動脈瘤性くも膜下出血患者における全身麻酔薬誘発神経毒性の酵素的評価

各介入（手術または血管内コイリング）の下で、16 人の患者が研究に含まれます。 対象基準を満たす合計 32 人の患者が研究に採用されます。 患者は、コンピュータが生成した麻酔維持アルゴリズムを使用して、プロポフォール (グループ P)、イソフルラン (グループ I)、セボフルラン (グループ S)、またはデスフルラン (グループ D) の投与を受ける 4 つのグループに無作為に割り付けられます。

手術または血管内コイリングは、麻酔維持に使用される麻酔薬について知らされていない経験豊富な神経外科医または放射線科医によって行われます。 手術前に麻酔前検査を実施します。 患者は徹底的に検査され、すべての調査が検討されます。 患者の近親者から書面によるインフォームドコンセントが得られます。

麻酔プロトコル:

定期的な非侵襲性モニターが患者に取り付けられます。 これには、非観血的血圧 (NIBP)、心拍数 (HR)、心電図検査 (ECG)、パルスオキシメトリー (SpO2)、呼気終末二酸化炭素 (EtCO2)、状態エントロピー (SE)、および尿量が含まれます。 すべての患者には、10〜15 ml/kgの生理食塩水が事前に負荷されます。フェンタニルは、導入前に2μg/kgの用量で静脈内投与され、続いて点滴として0.5〜2μg/kg/時間投与されます。 4 つのグループすべての患者には、言語反応が失われるまで漸増されたプロポフォール 1 ～ 2 mg/kg が投与されます。 気管挿管を容易にするために、ベクロニウム 0.1 mg/kg が投与されます。 リグノカイン 1.5mg/kg を喉頭鏡検査の 120 秒前に投与します。 血圧の心拍数モニタリングと血液ガス分析のために、麻酔導入後に動脈カテーテルが留置されます。 患者は、グループ割り当てに従って、50/50% の酸素/空気とともに維持されます。 BIS モニタリングは、すべてのグループで同等の麻酔深度を維持するために使用され、SE を 40 ～ 60 の範囲に保つように漸増されます。ベクロニウムは、神経刺激時のけいれんを 2 回未満に維持するために断続的に投与されます。 強制空気加温ブランケットを使用して体温を維持します。

手術中の液体として生理食塩水を使用します。 PaCO2 は約 32 ～ 36 mmHg に維持されます。 神経筋遮断は、ネオスチグミン 50 μg /kg とグリコピロレート 10 μg /kg の組み合わせで逆転します。 その後、気管が抜管されます。

抜管できない患者は、待機的人工呼吸器のサポートのために脳神経外科集中治療室に移送されます。

術中の血行力学的モニタリング、一時的なクリッピング時間、および動脈瘤破裂の発生率が記録されます。 硬膜反射時の脳の膨らみが注目されます。 患者の状態は、手術終了時に抜管と神経学的状態の観点から評価されます。 GCS。

研究変数 -

術前:

患者の人口統計データ、発作の日、入院の日、手術の日、WFNS、フィッシャーグレード、および併存疾患が記録されます。 GCS を含む神経学的検査と術前の神経学的欠損の有無も記録されます。

内部工作員:

心拍数（HR）、収縮期血圧（SBP）、平均動脈圧（MAP）、パルスオキシメトリー（SpO2）、体温、呼気終末二酸化炭素（EtCO2）は、導入時、挿管時、切開時、処置時に記録されます。ヘッドピン、骨弁反射、硬膜反射、クリッピング、硬膜閉鎖、皮膚閉鎖、および麻酔停止前。 患者の心拍数と血圧は可能な限りベースラインに近く維持されます。 ベースライン値の 30% を超える持続的な血圧上昇は術中高血圧とみなされます。 MAP < 70 mmHg または SBP < 90 mmHg の場合、低血圧が考慮されます。 高血圧または低血圧の管理は担当麻酔科医の裁量に委ねられます。

脳弛緩スコアリングは、4 点スケールを使用して骨弁反射後に行われます。 一時的なクリッピング時間、術中の動脈瘤破裂、術中の静脈内輸液投与、失血、尿量が記録されます。

酵素の研究と推定のためのプロトコル:

患者のベースライン脳脊髄液 (CSF) および血清血液サンプルが収集されます。 ベースラインCSFは、血管けいれんなどのSAHに関連する合併症を予防し、SAHの排出を促進するための手段として、介入前に留置された腰部くも膜下カテーテルを介して収集されます。 静脈穿刺が行われ、2 ～ 3 ml の血液サンプルが血清用/血漿用 EDTA 用のプレーンバイアルに収集されます。2 番目の CSF および血清血液サンプルは、1 時間の麻酔にさらされた後に収集されます。 3 番目のサンプルは、介入の完了後、または麻酔薬の中止後のいずれか早い方で収集されます。

カスパーゼ 3 酵素レベルは、プレコートされた抗原ウェルと既知の標準を備えた定量 ELISA キットを使用して、二重抗体サンドイッチ技術によって推定されます。

サンプルの収集と保管 - 血液サンプルは普通のバイアル/バキュテナーに収集されます。 CSFサンプルは凍結バイアルに収集されます。 血液サンプルは室温で 1 時間放置して凝固させます。 普通のバキュテナー内の凝固した血液は、2000 rpm で 15 分間遠心分離され、血清が分離されます。 血清はピペットで採取されて凍結バイアルに入れられます。 すべてのサンプルは、さらなる分析まで直ちに -80 ℃で保存されます。

カスパーゼ 3 酵素の推定 酵素評価では次の手順に従います。

1. 40℃で保管したELISAキットは、試験を行う20分前に冷蔵庫から取り出して室温に平衡させます。
2. 既知の値を有する異なる濃度のヒトカスパーゼ 3 標準および未知の値を有する試験サンプルが、プレコーティングされたマイクロプレートのコーティングされたウェルに追加されます。
3. ビオチン化ヒトカスパーゼ3抗体液、酵素結合液、発色試薬は使用30分前に調製
4. Elisaプレートは、ウェルに350μlの洗浄緩衝液を加えることによって3回洗浄され、洗浄の間に吸着性ペーパータオル上で乾燥される。
5. ビオチン化ヒトカスパーゼ 3 液体が各ウェルに追加されます。
6. ウェルは、上記のステップ 4 で説明したように 3 回洗浄されます。
7. 酵素複合体液体がマイクロプレートの個々のウェルに追加されます。
8. ウェルは、上記のステップ 4 および 6 で説明したように 3 回洗浄されます。
9. 発色試薬 (基質溶液) を添加し、続いて停止溶液を添加します。
10. 光学密度は、マイクロプレート ELISA リーダーを使用して 450nm で測定されます。
11. 未知のサンプルの値は、既知の濃度に対して既知の標準の光学濃度をプロットすることによって生成された標準曲線から読み取られます。