2型糖尿病患者における大血管障害に関連する遺伝子多型
中国東北部の 2 型糖尿病性大血管症患者における HLA-DRB1*04 対立遺伝子の多型分析
調査の概要
詳細な説明
中国および海外で真性糖尿病の分子病因を調べる以前の研究は、主に HLA と 1 型真性糖尿病 (DM) との関係に焦点を当てていました (1-3)。 2型DMの遺伝は複雑であるため、2型DMとHLAの相関関係を研究した研究者はほとんどいません。 近年、糖尿病患者における冠状動脈性心疾患 (CHD) の発症は、糖尿病性大血管症の単なる合併症ではないことが示唆されています。 CHD と糖尿病性大血管症は、いくつかの遺伝的関連を共有しています。 以前の研究では、特定の HLA*DRB1*04 サブタイプが心血管疾患のリスク増加と関連していることが実証されています。
実験方法: ゲノム DNA 抽出のために、すべての患者から 3 ～ 5ml の静脈血サンプルを採取しました。 EDTAを使用して凝固を防ぎました。
PCR増幅の手順は次のとおりです。96°Cで100秒間の変性、63°Cで60秒間のアニーリング、1サイクル。 96°C で 10 秒間の変性、63°C で 60 秒間のアニーリング、9 サイクル。 96°Cで10秒間の変性、59°Cで30秒間のアニーリング。 72°C で 30 秒間延長、20 サイクル。 4℃を維持。 2.5% アガロースゲル電気泳動で臭化エチジウムで染色された PCR 産物の分析。 バンドは、紫外光と生物イメージング システムを使用して観察されました。
統計的方法：Hardy-Weinberg 平衡との一致度は、χ2 検定を使用して決定されました。 ＣＲＰレベル（Ｍ±ｓ）の比較のためにｔ検定を採用し、対立遺伝子頻度を比較するためにχ２検定を実施した。 相対リスク率（RR）は、（遺伝子を持つ患者の数×遺伝子を持たない対照群の人数）を（遺伝子を持つ対照群の人数×遺伝子を持たない患者の数）で割ったものとして計算されました。 PC は、χ2 > 3.84 の場合、フィッシャーの方法を使用して計算されました。
研究の種類
入学 (実際)
参加基準
適格基準
就学可能な年齢
健康ボランティアの受け入れ
受講資格のある性別
サンプリング方法
調査対象母集団
説明
包含基準:
- 動的心電図および超音波心電図によって診断された臨床的CHD（狭心症、心筋梗塞など）;
- -冠動脈造影検査によって確認された冠動脈アテローム性動脈硬化;
- 脳CTで診断された脳梗塞;
- ドップラー超音波検査で測定された総頸動脈内膜 - 中膜の厚さ（IMT）≥1.2 mm;
- 下肢動脈の広範囲にわたる不規則な狭窄 (直径 < 3mm) または部分的な閉塞。
除外基準:
- 年齢 < 20 歳
- 年齢 > 60 歳
研究計画
研究はどのように設計されていますか？
デザインの詳細
コホートと介入
グループ/コホート |
介入・治療 |
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グループA
糖尿病の家族歴のない健康な献血者150人
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糖尿病の家族歴のない150人の健康な献血者がこの研究に登録されました。
他の名前：
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グループB
合併症のない 2 型 DM の 200 例 (グループ B)、男性 62 人、女性 108 人、年齢 29 ～ 53 歳、平均年齢 42 ± 9 歳
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合併症のない 2 型 DM の 200 例が研究に登録されました。
他の名前：
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グループC
大血管症の合併症を伴う 2 型 DM の 120 例 (グループ C) には、70 人の男性と 50 人の女性がおり、年齢は 40 ～ 53 歳で、平均年齢は 47 ± 6 歳でした。
グループCの被験者のうち、65人がCHDを患っていました。 55 人の患者が脳血管疾患 (CVD) を患っていました。 30人の被験者は、末梢血管疾患（PVD）とCHDの組み合わせを持っていました
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大血管症の合併症を伴う 2 型糖尿病の 120 例が研究に登録されました。
グループCの被験者のうち、65人がCHDを患っていました。 55 人の患者が脳血管疾患 (CVD) を患っていました。 30人の被験者は、末梢血管疾患（PVD）とCHDの組み合わせを持っていました。
他の名前：
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この研究は何を測定していますか？
主要な結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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対立遺伝子頻度のテスト
時間枠：採用時
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全血サンプルからのゲノム DNA の抽出には、市販のキット (PEL-FREEZ Inc.、米国) を使用しました。
HLA-DRB1*04 対立遺伝子の 32 対の配列特異的プライマー (SSP) は One Lambda, Inc. (米国) から購入し、Taq 酵素は Promega Corp. (米国) から購入しました。
PCR-SSP 技術を使用して、各被験者の HLA-DRB1*04 対立遺伝子を決定しました。
Applied Biosystems Inc.（米国）製の5700 PCRサーマルサイクラーを用いて遺伝子を増幅した。
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採用時
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二次結果の測定
結果測定 |
メジャーの説明 |
時間枠 |
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血清CRP（C反応性タンパク質）値の評価
時間枠：採用時
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市販の 96 ウェル プレート ELISA アッセイ キット (introassay CV 1.7% ~ 3.9%、
インターアッセイ CV 2.8%~5.1%)
血清中のhs-CRPを定量するために使用されました（DSL Inc.、USA）。
すべてのサンプルは二重に評価されました。
吸光度 (OD) は、BIO-RAD2550 マイクロウェル プレート リーダー (米国) を使用して測定されました。
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採用時
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協力者と研究者
捜査官
- 主任研究者：Nan Ma, Master、First Affiliated Hospital of Harbin Medical University
研究記録日
主要日程の研究
研究開始
一次修了 (実際)
研究の完了 (実際)
試験登録日
最初に提出
QC基準を満たした最初の提出物
最初の投稿 (見積もり)
学習記録の更新
投稿された最後の更新 (見積もり)
QC基準を満たした最後の更新が送信されました
最終確認日
詳しくは
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