin koncentrációinak kvantitatív meghatározásához plazmaspecifikus ELISA Kitet kell használni.