Ферментативная оценка нейротоксичности, индуцированной общей анестезией, у пациентов с аневризматическим субарахноидальным кровоизлиянием

По каждому вмешательству (операция или эндоваскулярная спираль) в исследование будет включено 16 пациентов. Всего в исследование будет включено тридцать два пациента, отвечающих критериям включения. Пациенты будут рандомизированы в четыре группы для получения пропофола (группа P), изофлурана (группа I), севофлюрана (группа S) или десфлюрана (группа D) с использованием созданного компьютером алгоритма поддержания анестезии.

Операция или эндоваскулярная спираль будет проводиться опытным нейрохирургом или радиологом, который не знает, какой анестетик используется для поддержания анестезии. Перед вмешательством проводится преданестезиологическое обследование. Пациент будет тщательно обследован, и все исследования будут пересмотрены. Письменное информированное согласие будет получено от ближайших родственников пациента.

ПРОТОКОЛ АНЕСТЕЗИИ:

К пациентам будут прикреплены обычные неинвазивные мониторы. Он будет включать неинвазивное артериальное давление (НИАД), частоту сердечных сокращений (ЧСС), электрокардиографию (ЭКГ), пульсоксиметрию (SpO2), концентрацию углекислого газа в конце выдоха (EtCO2), энтропию состояния (SE) и диурез. Все пациенты будут предварительно нагружены 10-15 мл/кг физиологического раствора. Фентанил будет вводиться внутривенно в дозе 2 мкг/кг до индукции, а затем 0,5-2 мкг/кг/час в виде инфузии. Пациентов во всех 4 группах будут индуцировать пропофолом в дозе от 1 до 2 мг/кг с титрованием до потери вербального ответа. Для облегчения интубации трахеи вводят векуроний 0,1 мг/кг. Лидокаин 1,5 мг/кг вводят за 120 секунд до ларингоскопии. Для мониторинга кровяного давления и анализа газов крови после индукции анестезии будет установлен артериальный катетер. Пациенты будут поддерживаться в соответствии с распределением по группам вместе с 50/50% кислородом/воздухом. Мониторинг BIS будет использоваться для поддержания сопоставимой глубины анестезии во всех группах и будет титроваться, чтобы поддерживать SE в диапазоне от 40 до 60. Векуроний будет вводиться периодически, чтобы поддерживать менее двух подергиваний при нейростимуляции. Температуру тела будут поддерживать с помощью одеяла с принудительной подачей воздуха.

В качестве интраоперационной жидкости будет использоваться физиологический раствор. PaCO2 будет поддерживаться на уровне 32-36 мм рт.ст. Нервно-мышечная блокада устраняется комбинацией неостигмина 50 мкг/кг и гликопирролата 10 мкг/кг. Впоследствии трахея будет экстубирована.

Пациенты, которые не могут быть экстубированы, будут переведены в нейрохирургическое отделение интенсивной терапии для плановой поддержки ИВЛ.

Будут отмечены интраоперационный гемодинамический мониторинг, время временного клипирования и любой случай разрыва аневризмы. Отмечается выпячивание мозга во время дурального отражения. Состояние пациента будет оцениваться в конце операции с точки зрения экстубации и неврологического статуса, т.е. ГКС.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ПЕРЕМЕННЫЕ -

ПРЕДОПЕРАЦИОННЫЙ:

Будут отмечены демографические данные пациента, день инсульта, день поступления в больницу, день операции, WFNS, оценки по шкале Фишера и любые сопутствующие заболевания. Также будет отмечено неврологическое обследование, включая GCS и наличие или отсутствие какого-либо предоперационного неврологического дефицита.

ВНУТРИ ОПЕРАТИВНОЙ:

Частота сердечных сокращений (ЧСС), систолическое артериальное давление (САД), среднее артериальное давление (САД), пульсоксиметрия (SpO2), температура и содержание углекислого газа в конце выдоха (EtCO2) будут отмечены во время индукции, интубации, разреза, применения головные штифты, отражение костного лоскута, отражение твердой мозговой оболочки, отсечение, закрытие твердой мозговой оболочки, закрытие кожи и до прекращения анестезии. Частота сердечных сокращений и артериальное давление пациентов будут поддерживаться как можно ближе к исходному уровню. Любое устойчивое повышение АД более чем на 30% от исходного уровня будет рассматриваться как интраоперационная гипертензия. Гипотензию следует рассматривать, если САД < 70 мм рт. ст. или САД < 90 мм рт. ст. Лечение гипертензии или гипотензии будет на усмотрение лечащего анестезиолога.

Оценка релаксации мозга будет проводиться после отражения костного лоскута по четырехбалльной шкале. Отмечают время временного клипирования, интраоперационный разрыв аневризмы, интраоперационное внутривенное введение жидкости, кровопотерю, диурез.

ПРОТОКОЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОЦЕНКИ ФЕРМЕНТА:

У пациента будут взяты исходные образцы спинномозговой жидкости (ЦСЖ) и сыворотки крови. Исходный уровень спинномозговой жидкости будет собираться через постоянный поясничный субарахноидальный катетер, установленный перед вмешательством, в качестве способа предотвращения осложнений, связанных с САК, таких как вазоспазм, и для облегчения дренирования САК. Будет сделана венепункция, и от 2 до 3 мл образца крови будет собрано в обычный флакон для сыворотки / ЭДТА для плазмы. Второй образец спинномозговой жидкости и сыворотки крови будет собран после 1 часа воздействия анестезии. Третий образец будет взят после завершения вмешательства или после прекращения введения анестетика, в зависимости от того, что наступит раньше.

Уровень фермента каспазы 3 можно оценить с помощью набора для количественного ELISA с предварительно нанесенными антигенными лунками и известными стандартами методом сэндвича с двойным антителом.

Сбор и хранение образцов. Образцы крови будут собираться в простые флаконы/вакутейнеры. Образцы спинномозговой жидкости будут собираться в криопробирки. Образцы крови должны свернуться при комнатной температуре в течение 1 часа. Свернувшуюся кровь в простых вакутайнерах центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут для отделения сыворотки. Сыворотку пипеткой переливали в криопробирки. Все образцы будут храниться при температуре -80°C немедленно до дальнейшего анализа.

Оценка фермента каспазы 3 Для ферментативной оценки будут выполнены следующие шаги:

1. Набор ELISA, хранящийся при 40°C, следует вынуть из холодильника за 20 минут до проведения теста, чтобы уравновесить его до комнатной температуры.
2. Различные концентрации стандартов человеческой каспазы 3 с известными значениями и тестовые образцы с неизвестными значениями будут добавлены в лунки с покрытием в предварительно покрытом микропланшете.
3. Жидкость с биотинилированным антителом к ​​каспазе 3 человека, жидкость с ферментным конъюгатом и окрашивающий реагент готовят за 30 минут до использования.
4. Планшеты для ELISA промывали 3 раза, добавляя в лунки 350 мкл промывочного буфера, и высушивали на впитывающих бумажных полотенцах между промывками.
5. Жидкость биотинилированной человеческой каспазы 3 теперь будет добавляться в каждую лунку.
6. Лунки промывали 3 раза, как описано выше на этапе 4.
7. Жидкость ферментного конъюгата теперь будет добавлена ​​в отдельные лунки микропланшета.
8. Лунки промывали 3 раза, как описано выше на этапах 4 и 6.
9. Цветной реагент (раствор субстрата) будет добавлен, а затем стоп-раствор.
10. Оптическая плотность будет измеряться при 450 нм с использованием микропланшетного считывателя ELISA.
11. Значения неизвестных образцов будут считываться со стандартной кривой, построенной путем построения графика зависимости оптических плотностей известных стандартов от их известных концентраций.